惰性載體對瘤胃真菌產(chǎn)酶活性的影響畢業(yè)論文-文庫吧資料
2025-07-02 05:42本頁面
【正文】 min后迅速置于冷卻，將紫外分光光度計設(shè)置在550 nm波長處測取吸光值。固態(tài)底物和已與菌體培養(yǎng)液20 mL混合的載體混合物拌勻后裝袋，經(jīng)抽真空后置于39℃溫箱中發(fā)酵，每隔2天采樣測酶活。 試驗(yàn)設(shè)計本試驗(yàn)采用二因素試驗(yàn)設(shè)計，載體類型為珍珠巖、沸石、膨潤土，%、%、%。將已配好的2 L液體種子培養(yǎng)基分別均分于10個1725 cm封口袋中（即每袋200 mL），再把已活化的菌接種到封口袋中，仍置于39℃的溫箱中進(jìn)行傳代培養(yǎng)3天，觀察菌體生長情況，此操作依舊需要在超凈臺中進(jìn)行。右手持已取標(biāo)本的接種環(huán)伸入到瓊脂平板表面一側(cè)邊緣，利用腕力將接種環(huán)在平板上來回劃線。在超凈臺中進(jìn)行無菌接種，右手取接種環(huán)在酒精火焰上灼燒滅菌，先將環(huán)燒熱至發(fā)紅，然后將整個細(xì)金屬絲燒紅，再將接種環(huán)傾斜，沿著環(huán)向上依次燒，直到燒至可能碰到培養(yǎng)基的部分，如此返回在燒到環(huán)端，來回通過火焰數(shù)次。,5二硝基水楊酸（DNS）溶液 g于1000 mL燒杯中，加入蒸餾水500 mL，水浴加熱溶解（不超過50℃），溶解后再依次加入已稱量好的3, g、 g、 g， g，用玻璃棒攪拌至完全溶解，冷卻后定容至1000 mL棕色容量瓶內(nèi)，避光保存，放置一周后取上清液使用。 制取羧甲基纖維素鈉溶液羧甲基纖維素鈉溶液的制備，本試驗(yàn)參照王建等[6]方法， g羧甲基纖維素鈉鹽溶于100 mL pH=，待使用時需搖勻。⑦以上步驟都完成后，采用高溫高壓經(jīng)121℃滅菌15 min，常溫冷卻后備用。⑤制備無細(xì)胞瘤胃液的方法：在每天下午4點(diǎn)采取安裝永久瘤胃瘺管的嶗山奶山羊B的新鮮瘤胃液，靜置沉淀半小時后，置于4000 r/min離心機(jī)中離心25 min，取上清液于燒杯中保存在20℃冰箱中以備用。③每升緩沖液A中， g、 g、 g、磷酸二氫鉀3 g，倒入已煮沸排除氧的蒸餾水溶解備用。 表2 液體培養(yǎng)基配方（每升含量）Table Composition of culture medium (Every litres of content)成分Composition碳酸氫鈉NaHCO3葡萄糖Glucose酵母膏Yeast cream蛋白胨Pepton緩沖液ABuffer A緩沖液BButter B 無細(xì)胞瘤胃液Cellfree rumen fluid蒸餾水Distilled water含量 g g g g165 mL165 mL170 mL500 mL注：①表中所用蒸餾水需要煮沸冷卻后再使用，以便排除水中溶解的氧氣。置于立式壓力蒸汽滅菌器中經(jīng)121℃高溫高壓滅菌后倒板冷卻備用。 培養(yǎng)基的制備 種子培養(yǎng)基制備本試驗(yàn)種子培養(yǎng)基的制備參照朱崇淼[5]的方法，見表2。表1 原料常規(guī)養(yǎng)分表Table 1 Nutrients positions of materials in substrate原料 Crud material粗蛋白（%）CP粗脂肪 （%）CE中性洗滌纖維（%）NDF酸性洗滌纖維（%）ADF干物質(zhì)（%）DM玉米麩皮菌糠花生蔓固體底物注：固態(tài)底物為玉米:麩皮:菌糠:花生蔓=4:2:2:2混合后的底物。玉米粉、麩皮、菌糠、花生蔓采用德國Henneherg和Stohmann[7]飼料概略養(yǎng)分分析方案對原料的概略養(yǎng)分進(jìn)行分析。該試驗(yàn)采用二因素試驗(yàn)設(shè)計，探討不同惰性載體（珍珠巖、沸石、膨潤土）、不同添加量（%、%、%）及發(fā)酵時間對瘤胃真菌產(chǎn)羧甲基纖維素酶、β葡萄糖苷酶、微晶纖維素酶、濾紙酶酶活的影響。本試驗(yàn)參考國內(nèi)外采用生物膜技術(shù)來治理水污染的成熟的方法來進(jìn)行瘤胃真菌體外固態(tài)發(fā)酵試驗(yàn)，以求找到能夠提高酶活力的有效發(fā)酵方法。另外，瘤胃真菌所產(chǎn)纖維素降解酶的體外作用條件及飼料降解的實(shí)際作用效果也有待驗(yàn)證。瘤胃真菌是一類具有產(chǎn)較高纖維素降解酶活性的厭氧性微生物，因其能夠分泌羧甲基纖維素酶、微晶纖維素酶、β葡萄糖苷酶、木聚糖酶、果膠酶、蛋白酶、淀粉酶等多種酶類，越來越受到科研工作者的重視。菌糠是指經(jīng)栽培食用真菌菌后的廢棄物，主要含有大量可利用率低的粗纖維、木質(zhì)素和具有較高利用價值的菌絲體，還含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、碳水化合物、維生素和微量元素[4]。2010年全國食用菌產(chǎn)量突破2200萬噸，[2]。我國是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)大國，每年都會產(chǎn)生大量的農(nóng)業(yè)秸稈，而這可以很好的作為反芻動物的飼料。據(jù)估計，1010 噸[1]。 cellulase activity 引言近年來，隨著我國畜牧業(yè)的持續(xù)快速發(fā)展，畜牧生產(chǎn)對糧食的需求越來越大，這就給我國的糧食生產(chǎn)需要造成了很大的壓力，致使人畜糧食矛盾越來越突出。 supplement。綜上所述，本試驗(yàn)條件下載體為沸石、%、培養(yǎng)8天對瘤胃真菌產(chǎn)纖維素酶活最高。載體類型、添加量及載體類型與添加量互作對對微晶纖維素酶、β葡萄糖苷酶和濾紙
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