單克隆抗體技術(shù)ppt課件-文庫吧資料
2025-02-28 00:15本頁面
【正文】 ● 若有 許 多抗原決定基， 則 需 許 多株 B 細(xì)胞分別生 產(chǎn)許 多抗體 。目的是將抗體分泌細(xì)胞、抗體非分泌細(xì)胞、特異性抗體分泌細(xì)胞和無關(guān)抗體分泌細(xì)胞分開。 ? 可靠的篩選方法須在融合前建立，避免由于方法不當(dāng)貽誤篩選時機(jī)。一般取最后一次加強(qiáng)免疫 3天后的脾臟。 ? 1 2 3 4 m m m m 1 2 3 4 1 2 3 4 單 抗 細(xì) 胞融合 取出脾細(xì)胞 + 癌細(xì)胞 各抗 體 分 開 ? 骨髓瘤細(xì)胞系選擇要點(diǎn)： ? 穩(wěn)定易培養(yǎng)、自身不分泌 Ig、融合率高、HGPRT缺陷株 ? 常用骨髓瘤細(xì)胞系有： NS SP2／ 0、 X63 等。②改變抗原注入的途徑，基礎(chǔ)免疫可直接采用脾內(nèi)注射。 癌細(xì) 胞 可培 養(yǎng) 生 長 漿 細(xì) 胞 B cell 可分泌抗體 融 合瘤 Hybridoma Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 細(xì) 胞 融 合 兩組 染色體混在一起 也可以培 養(yǎng) 生長 產(chǎn) 生 專 一性抗 體 一 個 B cell 只 產(chǎn) 生一 種 抗 體 細(xì)胞 DNA合成途經(jīng) ：次黃嘌呤（ H） HGPRT ： 氨 基 酸 鳥嘌呤核苷酸 谷 氨 酰 胺 （ A） 尿核苷單磷酸 胸腺嘧啶核苷酸 TK ：胸腺嘧啶核苷（ T） m 核酸補(bǔ)救合成 m 核酸從頭合成 核酸 氨甲喋呤 (A) () 次黃嘌呤 (H)\胸苷 (T) TK HGPRT TK HGPRT HAT選擇培養(yǎng)基的原理 ? HAT選擇培養(yǎng)基組分 次黃嘌呤（ hypoxanthine,H) 氨甲喋呤（ aminopterin,A):葉酸拮抗劑 胸腺嘧啶核苷（ thymidine,T) 抗原免疫的脾細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞 （ B細(xì)胞） （ B細(xì)胞惡性腫瘤） 1. 抗體分泌（ Ig+) +在 HAT生長 HGPRT株 PEG 融合 HAT篩選 脾 骨髓瘤細(xì)胞（雜交瘤細(xì)胞） （ HGPRT+、 Ig+） 融合的結(jié)果及命運(yùn) 雜交瘤細(xì)胞 未融合的脾細(xì)胞 未融合的骨髓瘤細(xì)胞 脾 脾雜交細(xì)胞 骨髓瘤 骨髓瘤雜交細(xì)胞 免疫動物 培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞 收集致敏的 B淋巴細(xì)胞 收集骨髓瘤細(xì)胞 細(xì)胞融合 HAT選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞 檢測篩選陽性細(xì)胞 克隆化培養(yǎng)（反復(fù) 3
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