【正文】 量呈正相關(guān)。計(jì)算所得各處理過氧化氫酶活性。培養(yǎng)結(jié)束后，立即向各三角瓶中注入5ml mol/L的硫酸終止反應(yīng)，過濾。H2O2的提取：稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，%過氧化氫。：。土壤的過氧化氫酶活性，與土壤呼吸強(qiáng)度和土壤微生物活性相關(guān)，在一定程度上反應(yīng)了土壤微生物學(xué)過程的強(qiáng)度。 檢測(cè)方法 溶液中H2O2含量的測(cè)定方法定量滴定酶促反應(yīng)后剩余的過氧化氫量 適用范圍定量滴定酶促反應(yīng)后剩余的過氧化氫量 實(shí)驗(yàn)原理過氧化氫酶，又稱接觸酶，能酶促過氧化氫對(duì)各種化合物的氧化。蔗糖酶活性以單位時(shí)間（1h）、單位土壤（1g）生成的葡萄糖的質(zhì)量（mg）表示，即mg/(g上述處理在37℃恒溫下培養(yǎng)24h后，做如下處理：培養(yǎng)結(jié)束后，取出并迅速過濾。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。將三角瓶密封，置于37℃恒溫中培養(yǎng)。中生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥和2%的生物炭。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。將三角瓶密封，置于37℃恒溫中培養(yǎng)。無生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥培養(yǎng)，不加生物炭。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。在培養(yǎng)開始后的第10天、第20天、第35天、第50天測(cè)定土壤過氧化氫酶活性。8%蔗糖溶液：準(zhǔn)確稱取8g蔗糖溶于蒸餾水中，定溶到100ml。 溶液配制： Na2HPO4?2H2O溶于100ml蒸餾水中得到1/15M磷酸氫二鈉溶液， KH2PO4溶于100ml蒸餾水中得到1/15M磷酸二氫鉀溶液。按照各要求處理，將一定量土壤、所需有機(jī)肥及生物炭混勻，做好補(bǔ)水（即補(bǔ)充所加入的干燥有機(jī)肥和生物炭所需的水量），放入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。 土壤預(yù)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)將所需土壤的含水量調(diào)整到約田間持水量的60%（一般加水量為土壤量的15%到20%之間，以不粘結(jié)但很濕潤(rùn)為準(zhǔn)），將土壤容器用塑料薄膜封蓋以免水分過快損失，將塑料薄膜用針扎一些小孔，以保持氣體流通，保證土壤重要酶的活性。實(shí)驗(yàn)共采集生物炭樣本1種，所以本實(shí)驗(yàn)共351=15？個(gè)樣。實(shí)驗(yàn)過程中，密封培養(yǎng)時(shí)，為保證反應(yīng)正常進(jìn)行，需將塑料薄膜用針扎一些小孔，以保持氣體流通。用NH3N標(biāo)準(zhǔn)溶液做標(biāo)準(zhǔn)曲線，取濾液加入顯色劑待其顯色后，測(cè)定各處理NH3N生成量脲酶活性采用單位時(shí)間（h），單位質(zhì)量土壤（1g）所催化生成的NH3N的量（mg）表示，即mg/（g將三角瓶密封，置于38℃恒溫下培養(yǎng)。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。將三角瓶密封，置于38℃恒溫中培養(yǎng)。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。將三角瓶密封，置于38℃恒溫中培養(yǎng)。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。將三角瓶密封，置于38℃恒溫中培養(yǎng)。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。將三角瓶密封，置于38℃恒溫中培養(yǎng)。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，均勻加入2ml甲苯，處理15min。在培養(yǎng)開始后的第10天、第20天、第35天、第50天測(cè)定土壤過氧化氫酶活性。 溶液配制10%尿素：準(zhǔn)確稱量10g尿素溶解并定容為100ml1mol/L氫氧化鈉：準(zhǔn)確稱取4g氫氧化鈉溶解并定容為100ml檸檬酸鈉緩沖液：；；將兩溶液混勻，用1mol/，定容為200ml。按照各要求處理，將一定量土壤、所需有機(jī)肥及生物炭混勻，做好補(bǔ)水（即補(bǔ)充所加入的干燥有機(jī)肥和生物炭所需的水量），放入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。 土壤預(yù)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)將所需土壤的含水量調(diào)整到約田間持水量的60%（一般加水量為土壤量的15%到20%之間，以不粘結(jié)但很濕潤(rùn)為準(zhǔn)），將土壤容器用塑料薄膜封蓋以免水分過快損失，將塑料薄膜用針扎一些小孔，以保持氣體流通，保證土壤重要酶的活性。實(shí)驗(yàn)共采集生物炭樣本1種，所以本實(shí)驗(yàn)共351=15個(gè)樣。實(shí)驗(yàn)不能及時(shí)測(cè)定的土壤樣品在4℃保存，可認(rèn)為土壤酶活性和微生物學(xué)性質(zhì)不會(huì)發(fā)生較大變化，但不宜長(zhǎng)期儲(chǔ)存。h)。取濾液，用對(duì)照組做標(biāo)準(zhǔn)H2O2含量，測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組H2O2含量。密封處理，室溫下振蕩培養(yǎng)。破碎大顆粒后，密封處理，室溫下振蕩培養(yǎng)。高生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機(jī)肥和5%的生物炭。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，%過氧化氫。破碎大顆粒后，密封處理，室溫下振蕩培養(yǎng)。低生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%%的生物炭。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，%過氧化氫。破碎大顆粒后，密封處理，室溫下振蕩培養(yǎng)。純土壤組處理：培養(yǎng)一定量的純土壤，不加任何有機(jī)肥和生物炭。 處理設(shè)置及檢測(cè)在實(shí)驗(yàn)開始前，測(cè)定預(yù)培養(yǎng)土壤的過氧化氫酶活性，代表土壤酶活性的初始值。 溶液配制酶促反應(yīng)試劑的配制：準(zhǔn)確量取1ml的30%H2O2溶液，放入100ml的容量瓶中，稀釋至100ml，并定溶。每隔3天，補(bǔ)水一次。實(shí)驗(yàn)需要重復(fù)3次。 實(shí)驗(yàn)方法 生物炭對(duì)土壤過氧化氫酶活性影響測(cè)定 實(shí)驗(yàn)設(shè)置實(shí)驗(yàn)使用一種土壤（磚紅壤），設(shè)置三個(gè)實(shí)驗(yàn)組（低生物炭組：培養(yǎng)一定量的土壤，含有一定量的有機(jī)肥和少量的生物炭；中生物炭組：培養(yǎng)等量的土壤，含有等量的有機(jī)肥和中量（2%)的生物炭；高生物炭組：培養(yǎng)等量的土壤，含有等量的有機(jī)肥和高量（5%)的生物炭），一個(gè)純土壤組（添加等量土壤但不添加任何有機(jī)肥和生物炭），一個(gè)無生物炭組（添加等量土壤和有機(jī)肥但不添加任何生物炭），每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，共35n個(gè)樣。 有機(jī)肥的處理將有機(jī)肥料在6070℃條件下恒溫烘干，通過粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，在塑封袋中儲(chǔ)存?zhèn)溆?。?dāng)馬弗爐中溫度升高到指定溫度開始計(jì)時(shí)，2h后停止加熱，將鐵盒取出并自然冷卻到室溫。 生物炭的制備將采集后的水稻秸稈在6070℃條件下恒溫烘干12小時(shí)，烘干后的水稻秸稈通過粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎。因此，采集三亞常見的新鮮廢棄水稻秸稈，經(jīng)過進(jìn)一步的處理制作本實(shí)驗(yàn)的生物炭并做好密封保存以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。整合三方面的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，通過Excel作圖，研究在不同量生物炭下施用有機(jī)肥土壤中重要酶的活性情況，探索生物炭對(duì)土壤和土壤酶產(chǎn)生積極影響的最適量。在恒溫條件下培養(yǎng)24h。第三方面：測(cè)定在不同量生物炭下土壤蔗糖酶活性的變化情況。在恒溫條件下培養(yǎng)5h。第二方面：測(cè)定在不同量生物炭下土壤脲酶活性的變化情況。第一方面：測(cè)定在不同量生物炭下土壤過氧化氫酶活性的變化情況。 研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線 研究?jī)?nèi)容本次實(shí)驗(yàn)研究生物炭對(duì)施用有機(jī)肥土壤重要酶活性的影響，因此將實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)方面進(jìn)行，每個(gè)方面分為5組進(jìn)行，每組重復(fù)三次。目前生物炭在環(huán)境、生態(tài)等領(lǐng)域作用機(jī)理的基礎(chǔ)研究方面鮮有報(bào)道，還缺少大規(guī)模試驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)的支持，在土壤生境中的地位與作用方面的研究才剛剛起步，具體的作用機(jī)理與貢獻(xiàn)還不清楚，尤其是在國(guó)內(nèi)，亟待加強(qiáng)生物炭在土壤方面的基礎(chǔ)理論和研究技術(shù)，拓寬研究領(lǐng)域。 研究的目的與意義測(cè)定不同量生物炭對(duì)施用有機(jī)肥的磚紅壤中重要酶活性的變化情況，探索適量生物炭對(duì)磚紅壤中重要酶活性的積極影響。但目前中國(guó)關(guān)于生物炭在土壤酶影響方面的研究，所做的實(shí)驗(yàn)是相對(duì)較少，主要還是針對(duì)國(guó)外所做的成果進(jìn)行研究和歸納。國(guó)內(nèi)也有做過關(guān)于生物炭的類似研究，發(fā)現(xiàn)在土壤中施用生物炭后土壤微生物量碳水平得到了顯著提高，且其對(duì)土壤微生物量碳的影響隨生物炭的施用量增加而增大[11]。與此同時(shí)，在土壤中添加生物炭會(huì)對(duì)菌根真菌產(chǎn)生積極的影響，使菌根真菌的豐度有所增加，促進(jìn)菌根真菌對(duì)植物根部的侵染[17]。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)添加生物炭后，微酸性土壤和堿性土壤中的微生物量碳含量能夠得到提升[8]。生物炭對(duì)施用有機(jī)肥土壤中微生物的影響是存在著復(fù)雜的、不同方面的因素，其作用機(jī)制還未能能夠全面的研究。在一方面，目前國(guó)外對(duì)生物炭應(yīng)用于土壤的研究已經(jīng)發(fā)展到改良土壤機(jī)理的高度，但其更多的是側(cè)重于單一方面的效果，且生物炭類型不一，在土壤中長(zhǎng)期生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生的效益受生物炭的影響也存在不同的觀點(diǎn)[1]。 生物炭對(duì)土壤酶影響國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀 國(guó)外研究現(xiàn)狀生物炭的使用一直伴隨著人類的農(nóng)業(yè)發(fā)展歷程，而對(duì)生物炭的研究，早在20世紀(jì)80年代國(guó)外就已經(jīng)有了一定的進(jìn)展，但其農(nóng)田土壤中的研究對(duì)象主要為增加農(nóng)作物產(chǎn)量，如