第四章單克隆抗體與基因工程抗體的制備(編輯修改稿)
2024-11-16 11:32 本頁面
【文章內容簡介】 不同表位特異的 ,用競 爭抑制法，相加指數(shù)法及微機集群分析 親和性測定： 測定親和常數(shù) K 雜交瘤細胞染色體： 秋水仙素裂解法，小鼠 B細胞染色體40條， SP2/0細胞 68條，雜交瘤細胞一般 100多條 McAb靶抗原分子量： 常用 western blot 三、 單克隆抗體的性質鑒定 四、單克隆抗體的特性 高度特異性 高度的均一性和可重復性 弱凝集反應和不呈現(xiàn)沉淀反應 對環(huán)境敏感性 （一）單克隆抗體的特性 優(yōu)點 ： 在體外 “ 永久 ” 地存活并傳代 用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法 可用于體內的放射免疫顯像和免疫導向治療 （二）單克隆抗體的優(yōu)點與局限性 局限性 ： 固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應用范圍反應強度不如多克隆抗體 制備技術復雜、費時費工、價格較高 McAb PcAb 抗原要求 可以不純 純度高 得量 高 低 特異性 高 低 穩(wěn)定 低 高 沉淀反應 無 有 成本 高 低 McAb與 PcAb的比較 McAb and PcAb 第三節(jié) 基因工程抗體制備 基因工程抗體 (Geic engineering antibody) 根據(jù)研究者的意圖，采用基因工程方法，在基因水平，對免疫球蛋白基因進行切割、拼接或修飾后導入受體細胞進行表達，產生新型抗體。主要包括嵌合抗體、單鏈抗體、人源化抗體、雙價抗體和雙特異性抗體。 將小鼠 Ig基因敲除，轉染人 Ig基因，在小鼠體內產生人 Ab，再經雜交瘤技術，產生大量完全人源化抗體 一、人源化抗體 方法： 從雜交瘤細胞分離出功能性可變區(qū)基因，與人 Ig恒定區(qū)基因連接，插入適當表達載體，轉染宿主細胞，表達人鼠嵌合抗體 特點： 減少了鼠源性抗體的免疫原性 保留了親本抗體特異性結合抗原的能力 （一）嵌合抗體 嵌合抗體 定義： 指利用基因工程技術，將人抗體可變區(qū)（ V）中互補決定簇（ CDR）序列改換成鼠源單抗 CDR序列。重構成既具有鼠源性單抗的特異性又保持抗體親和力的人源化抗體。RAb亦叫 “ 重構型抗體 ” ，因其主要涉及 CDR的 “ 移植 ” ，又可稱為 “ CDR移植抗體 意義： 多種特異的鼠源單抗有可能應用于臨床治療 （二）改型抗體 Fab： 抗原結合片斷 Fv： 可變區(qū)片段 ScFv： 單鏈可變區(qū)片段 SdAb： 單區(qū)抗體 二、小分子抗體 小分子抗體 其它生物活性蛋白融合 三、抗體融合蛋白 許多抗原抗體反應要求雙價的抗原結合位點，使抗原分子上的兩個表位交聯(lián)或使兩個抗原分子連接。將識別腫瘤抗原的抗體和識別細胞毒性免疫效應細胞表面分子的抗體連結在一起，可使效應細胞更容易與腫瘤細胞結合識別，取得殺傷腫瘤細胞的作用。 四、雙特異性抗體 分別分離純化兩種不同的 McAb，使各抗體解離為單價抗體，再使兩種不同抗原特異性的單價抗體通過化學試劑交聯(lián)起來，然后分離出目的組分。此法缺點是容易導致抗體失去活性，產物均一性不佳。 化學交聯(lián) BsAb 將兩種分泌不同特異性
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1