第四章單克隆抗體與基因工程抗體的制備(編輯修改稿)
2024-11-16 11:32 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 不同表位特異的 ,用競(jìng) 爭(zhēng)抑制法，相加指數(shù)法及微機(jī)集群分析 親和性測(cè)定： 測(cè)定親和常數(shù) K 雜交瘤細(xì)胞染色體： 秋水仙素裂解法，小鼠 B細(xì)胞染色體40條， SP2/0細(xì)胞 68條，雜交瘤細(xì)胞一般 100多條 McAb靶抗原分子量： 常用 western blot 三、 單克隆抗體的性質(zhì)鑒定 四、單克隆抗體的特性 高度特異性 高度的均一性和可重復(fù)性 弱凝集反應(yīng)和不呈現(xiàn)沉淀反應(yīng) 對(duì)環(huán)境敏感性 （一）單克隆抗體的特性 優(yōu)點(diǎn) ： 在體外 “ 永久 ” 地存活并傳代 用相對(duì)不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。適用于以標(biāo)記抗體為特點(diǎn)的免疫學(xué)分析方法 可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導(dǎo)向治療 （二）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與局限性 局限性 ： 固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應(yīng)用范圍反應(yīng)強(qiáng)度不如多克隆抗體 制備技術(shù)復(fù)雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)工、價(jià)格較高 McAb PcAb 抗原要求 可以不純 純度高 得量 高 低 特異性 高 低 穩(wěn)定 低 高 沉淀反應(yīng) 無 有 成本 高 低 McAb與 PcAb的比較 McAb and PcAb 第三節(jié) 基因工程抗體制備 基因工程抗體 (Geic engineering antibody) 根據(jù)研究者的意圖，采用基因工程方法，在基因水平，對(duì)免疫球蛋白基因進(jìn)行切割、拼接或修飾后導(dǎo)入受體細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，產(chǎn)生新型抗體。主要包括嵌合抗體、單鏈抗體、人源化抗體、雙價(jià)抗體和雙特異性抗體。 將小鼠 Ig基因敲除，轉(zhuǎn)染人 Ig基因，在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生人 Ab，再經(jīng)雜交瘤技術(shù)，產(chǎn)生大量完全人源化抗體 一、人源化抗體 方法： 從雜交瘤細(xì)胞分離出功能性可變區(qū)基因，與人 Ig恒定區(qū)基因連接，插入適當(dāng)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，表達(dá)人鼠嵌合抗體 特點(diǎn)： 減少了鼠源性抗體的免疫原性 保留了親本抗體特異性結(jié)合抗原的能力 （一）嵌合抗體 嵌合抗體 定義： 指利用基因工程技術(shù)，將人抗體可變區(qū)（ V）中互補(bǔ)決定簇（ CDR）序列改換成鼠源單抗 CDR序列。重構(gòu)成既具有鼠源性單抗的特異性又保持抗體親和力的人源化抗體。RAb亦叫 “ 重構(gòu)型抗體 ” ，因其主要涉及 CDR的 “ 移植 ” ，又可稱為 “ CDR移植抗體 意義： 多種特異的鼠源單抗有可能應(yīng)用于臨床治療 （二）改型抗體 Fab： 抗原結(jié)合片斷 Fv： 可變區(qū)片段 ScFv： 單鏈可變區(qū)片段 SdAb： 單區(qū)抗體 二、小分子抗體 小分子抗體 其它生物活性蛋白融合 三、抗體融合蛋白 許多抗原抗體反應(yīng)要求雙價(jià)的抗原結(jié)合位點(diǎn)，使抗原分子上的兩個(gè)表位交聯(lián)或使兩個(gè)抗原分子連接。將識(shí)別腫瘤抗原的抗體和識(shí)別細(xì)胞毒性免疫效應(yīng)細(xì)胞表面分子的抗體連結(jié)在一起，可使效應(yīng)細(xì)胞更容易與腫瘤細(xì)胞結(jié)合識(shí)別，取得殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。 四、雙特異性抗體 分別分離純化兩種不同的 McAb，使各抗體解離為單價(jià)抗體，再使兩種不同抗原特異性的單價(jià)抗體通過化學(xué)試劑交聯(lián)起來，然后分離出目的組分。此法缺點(diǎn)是容易導(dǎo)致抗體失去活性，產(chǎn)物均一性不佳。 化學(xué)交聯(lián) BsAb 將兩種分泌不同特異性
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