【正文】 was better than craft I. What’s more, that could not be stored under cold and without light.Key words：Shuang Huang Lian Injection； UVVis； Baicalin； Stability1 前言雙黃連注射液是由金銀花、黃芩和連翹三味中藥精制而成，具有清熱解毒,辛涼解表的功能，用于外感風熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽痛等病癥。雙黃連注射液中含有的黃芩苷(baicalin)化合物具有顯著的抗氧化、抗自由基、抗癌和抗炎[14]，還發(fā)現(xiàn)其具有抗肺炎衣原體所致的動脈粥樣硬化和保護細胞的作用，對缺血再灌注損傷的大腦和心肌具有保護作用，對不同原因引起的肝損傷具有保護作用，能顯著促進成纖維細胞增殖，對人牙周膜成纖維細胞具有保護作用，在體外對某些寄生蟲均有明顯的抑制和殺滅作用等功效[58]，然而其穩(wěn)定性的好壞一直是社會關注的熱點。因此，本課題擬采用兩種不同方法制備雙黃連注射液，對比兩種注射液的理化性質，穩(wěn)定性，為指導生產實踐提供一些依據(jù)。2 材料和方法 試驗材料 雙波束紫外可見分光光度計（TU1901型，北京普析通用儀器有限責任公司）；恒溫水浴鍋（2004型，常州國華電器有限公司）；漩渦混合器 （XW80A型，上海青浦滬西儀器廠）；電熱恒溫鼓風干燥箱（DHG9146型，上海精宏實驗設備有限公司）；電子天平（MODL ESJ1204型，沈陽龍騰電子有限公司）；超低溫冷凍儲存箱（DWMW138型，中科美菱低溫科技有限責任公司）；旋轉蒸發(fā)儀（RE5298A型，上海亞榮生化儀器廠）；循環(huán)式多用真空泵（SHZ95型，河南鞏義市英峪予發(fā)儀器廠）；手提式壓力蒸汽滅菌器（，上海華絨醫(yī)用核子儀器有限公司）；酸度計（PHS3C+，成都方舟科技有限公司），以及常規(guī)玻璃器皿。 主要藥品及試劑兩種工藝制備的雙黃連注射液（西南大學榮昌校區(qū)中藥研究開發(fā)實驗室研制）；鹽酸（重慶川東化工（集團）有限公司化學試劑廠，編號：20060306）；氫氧化鈉（重慶川東化工（集團）有限公司化學試劑廠 ， 編號： 20020610）；苯甲醇（ 重慶川東化工（集團）有限公司化學試劑廠 ，編號： 20080209）；吐溫80（重慶川東化工（集團）有限公司化學試劑廠 ， 編號：20070503）；三氯化鐵（成都市科龍化工試劑廠， 編號： 20071215）；黃芩苷標準品（ 中國藥品生物制品檢定所，編號：110715200413）以及95%的醫(yī)用乙醇和蒸餾水。 試驗方法 雙黃連注射液的制備處方金銀花 250g黃芩 250g連翹 500g苯甲醇 10ml吐溫80 2ml加注射用水至 1000ml 參照文獻《中國中藥成方制劑》[9]規(guī)定工藝制備獸用雙黃連注射液Ⅰ制法：以上黃芩、金銀花和連翹中藥，黃芩酌予碎斷，加水煎煮二次，每次1小時，分次濾過，合并濾液，濾液用鹽酸(2mol/L)，在80℃保溫30分鐘，靜置24小時，濾過，沉淀加8倍量水，攪拌，用40%，并加等量乙醇，攪拌使溶，濾過，濾液用鹽酸(2mol/L)，60℃保溫30分鐘，靜置12小時，濾過，,加10倍量水，攪拌，用40％，%活性炭，充分攪拌，50℃保溫30分鐘，加入1倍量乙醇攪拌均勻，立即濾過，濾液用鹽酸(2mol/L)，60℃保溫30分鐘，靜置12小時，濾過，沉淀用少量乙醇洗滌后，于60℃以下干燥。金銀花、連翹加水浸漬30分鐘，煎煮二次，每次1小時，分次濾過，合并濾液，(7080℃測)，放冷至40℃，緩緩加乙醇使含醇量達75%，充分攪拌，靜置12小時，濾取上清液，回收乙醇至無醇味，加入34倍量水，充分攪拌并加熱至沸，靜置48小時，濾取上清液，(7080℃測)，放冷至40℃，加入乙醇使含醇量達85%，靜置12小時，濾取上清液，回收乙醇至無醇味，備用。取黃芩提取物，加水適量，加熱并用40%，加入金銀花、連翹提取液，加水至1000ml，%活性炭，加入苯甲醇和吐溫80，冷卻，濾過，加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。 水提醇沉法[10]制備雙黃連注射液Ⅱ制法：黃芩、金銀花和連翹混合，加水六倍量，浸泡30分鐘，煎煮兩次，每次60分鐘，過濾合并濾液。再濃縮至600ml加95%乙醇，使含醇量達60%。靜置冷藏24小時后濾過，用旋轉蒸發(fā)儀回收乙醇，然后再加乙醇，使含醇量達80%，冷藏放置2448小時后過濾，濾液調至pH=8，再過濾，接下來回收乙醇，%，加入苯甲醇和吐溫80，過濾，加蒸餾水至1g/ml，再加NaCl,調至等滲，,過濾加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得。 雙黃連注射液中黃芩苷的測定方法的建立 測定波長的確定參照文獻 [11] ，，在250350nm波長處測其紫外吸收。 標準曲線的建立 取黃芩苷對照品，105mg/ml，104mg/ml，103mg/ml，103mg/ml，102mg/ml，102mg/ml濃度的溶液，在278nm波長處測定它們的吸收度。以濃度為橫坐標(X)，吸收度為縱坐標(Y)進行線性回歸[11]。 樣品含量的測定精密量取本品2ml置100ml容量瓶中,加乙醇稀釋至刻度搖勻，精密量取1ml置25ml容量瓶中， mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻即得[12]。上述配制好的樣品溶液， mol/L鹽酸為空白液，測定其吸收度，并根據(jù)線性回歸方程計算出黃芩苷的含量。 加樣回收率試驗，，[13]，采用加樣回收法分別測得工藝Ⅰ和工藝Ⅱ%%，% % 。 黃芩苷理化性質鑒定 取樣品1ml，加蒸餾水1ml，加5%三氯化鐵試液2滴，呈藍綠色。 取樣品1滴，滴于濾紙上加1滴蒸餾水紫外燈下，呈藍色熒光，氨氣熏蒸呈黃綠色熒光[14]。 光照試驗分別取兩種灌封好的雙黃連注射液。①各8支5ml安瓿在25℃避光保存；②各8支5ml安瓿25℃不避光保存。將上述兩種樣品分別作記號后，分0d，3d，7d，10d時取兩支，混勻后測定pH值，顏色，澄明度和黃芩苷的含量[15]。 溫度影響試驗分別取灌封的雙黃連注射液。①各8支5ml安瓿在室溫保存；②各8支5ml安瓿4℃保存[10]。將上述兩種樣品分別作記號后，分別在0d，7d，15d，30d時取兩支，混勻后測pH值，顏色，澄明度和黃芩苷的含量。 經典恒溫加速試驗，分別置于60℃，70℃，80℃，90℃避光恒溫水浴槽中加熱0，1，3，5，7，9h,取出立即冷卻,終止反應，記錄雙黃連注射液的pH值，顏色，澄明度和黃芩苷含量[16]。 根據(jù)經典恒溫熱加速試驗結果，求出不同溫度下的回歸方程，由回歸方程的斜率計算各溫度下的分解速率常數(shù)(K)，進而求得lgK，以lgK對1/T(T為絕對溫度)進行線性回歸，,求出室溫25℃時的分解速率常數(shù)K，再計算出藥物中黃芩苷的保存期[11]。3 試驗結果 黃芩苷吸收波長的確定 黃芩苷在250350nm的吸收波譜如圖1，黃芩苷在278nm波長處有最大吸收，故選擇278nm為測定波長。圖1：黃芩苷的紫外掃描圖 : UV graph scan of Baicalin 標準曲線 如圖2，經回歸處理得回歸方程：Y=+， r=。102mg/ml之間呈良好的線性關系。圖2：黃芩苷的標準曲線: The standard curve of Baicalin 黃芩苷理化性質鑒定 向注射液樣品中加入5%三氯化鐵試液2滴，溶液呈藍綠色；而在紫外熒光下，溶液顯藍色熒光；樣品經氨氣熏蒸后呈黃綠色熒光。因此，通過以上顏色反應說明注射液中含有黃芩苷，結果如圖35：圖3：理化檢測結果: Detection result of physicochemical property對照工藝II工藝I圖4：紫外檢測結果對照: The testing result of UV 工藝II工藝I圖5：樣本氨氣熏蒸后紫外檢測結果: The result of UV light testing after samples smoked by ammonia gas 光照對雙黃連注射液穩(wěn)定性的影響 表1顯示，兩種不同制法制備的雙黃連注射液分別在自然光和避光條件下10d后，%，%，%%，外觀顏色幾乎沒有變化，pH值也普遍升高，說明雙黃連注射液對光不穩(wěn)定。表1：光照對雙黃連注射液穩(wěn)定性的影響Table 1: Influence of Shuang Huang Lian Injection on the stability in light條件時間/d黃芩苷含量(mg/ml)黃芩苷的相對含量/%顏色澄明度pH值照射前Ⅰ0棕紅色澄清照射前Ⅱ0棕紅色澄清避光Ⅰ3棕紅色澄清7棕紅色澄清10棕紅色澄清自然光Ⅰ3棕紅色澄清7棕紅色澄清10棕紅色澄清避光Ⅱ3棕紅色澄清7棕紅色澄清10棕紅色輕微混濁自然光Ⅱ3棕紅色澄清7棕紅色澄清10棕紅色澄清 表2所示，兩種不同制法制備的雙黃連注射液分別在室溫和4℃冷藏條件下保存30d后，%，%，%%，外觀顏色沒有變化，pH值升高，說明工藝I制備的雙黃連注射液在室溫條件下降解慢，保存較好，而工藝II制備的雙黃連注射液在冷藏條件下保存較好。表2 ：溫度對雙黃連注射液穩(wěn)定性的影響Table 2: Influence of Shuang Huang Lian Injection on the stability at the different temperature條件時間/d黃芩苷含量(mg/ml)黃芩苷的相對含量/%顏色澄明度pH值儲存前Ⅰ0棕紅色澄清儲存前Ⅱ0棕紅色澄清室溫Ⅰ7棕紅色澄清15棕紅色澄清30棕紅色澄清冷藏Ⅰ7棕紅色澄清15棕紅色澄清30棕紅色澄清室溫Ⅱ7棕紅色澄清15棕紅色澄清30棕紅色澄清冷藏Ⅱ7棕紅色澄清15棕紅色澄清30棕紅色澄清 經典恒溫加速試驗 采用恒溫加速試驗對兩種不同方法制備的雙黃連注射液中的黃芩苷含量進行了考察，結果見表3和表6。由表3可以看出，在恒溫加速條件下，隨著溫度的升高和加熱時間的延長，雙黃連注射液中的黃芩苷相對含量都在降低，說明了雙黃連注射液對熱不穩(wěn)定。表3：黃芩苷含量變化結果 單位:(mg/ml)Table 3: Changing result of content of baicalin unit: (mg/ml)T(℃)t(h)工藝Ⅰ的黃芩苷含量變化 CⅠ CⅠ% Lg(CⅠ%)工藝Ⅱ的黃芩苷含量變