【正文】 液與對照品溶液各20μl，照含量測定項下的色譜條件測定，計算每片的溶出量。試液與試藥：鹽酸、磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。取對照品溶液、供試品溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖， 計算公式： （Ax為供試品溶液中吡啶3磺酸的峰面積，AS為對照品溶液中吡啶3磺酸的峰面積，Wx為雜質Ⅶ工作對照品的稱樣量，Px為雜質Ⅶ工作對照品含量，Vx為吡啶3磺酸對照品溶液的稀釋體積，V為供試品溶液的稀釋體積，W為供試品的稱樣量）限度：供試品溶液色譜圖中如顯與對照品溶液相對應的雜質峰，%。另取雜質Ⅶ工作對照品適量，精密稱定，作為對照品溶液。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）； 紫外檢測器（檢測波長為261nm）； 流動相：（）為流動相A，甲醇為流動相B，按下表梯度進行洗脫； 溶劑：流動相A； 流速：。 吡啶3磺酸 檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、電子分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。精密量取供試品溶液、對照溶液與雜質對照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D）試驗，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）甲醇（52：48）為流動相A，甲醇為流動相B，按上表梯度進行洗脫，檢測波長為230nm。分別取雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ工作對照品各適量，精密稱定，作為雜質對照品溶液。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）； 紫外檢測器（檢測波長為230nm）； 流動相：（）甲醇（52：48）為流動相A，甲醇為流動相B，按下表梯度進行洗脫； 溶劑：流動相A； 流速：。 檢查 有關物質 檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、電子分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。色譜條件：流動相：（）甲醇（52:48）流速：：流動相 檢測器：紫外檢測器 波長：230nm 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）具體試驗操作：在含量測定項下記錄的色譜圖中，比較供試品溶液中沃諾拉贊峰與對照品溶液中沃諾拉贊峰的保留時間。 鑒別 檢查方法：高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、電子分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。目錄 制劑的質量控制 3 質量標準 3 分析方法 4 性狀 4 鑒別 4 檢查 4 含量測定 10 分析方法的驗證 11 分析方法學驗證用樣品 11 有關物質方法學驗證 11 吡啶3磺酸方法學驗證 21 含量測定方法學驗證 28 溶出度測定方法學驗證 32 微生物限度檢查方法學驗證 44 批檢驗報告 44 雜質 45 雜質情況分析 45 雜質制定依據(jù) 46 質量標準制定依據(jù) 46 質量標準 46 5060 / 59 制劑的質量控制 質量標準檢驗項目方法放行標準限度貨架期標準限度性狀感觀本品為薄膜衣片，除去包衣后顯白色或類白色本品為薄膜衣片，除去包衣后顯白色或類白色鑒別HPLC法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)供試品溶液中沃諾拉贊峰保留時間應與對照品溶液中沃諾拉贊峰保留時間一致供試品溶液中沃諾拉贊峰保留時間應與對照品溶液中沃諾拉贊峰保留時間一致有關物質HPLC法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)雜質Ⅰ：%、雜質Ⅱ：%、雜質Ⅲ：%、雜質Ⅳ：%、雜質Ⅴ：%、雜質Ⅵ：%、其他單雜：%、其他總雜：%雜質Ⅰ：%、雜質Ⅱ：%、雜質Ⅲ：%、雜質Ⅳ：%、雜質Ⅴ：%、雜質Ⅵ：%、其他單雜：%、其他總雜：%吡啶3磺酸HPLC法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)%%含量均勻度含量均勻度檢查法（中國藥典2010年版二部附錄X E）應符合規(guī)定應符合規(guī)定溶出度溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅹ C第二法）≥90%≥85%微生物限度微生物限度檢查法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅺ J）細菌數(shù)不得過1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g細菌數(shù)不得過1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g含量HPLC法（中國藥典2010年版二部附錄V D)含（C17H16FN3SO2）%~%含（C17H16FN3SO2）%~% 分析方法 性狀 檢查方法：感觀具體試驗操作：取本品，觀察其外觀性狀。限度：本品應為薄膜衣片，除去包衣后顯白色或類白色。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。限度：供試品溶液中沃諾拉贊峰與對照品溶液中沃諾拉贊峰保留時間應一致。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。 梯度如下表：時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）01000231000452080501000601000 具體試驗操作：取本品細粉適量（約相當于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取適量，作為對照溶液。取富馬酸沃諾拉贊工作對照品及雜質工作對照品各適量，作為系統(tǒng)適用性溶液。取系統(tǒng)適用性溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質Ⅲ、Ⅰ、沃諾拉贊、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ依次出峰，理論板數(shù)按沃諾拉贊峰計算應不低于5000，且沃諾拉贊峰與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。 計算公式：已知雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ： （Ax為供試品溶液中已知雜質的峰面積，AS為對照品溶液中已知雜質的峰面積，Wx為已知雜質工作對照品的稱樣量，Px為已知雜質工作對照品含量，Vx為已知雜質對照品溶液的稀釋體積，V為供試品溶液的稀釋體積，W為供試品的稱樣量） （Ai為供試品溶液中其他單個未知雜質的峰面積，At為對照溶液主峰面積） （A總為供試品溶液中所有峰的峰面積和，A主為供試品溶液中沃諾拉贊的峰面積，為供試品溶液中已知雜質的峰面積之和，At為對照溶液中沃諾拉贊的峰面積）限度：供試品溶液色譜圖中如顯雜質峰（溶劑峰及富馬酸峰除外），雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ按外標法以峰面積計算，%；其他單個未知雜質峰面積不得大于對照溶液的主峰面積（%）；其他雜質峰面積的和不得大于對照溶液的主峰面積的4倍（%）。試液與試藥：磷酸二氫鉀、磷酸、甲醇、水。梯度如下表：時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）01000710001090910901000201000 具體試驗操作：取本品細粉適量（約相當于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D）試驗，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）為流動相A，甲醇為流動相B，按上表梯度進行洗脫，檢測波長為261nm。 溶出度檢查方法：溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅹ C第二法） 高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：溶出儀、溫度計、高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）； 紫外檢測器（檢測波長為230nm）； 流動相：（）甲醇（52:48）； 溶劑：； 流速：。 計算公式：（A供為供試品溶液的主峰面積；A對為對照品溶液主峰面積；M對為對照品的稱樣量，mg；T對為對照品的含量；V對為對照品溶液的稀釋體積；V供為供試品溶液的稀釋體積；X為標示量，10mg或20mg）限度：不得低于標示量的85%。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。 具體試驗操作： 供試品溶液：取本品1片，置100ml量瓶（10mg規(guī)格）或200ml量瓶（20mg規(guī)格）中，加流動相適量，振搖，使充分溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。 精密量取供試品溶液和對照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。依法測定10片中沃諾拉贊的含量。其中： ，限度：應符合規(guī)定。：智能生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、電動吸引器 、薄膜過濾器等。（1）細菌、霉菌及酵母菌：供試品配制：按中國藥典（2010年版二部）微生物限度檢查法（附錄XI J）的規(guī)定，稱取供試品10g，加pH ，混勻，靜置10min，取上部澄清液體作為1：10供試液，備用。立即傾注瓊脂培養(yǎng)基15～20ml，每株菌平行制備2個平皿，待凝固后置規(guī)定溫度培養(yǎng)3～5天觀察結果，測定其菌數(shù)。供試品對照組：取1:10供試液1ml，按試驗組供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。陰性菌對照組：取1：10供試液10ml，分別加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，加入10～100cfu/ml的金黃色葡萄球菌，同試驗組方法進行試驗。在紫外光下若管內培養(yǎng)物呈現(xiàn)藍白色熒光，為MUG陽性；不呈現(xiàn)熒光，為MUG陰性。本底對照的MUG和靛基質試驗應為陰性。限度：細菌數(shù)不得過1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g 含量測定檢查方法：高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、容量瓶、移液管、燒杯、PH計。色譜條件：流動相：（）甲醇（52:48）流速：：紫外檢測器 波長：230nm 溶劑：流動相 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm） 具體試驗操作：取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于沃諾拉贊10mg），置100ml量瓶中，加流動相適量，振搖，使充分溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。計算公式：含量(%)=（A樣為供試品溶液中主峰的面積；A對為對照品溶液中主峰的面積；M對為對照品的稱樣量，mg；M樣為供試品的稱樣量，mg；T對為對照品的含量；V對為對照品溶液的稀釋體積；V樣為供試品溶液的稀釋體積；為平均片重，mg；X為標示量，10或20mg）限度：應為標示量的90%～110%。 分析方法學驗證用樣品批號規(guī)格批量（片）試制日期試制地點XA00910mg155山東富創(chuàng)醫(yī)藥科技有限公司XS15030110mg36402015030110mg36480～2015030210mg36160～2015030310mg36840～XB00120mg145XS15030220mg1800～2015030420mg18460～2015030520mg18520 ～2015030620mg18560～ 有關物質方法學驗證 有關物質檢查方法學驗證總結試驗項目驗證結果條件選擇C18柱，（）甲醇（52:48）為流動相A，甲醇為流動相B，進行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為230nm。專屬性酸、堿、高溫、氧化、光照降解雜質均與主峰分離良好，各已知雜質與相鄰峰分離良好，主峰及各已知雜質峰純度均合格；輔料及其降解產物和梯度峰不干擾本品有關物質的測定。定量限；雜質Ⅰ；雜質Ⅱ；雜質Ⅲ；雜質Ⅳ；雜質Ⅴ；雜質Ⅵ。中間精密度試驗：測得雜質Ⅰ含量RSD=%，雜質Ⅱ含量RSD=%，雜質Ⅲ含量RSD=%，雜質Ⅳ含量RSD=%，測得雜質Ⅴ含量RSD=%，雜質Ⅵ含量RSD=%，其他單雜含量RSD=%，其他總雜含量RSD=%。耐用性采用不同色譜柱，不同的流動相比例、pH、鹽濃度等檢查本品的有關物質，各已知雜質的分離度均符合要求。 有關物質檢查方法學驗證內容儀器設備島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A二極管陣列檢測器島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A紫外檢測器色譜條件選擇及溶液配制 同原料藥采用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）甲醇（52:48）為流動相A，甲醇為流動相B，進行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為230nm；。對照溶液：精密量取供試品溶液適量，作為對照溶液。系統(tǒng)適用性溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對照品及雜質工作對照品各適量，作為系統(tǒng)適用性溶液。（～13，制劑的質量控制一第65~77頁） 富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查破壞試驗結果名稱沃諾拉贊總峰面積主峰面