雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體(編輯修改稿)
2025-05-29 08:35 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 克隆抗體，因此血清中的抗體是針對不同抗原決定族的 單克隆抗體混合物 ，稱為 多克隆抗體 。 問題的引出 血液得到的只能是混合抗體，但是需要大量的僅 針對某一個抗原決定族的單克隆抗體，幾乎是不 可能的，因此必須采用其他方法。 3 單克隆抗體生產(chǎn)途徑： 細胞融合：雜交瘤細胞 病毒轉(zhuǎn)化：獲得永久生長的B淋巴細胞 視頻： (三）雜交瘤制備單克隆抗體 單克隆抗體技術(shù) 分非特異性、特異性兩類 1. 動物免疫與免疫脾細胞懸液的制備 體外法： 用抗原免疫離體的淋巴細胞， 34d收獲。 體內(nèi)法： 一般要經(jīng)過初次免疫、第二次免役（向動物 腹腔內(nèi)注射 抗體）、加強免疫（向動物 靜脈內(nèi)注射 抗 體） 3個過程。如果需要免疫脾細胞，一般取最后一 次加強免疫 3天以后的脾臟，用 無血清的培養(yǎng)液 制備成 B細胞懸液。 骨髓瘤細胞系應(yīng)和免疫 B淋巴細胞源于同一品系動物（如 BALB/C小鼠），這樣雜交融合率高。 通常采用 HPRT（ 次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶 ） 與 TK（ 胸腺嘧啶核苷激酶 ）缺陷型的骨髓瘤細胞 系。 HPRT和 TK兩種酶參與 DNA補救途徑合成。 一般在準備融合前的兩周就應(yīng)開始復(fù)蘇骨髓瘤細 胞，用老鼠 巨噬細胞作飼養(yǎng)層進行培養(yǎng) ，取對數(shù)生長期骨髓瘤細胞，進行 HAT液敏感性篩選 培養(yǎng)。 HAT培養(yǎng)基篩選法 培養(yǎng)基中有三種關(guān)鍵 成分： 次黃嘌呤 （ hypoxanthine， H）、 氨基蝶呤 （ aminopterin， A） 和 胸腺嘧啶核苷 （ thymidine， T）， 所以取三者的字頭 稱 為 HAT培養(yǎng)基。 HAT篩選原理 DNA的合成： 正常途徑： 糖、氨基酸 —— 核苷酸 —— DNA ，可以被 氨 基蝶呤 阻斷 胸腺嘧啶核苷激酶（ TK） 補救途徑 ： 核苷酸前體 —— 核苷酸 —— DNA 次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（ HPRT） 需要 2種酶 的參與 （ 1） 將 對數(shù)生長的骨髓瘤細胞與脾 B淋巴細胞按 1：10或 1： 5的比例 混合 在一起，在 50ml塑料離心管內(nèi)用不完全培 養(yǎng)液 （無血清） 洗 1
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