常用的單克隆抗體檢測方法-文庫吧資料
2025-04-13 21:25本頁面
【正文】 體1020ul，37℃。b、蓋片在去離子水中濕潤后置架上滴加1020ul雜交瘤上清或其他待檢樣品；設立陽性、陰性對照；置37℃。②間接免疫熒光法a、固定細胞片的制備：生長在蓋片上的細胞（接種或未接種病毒），可直接收獲蓋片，在PBS中洗滌，用4℃丙酮固定10分鐘，空氣干燥，置密封容器于20℃保存?zhèn)溆茫粏渭毎麘乙嚎稍谏w片上制成涂片，固定方法同上。b、PBS（，）c、待檢的McAb樣品。其操作簡單、敏感性高，可直接觀察抗原定位等優(yōu)點，在McAb的篩選與鑒定上具有重要的應用價值。其結(jié)果用光鏡或倒置顯微鏡檢查。d、同法洗滌，吸干，用新配的相應底物溶液顯色，然后水洗終止反應，觀察結(jié)果。b、將纖維膜浸入封閉液中，37℃ 30分鐘。根據(jù)所用的標記物不同，可分為HRP 免疫斑點試驗、AP免疫斑點試驗和免疫金銀斑點法等。⑦DotELISA試驗免疫斑點試驗（DotELISA）是以硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜為固相載體，進行抗原抗體反應的免疫檢測手段。b、加生物素化抗鼠Ig抗體，每孔100ul，37℃ 1小時；洗滌。因此，結(jié)合了酶的親和素與結(jié)合有抗體的生物素發(fā)生反應即起到了多極放大作用。親和素有4個亞單位組成，對生物素有高度的親合力。洗滌后加底物顯色，判定結(jié)果。c、洗滌后加適量的抗原，37℃ 12小時。該法是常用的ELISA中較理想的一種；其操作步驟如下：a、以適當濃度的純化抗鼠Ig抗體包被酶標板，每孔加100ul，37℃ 2小時或4℃過夜。d、以下步驟同上法。將該細胞懸液稀釋至適當濃度。b、淋巴細胞懸液的制備采用新鮮外周血加肝素抗凝后，滴加于淋巴細胞分離液之上，1500rpm離心30分鐘，吸取界面細胞洗滌二次，即為新鮮淋巴細胞懸液。e、以下步驟同上法。c、步驟b也可采用先每孔加50ul細菌懸液，37℃56℃烘干，然后用20℃預冷的無水甲醇室溫作用15分鐘，蒸餾水洗滌3次；每孔加200ul封閉液4℃過夜或37℃ 2小時封閉。必須指出，對于人畜共患病病原體需注意安全操作，最好是滅活處理。若陰性對照孔無色或接近無色，陽性對照孔明確顯色，則可直接用肉眼觀察結(jié)果。i、以2mol/L H2SO4終止反應，在酶聯(lián)免疫閱讀儀上讀取OD值。g、加酶標第二抗體，每孔50100ul，37℃孵育12小時，洗滌，拍干。e、洗滌液洗3次；此時包被板可20℃或4℃保存?zhèn)溆谩、棄去孔內(nèi)的液體，同時用洗滌液洗3次，每次35分鐘，拍干。②可溶性抗原的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）a、純化抗原用包被液稀釋至120ug/ml。l、酶聯(lián)免疫閱讀儀；或光鏡。j、 細胞固定液：20℃丙酮；或丙酮甲醛固定液：Na2HPO4 100mg，KH2PO4 500mg，蒸餾水150ml，
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