惰性載體對瘤胃真菌產(chǎn)酶活性的影響畢業(yè)論文-文庫吧資料
2024-09-05 13:54本頁面
【正文】 據(jù)圖 2 可 知 ，沸石 、膨潤土添加組對 CMC 酶活均顯著高于珍珠巖添加組 （ P）。沸石的添加量為 %時，產(chǎn)酶活性最高。 2 試驗結果 由表 3 可知，載體類型及載體與添加量 互作 對纖維素酶活影響顯著（ P），沸石和膨潤土添加組的酶活均顯著高于珍珠巖添加組（ P）。酶活 力定義同上文已述的羧甲基纖維素酶。1 mg），再加入稀釋 10 倍的 mL 酶液后， 50℃ 水浴加熱 30 min，再加入3 mL DNS 溶液。 濾紙酶 (FPA)活性測定 本試驗濾紙酶活的測定參考趙玉萍 [10]等的方法稍加改良。 β葡萄糖苷酶 (BGL)活性測定 取 1 mL 水楊素溶液于 10 mL 離心管中，加入 mL pH= 檸檬酸 磷酸氫二鈉緩沖液， 50℃ 水浴預熱 5 min，加入 mL 稀釋 10 倍的發(fā)酵液上清， 50℃ 水浴加熱 30 min，然后加入 3 mL DNS 溶液， 100℃ 沸水浴 5 min 后，置于冷水中流水冷卻，于紫外可見光光度計中 550 nm 波長處讀取吸光值，對照組以經(jīng)煮沸滅活的發(fā)酵液上清作對照，最后參考葡萄糖標準曲線為標準，計算所測上清液釋放的葡萄糖大致含量。 = 0 . 9 9 800 . 10 . 20 . 30 . 40 . 50 1 2 3 4 5 6葡萄糖含量（g）吸光值 9 酵液上清作對照，然后以葡萄糖標準曲線為標準，計算所測上清液釋放的葡萄糖含量。 微晶纖維素酶 (MCC)活性的測 定 本試驗此方法根據(jù) Hossam M[9]的方法改良。 酶活力計算： 酶活力 (U/g)=WN1000/(TmM)。以葡萄糖標準曲線為標準，計算所測的上清液釋放的葡萄糖具體 含量。 本試驗參照 Lowe 等 [8]方法稍加改良，取已配好的羧甲基纖維素鈉（ CMC）溶液 1 mL于 10 mL 離心管中，再加入 mL pH= 的檸檬酸 磷酸氫二鈉溶液，置于 50℃ 水浴鍋預熱 5 min 后，后加入稀釋 10 倍的發(fā)酵液 mL，混合均勻， 50℃ 水浴加熱 30 min 后，加入 DNS 溶液 3 mL，沸水浴 5 min 后迅速置于冷水冷卻，置 550 nm 波長讀取吸光值。 羧甲基纖維素酶（ CMC）活性測定 葡萄糖標準曲線的繪制參照朱崇淼等 [5]的方法稍加改進，分別稱取已經(jīng)烘干恒重的葡萄糖 g、 g、 g、 g、 g，分別溶于 5 個 25 mL 的小容量瓶中，配成用于繪制標準曲線的葡糖糖標準溶液，然后分別再取 mL上述標準溶液于 10 mL 離心管中，空白組加入 mL 蒸餾水代替標準溶液，再向每個離心管中加入 1 mL 蒸餾水和 mL 緩 8 沖液，混勻后置于 50℃ 水浴中加熱 5 min，最后加入 3 mL DNS 溶液，沸水浴 5 min 后迅速置于冷卻，將紫外分光光度計設置在 550 nm 波長處測取吸光值。固態(tài)底物和已與菌體培養(yǎng)液 20 mL 混合的載體混合 物拌勻 后裝袋，經(jīng)抽真空后置于 39℃ 溫箱中發(fā)酵，每隔 2 天采樣測酶活。 試驗設計 本試驗采用二因素試驗設計，載體類型為珍珠巖、沸石、膨潤土，載體添加量分別 %、%、 %。將已配好的 2 L 液體種子培養(yǎng)基分別均分于 10 個 1725 cm封口袋中（即每袋 200 mL），再把已活化的菌 接種到封口袋中，仍置于39℃ 的溫箱中進行傳代培養(yǎng) 3 天， 觀察菌體生長情況，此操作依舊需要在超凈臺中進行。右手持已取標本的接種環(huán)伸入到瓊脂平板表面一側邊緣，利用腕力將接種環(huán)在平板上來回劃線。在超凈臺中進行無菌接種，右手取接種環(huán)在酒精火焰上灼燒滅菌，先將環(huán)燒熱至發(fā)紅，然后將整個細金屬絲燒紅，再將接種環(huán)傾斜，沿 著環(huán)向上依次燒，直到燒至可能碰到培養(yǎng)基的部分，如此返回在燒到環(huán)端，來回通過火焰數(shù)次。 制取 3,5二硝基水楊酸（ DNS）溶液 準確稱取酒石酸鉀鈉鹽 g于 1000 mL燒杯中， 加入蒸餾水 500 mL，水浴加熱溶解（不超過 50℃ ），溶解后再依次加入已稱量好的 3,5二硝基水楊酸 g、氫氧化鈉 g、重結晶苯酚 g，無水亞硫酸鈉鹽 g，用玻璃棒攪拌至完全溶解，冷卻后定容至 1000 mL棕色容量瓶內(nèi)，避光保存，放置一周后取上清液使用。 制取羧甲基纖維素鈉溶液 羧甲基纖維素鈉溶液的制備，本試驗參照王建等 [6]方法，稱取 g 羧甲基纖維素鈉鹽溶于 100 mL pH= 醋酸 醋酸鈉緩沖溶液中，待使用時需搖勻。 ⑦ 以上步驟都完成后， 采用高溫高壓經(jīng) 121℃ 滅菌 15 min，常溫冷卻后備用。 ⑤ 制備無細胞瘤胃液的方法： 在每天下午 4點采取安裝永久瘤胃瘺管的嶗山奶山羊 B 的新鮮瘤胃液，靜置沉淀半小時后，置于 4000 r/min 離心機中離心 25 min，取上清液于燒杯中保存在 20℃ 冰箱中以備用。 ③ 每升緩沖液 A 中， 需含有硫酸銨 g、氯化鈉 g、二水氯化鈣 g、磷酸二氫鉀 3 g 和七水硫酸鎂 g，倒入已煮沸排除氧的蒸餾水溶解備用。 6 表 2 液體培養(yǎng)基配方（每升含量） Table Composition of culture medium (Every litres of content) 注： ① 表中所用蒸餾水需要煮沸冷卻后再使用，以便排除水中溶解的氧氣。置于立式壓力蒸汽滅菌器中經(jīng) 121℃ 高溫高壓滅菌后倒板冷卻備用。 培養(yǎng)基的制備 種子培養(yǎng)基制備 本試驗種子培養(yǎng)基的制備參照朱崇淼 [5]的方法 ， 見表 2。 表 1 原料常規(guī)養(yǎng)分表 Table 1 Nutrients positions of materials in substrate 原料 Crud material 粗蛋白（ %） CP 粗脂肪 （ %）
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