【正文】 （PHS3C+，成都方舟科技有限公司），以及常規(guī)玻璃器皿。雙黃連注射液中含有的黃芩苷(baicalin)化合物具有顯著的抗氧化、抗自由基、抗癌和抗炎[14]，還發(fā)現(xiàn)其具有抗肺炎衣原體所致的動(dòng)脈粥樣硬化和保護(hù)細(xì)胞的作用，對缺血再灌注損傷的大腦和心肌具有保護(hù)作用，對不同原因引起的肝損傷具有保護(hù)作用，能顯著促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，對人牙周膜成纖維細(xì)胞具有保護(hù)作用，在體外對某些寄生蟲均有明顯的抑制和殺滅作用等功效[58]，然而其穩(wěn)定性的好壞一直是社會(huì)關(guān)注的熱點(diǎn)。結(jié)論：在本次試驗(yàn)條件下，工藝Ⅱ制備雙黃連注射液的穩(wěn)定性較工藝Ⅰ制備的好，且適宜避光冷藏貯存。結(jié)果：雙黃連注射液對光和溫度均不穩(wěn)定，在自然光和避光條件下10d后，%、%、%%。正文雙黃連注射液的穩(wěn)定性研究黃杰西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶榮昌 402460摘要: 目的：通過對兩種不同方法制備的雙黃連注射液穩(wěn)定性的比較，旨在為雙黃連注射液的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。： 指導(dǎo)教師（簽名）： 年 月 日： 系（蓋章） 年 月 日說明：開題報(bào)告應(yīng)在教師指導(dǎo)下由學(xué)生獨(dú)立撰寫。2010年1月2010年3月： 完成各種因素對雙黃連注射液中黃芩苷含量影響的測定。2009年10月2009年11月：進(jìn)行開題答辯，修訂試驗(yàn)方案。，求出不同溫度下的回歸方程,由回歸方程的斜率計(jì)算各溫度下的分解速率常數(shù)(K)，進(jìn)而求得lgK，以lgK對1/T(T為絕對溫度)進(jìn)行線性回歸，求出室溫25℃時(shí)的分解速率常數(shù)K，再計(jì)算出藥物中黃芩苷的保存期[5]。①各8支5ml安瓿在室溫保存；②各8支5ml安瓿4℃保存；將上述兩種樣品分別作記號(hào)后，分別在0d,7d,15d,30d時(shí)取兩支，混勻后測pH值，顏色，澄明度和黃芩苷的含量的變化。①各8支5ml安瓿在25℃避光保存；②各8支5ml安瓿25℃不避光保存；將上述兩種樣品分別作記號(hào)后，分別在0d，3d，7d，10d時(shí)取兩支，混勻后測定pH值，顏色，澄明度和黃芩苷的含量的變化。，滴于濾紙上加1滴蒸餾水紫外燈下，呈藍(lán)色熒光，氨氣熏時(shí)呈黃綠色熒光[8]。 加樣回收率測定，然后按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下進(jìn)行黃芩苷含量測定。精密量取本品2ml置100ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度搖勻，精密量取1ml置25ml容量瓶中， mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻即得[6]。取黃芩苷對照品，105mg/ml， 104mg/ml，103mg/ml，103mg/ml，102mg/ml，102mg/ml濃度的溶液，在278nm波長處測定它們的吸收度[5]。靜置冷藏24小時(shí)后濾過，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇，然后再加乙醇，使含醇量達(dá)80%，冷藏放置2448小時(shí)后過濾，濾液調(diào)至pH=8，再過濾，接下來回收乙醇，%，加苯甲醇和吐溫80，過濾，加蒸餾水至1g/ml，再加NaCl，調(diào)至等滲，過濾加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。[4]制備雙黃連注射液Ⅱ制法：黃芩、金銀花和連翹混合，加水六倍量，浸泡30分鐘，煎煮兩次，每次60分鐘，過濾合并濾液。金銀花、連翹加水浸漬30分鐘，煎煮二次，每次1小時(shí)，分次濾過，合并濾液,(7080℃測)，放冷至40℃，緩緩加乙醇使含醇量達(dá)75％，充分?jǐn)嚢瑁o置12小時(shí)，濾取上清液，回收乙醇至無醇味，加入34倍量水，,充分?jǐn)嚢璨⒓訜嶂练?靜置48小時(shí)，濾取上清液，(7080℃測),放冷至40℃，加入乙醇使含醇量達(dá)85％，靜置12小時(shí)，濾取上清液，回收乙醇至無醇味，備用。 兩種制法的雙黃連注射液中黃芩苷的保存期。因此，本課題擬采用兩種不同方法制備雙黃連注射液，對比兩種注射液的理化性質(zhì)，穩(wěn)定性，為指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐提供一些依據(jù)。在獸醫(yī)的臨床使用中，獸用雙黃連注射液常用來治療奶牛乳房炎，仔豬黃、白痢，以及因細(xì)菌感染引起的各種炎癥，對于病毒性疾病也有很好的療效，在畜牧業(yè)生產(chǎn)中也產(chǎn)生了很大的經(jīng)濟(jì)效益。它的主要成分為黃芩苷、綠原酸、連翹酚、連翹苷、黃酮苷等[1]。由此觀之，在以后的研究中不僅要不斷挖掘黃芩苷的藥理性質(zhì)，還要注意黃芩苷在制劑中的穩(wěn)定性的研究。黃芩苷新的藥理性質(zhì)如保護(hù)大腦、心臟的缺血再灌注損傷的保護(hù)作用、各種原因引起的肝損傷的保護(hù)作用等被挖掘和發(fā)現(xiàn)，可以更好的為我國中藥治療疾病發(fā)揮作用。黃芩苷具有抗炎、抗病毒、抗氧化、清除自由基、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、抗癌等多方面的藥理作用。5．展望 黃芩作為我國歷史悠久的傳統(tǒng)中藥，其分布廣泛，資源豐富，價(jià)格低廉。結(jié)果黃芩苷、0．417 g/L，兩者的差異具有顯著性。具有清熱燥濕、瀉火解毒功效的黃芩苷、黃連素與甲硝唑一樣在體外對陰道毛滴蟲均有明顯的抑制和殺滅作用。從而推斷出黃芩苷具有體內(nèi)抗腫瘤活性，其機(jī)制與促進(jìn)小鼠NK細(xì)胞殺傷活性有關(guān)。吳維平等[22]使用乳酸脫氫酶釋放法，測定黃芩煎劑、黃芩苷注射液對小鼠NK細(xì)胞殺傷活性的影響，進(jìn)而探討黃芩苷抗腫瘤活性及其機(jī)制。主要是通過細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)下調(diào)而發(fā)揮作用，但對人乳腺癌細(xì)胞生長的抑制作用，則可能與腫瘤細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制酶2的下調(diào)有關(guān)。 抗腫瘤作用 黃芩苷能夠抑制癌細(xì)胞和正常胎兒肺二倍體細(xì)胞的增殖。DNA片段化條帶的觀察表明，黃芩苷各給藥組能有效降低ConA引起的肝細(xì)胞核DNA片段化的增加，減少ConA誘導(dǎo)的DNA梯狀條帶的出現(xiàn)，提示黃芩苷可降低血清ALT、AST含量并能保護(hù) 肝細(xì)胞核，且優(yōu)于聯(lián)苯雙酯，推測黃芩苷通過降低血清ALT和AST含量而保護(hù)肝細(xì)胞核DNA可能是其抗ConA肝損傷機(jī)制。汪曉軍等[20]采用靜脈注射刀豆蛋白(ConA)致小鼠肝損傷的動(dòng)物模型，以聯(lián)苯雙酯為對照，通過對肝損傷小鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、肝組織DNA的提取和片段化條帶的觀察，探討黃芩苷可能的保肝降酶、防止肝損傷的作用和機(jī)制。其結(jié)果顯示黃芩苷通過升高脂聯(lián)素、下調(diào)NFKB抑制炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)血脂兩個(gè)方面對AS起保護(hù)作用。免疫組化法檢測主動(dòng)脈弓處的NFKB的表達(dá)。酶法測定各組血清及肝臟中TC、TG、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白含量，主動(dòng)脈蘇丹Ⅳ 染色測AS斑塊面積，總面積，HE染色觀察主動(dòng)脈及肝臟形態(tài)學(xué)改變。體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，黃芩苷能抑制由包殼蛋白(envelope protein)介導(dǎo)的熱帶T細(xì)胞(tropic T cell)株x4與感染HIV1病毒的熱帶單核細(xì)胞株(tropic monocyte)R5的細(xì)胞融合，并能在HIV1病毒感染的早期階段阻止DNA的復(fù)制。如果預(yù)先使用黃芩苷更有效。黃芩苷是一種有效的預(yù)防和治療HIV1感染的藥物，在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其有抗HIV1活性，且未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞毒性和抑制細(xì)胞生長現(xiàn)象。如抗肺炎衣原體所致的動(dòng)脈粥樣硬化作用，對缺血再灌注損傷的大腦和心肌具有保護(hù)作用，對不同原因引起的肝損傷具有保護(hù)作用，能顯著促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，對人牙周膜成纖維細(xì)胞具有保護(hù)作用，在體外對某些寄生蟲均有明顯的抑制和殺滅作用[16]。研究表明黃芩苷的藥理活性是多方面的，它在抗菌、抗炎、清除氧自由基、減輕組織的缺血再灌注損傷、調(diào)節(jié)免疫、促進(jìn)細(xì)胞凋亡等多方面均有作用，隨著生物技術(shù)的發(fā)展以及中藥化學(xué)成分分離水平的進(jìn)步，黃芩苷在抗氧化、抗腫瘤、抗HIV 以及治療心血管疾病等方面均具有潛在的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。本方法的優(yōu)點(diǎn)在于，無需對樣品繁雜提取或衍生化，從而減少了由此帶來的誤差；NMR譜線為H2量級，能提供分子水平的結(jié)構(gòu)信息，因此有較高的分辨率；而其缺點(diǎn)是靈敏度太低。研究表明方法簡便、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方參芩洗劑的質(zhì)量控制。(r=0黃芩苷含量測定所用流動(dòng)相多采用甲醇水磷酸系統(tǒng),但磷酸用量偏大， pH值較低,（2005年版）附錄中采用甲醇水磷酸（47∶53∶），有作者采用甲醇水磷酸（50：50∶），易對色譜柱造成損害，影響使用壽命。HPLC法還可與質(zhì)譜聯(lián)用（HPLCMS）、HPLCNMR等。靈敏度高，現(xiàn)目前很多藥物都是通過該方法來進(jìn)行分析和含量測定。主要分析非極性、中等極性藥物。其主要分析極性及中等極性的分子型藥物。高效液相色譜法分為正相和反相色譜法。最后得出該方法準(zhǔn)確，簡便，適合該制劑中的黃芩苷的含量測定。以φ（C2H4O2,HAC）=36%作展開劑采用雙波長反射法鋸齒掃描，檢測波長（λ=278nm,λR=370nm）。 薄層色譜掃描法(Thinlayer chromatography scan ,TLCS) 用定波長的光照射在薄層板上，對薄層色譜有吸收紫外光或可見光的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品分析的鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定，本法具有很多優(yōu)點(diǎn)，如簡單易學(xué)，適用廣泛(可用于復(fù)雜成分分離，,未知成分的分離、檢測)，多路控效應(yīng)(可同時(shí)多個(gè)樣品分離,靈敏度高,檢測速度快)，樣品預(yù)處理簡單，精度要求不高，且同一色板上可根據(jù)被分離化合物的性質(zhì)選擇不同顯色劑或檢測方法進(jìn)行定性或定量，并可重復(fù)測定；但本法的缺點(diǎn)在于會(huì)受到各種因素的影響，如半點(diǎn)的原位定量，受鋪板質(zhì)量、點(diǎn)樣技術(shù)、展開條件、顯色等因素影響，而顯色又有顯色的均勻、靈敏、穩(wěn)定等因素影響。劉明樂等[11]用三波長分光光度法測定愈風(fēng)Ⅱ號(hào)合劑中黃芩苷的含量,分別在λ258. 0nm、λ278. 3nm、λ303. 0nm處測定吸收度，從三種組分的紫外吸收圖譜看出，混合組分的最大吸收波長與黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品的最大吸收波長相同，均在278. 3nm處。本法主要又分為常規(guī)分光光度法、導(dǎo)數(shù)光譜法(一階、二階,四階)、多波長光譜法(雙波長,三波長、多波長)、差示分光法、正交函數(shù)光譜法。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在已不局限于某一種技術(shù)的單獨(dú)使用，而是兩種或者多種技術(shù)的聯(lián)合使用，且在實(shí)踐中取得了頗為滿意的效果。其結(jié)果表明磷酸鹽緩沖液對黃芩苷的穩(wěn)定性較好。所以溶液的pH值變化都會(huì)使黃芩苷的含量下降而影響藥品質(zhì)量。通過研究發(fā)現(xiàn)，適當(dāng)控制pH值可以增強(qiáng)黃芩苷的穩(wěn)定性。經(jīng)水解后生成的黃芩素分子中具有鄰三酚羥基，易被氧化轉(zhuǎn)為醌類化合物而顯綠色，有效成分收到破壞，質(zhì)量也隨之降低。遇氧化鐵顯綠色，遇乙酸鉛生成橙紅色沉淀。[ɑ]D21+(吡啶+水)UVλMeOHmax:244nm,278nm,315nm。2．黃芩苷的理化性質(zhì)黃芩苷又名貝加靈，淡黃色細(xì)針晶其分子式為C12H18O11,其結(jié)構(gòu)式如左所示。一般常用超臨界CO2萃取法，其原理是通過調(diào)控壓力和溫度，改變超臨界CO2的密度，從而改變其對物質(zhì)的溶解能力，選擇性地萃取中藥中的某些成分，是萃取到分離可一步完成，該法可以在接近室溫的條件下萃取，適用于熱敏性成分的提取，無有機(jī)溶劑殘留，產(chǎn)品純度高，操作簡單，節(jié)能，但是缺乏足夠的溶解性而提取率不高。 超臨界流體提取法是一種近年來新興的浸提方法。郭振庫等[8] 采用具有壓力控制附件的MSP100D專用微波制樣系統(tǒng)，進(jìn)行了黃芩苷微波提取研究，結(jié)果在70％微波功率下，微波最佳提取條件為35％乙醇作溶劑，溶劑倍量30， MPa，恒壓時(shí)間30 s即可獲得好的黃芩苷提取率，而且比超聲法提取率提高近10% 。 微波提取其原理是微波是一種超高頻電磁波，在微波場中，因吸收微波能力的差異使萃取體系中的某些組分被選擇性加熱，從而使得萃取物質(zhì)從體系中分離，進(jìn)入到介電常數(shù)較小、微波吸收能力相對差的萃取劑中。郭孝武等[7] 研究了不同頻率超聲對提取黃芩苷成分的影響，比較在同一提取時(shí)間，頻率分別為20，800，110