雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體-文庫吧資料
2025-05-08 08:35本頁面
【正文】 HPRT） 需要 2種酶 的參與 （ 1） 將 對數(shù)生長的骨髓瘤細胞與脾 B淋巴細胞按 1：10或 1： 5的比例 混合 在一起，在 50ml塑料離心管內(nèi)用不完全培 養(yǎng)液 （無血清） 洗 1次，離心，棄上清，用滴管吸凈殘 留液體。 一般在準(zhǔn)備融合前的兩周就應(yīng)開始復(fù)蘇骨髓瘤細 胞，用老鼠 巨噬細胞作飼養(yǎng)層進行培養(yǎng) ，取對數(shù)生長期骨髓瘤細胞，進行 HAT液敏感性篩選 培養(yǎng)。 通常采用 HPRT（ 次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶 ） 與 TK（ 胸腺嘧啶核苷激酶 ）缺陷型的骨髓瘤細胞 系。如果需要免疫脾細胞，一般取最后一 次加強免疫 3天以后的脾臟，用 無血清的培養(yǎng)液 制備成 B細胞懸液。 3 單克隆抗體生產(chǎn)途徑： 細胞融合：雜交瘤細胞 病毒轉(zhuǎn)化：獲得永久生長的B淋巴細胞 視頻： (三）雜交瘤制備單克隆抗體 單克隆抗體技術(shù) 分非特異性、特異性兩類 1. 動物免疫與免疫脾細胞懸液的制備 體外法： 用抗原免疫離體的淋巴細胞， 34d收獲。 一種 抗原通常具有多個不同的抗原決定族 ，因此能刺激多個 B淋巴細胞產(chǎn)生相應(yīng)的 單克隆抗體，因此血清中的抗體是針對不同抗原決定族的 單克隆抗體混合物 ，稱為 多克隆抗體 。 （二）多克隆抗體與單克隆抗體概念 單克隆抗體 (monoclonal antibody, McAb)： 經(jīng)過免疫的哺乳類動物單一的 B淋巴細胞可以分泌單一性抗體， 把這種具有特異性的、同質(zhì)性的抗體稱為單克隆抗體。 T淋巴細胞 — — 發(fā)育成 吞噬 細胞 ，直接參與細胞 免疫，經(jīng)胸腺分泌。 動物免疫系統(tǒng)分泌的中和或消除 抗原物質(zhì)的影響的物質(zhì)，存在于 血清 中，本質(zhì)是 免疫球蛋白 （ Immuniglobulin,Ig）。 18 T細胞與 B細胞抗原決定簇的比較 2 抗體 互補性決定區(qū)（ Complementarity determining region， CDR） VH 和 VL的三個高變區(qū) 共同組成 Ig的 抗原結(jié)合部位 。 抗原的表位 ◆ 抗原決定簇 : (antigen determinant）； 又稱為表位（ epitope）。 包括 ： 蛋白質(zhì)、多糖、核酸、
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