常用的單克隆抗體檢測方法(編輯修改稿)
2025-05-04 21:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 素與結(jié)合有抗體的生物素發(fā)生反應即起到了多極放大作用。其操作步驟如下：a、已知抗原的包被及加待檢McAb樣品，同間接ELISA試驗。b、加生物素化抗鼠Ig抗體，每孔100ul，37℃ 1小時；洗滌。c、加酶標親和素，每孔100ul，37℃ 30分鐘洗滌；加底物顯色，判定結(jié)果。⑦DotELISA試驗免疫斑點試驗（DotELISA）是以硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜為固相載體，進行抗原抗體反應的免疫檢測手段。該法采用不溶性底物（如DAB，或4氯萘酚或AgNO3等），其與相應標記物（HRP、AP、膠體金）作用形成不溶性產(chǎn)物，呈現(xiàn)斑點狀著色，從而易于判定結(jié)果。根據(jù)所用的標記物不同，可分為HRP 免疫斑點試驗、AP免疫斑點試驗和免疫金銀斑點法等。其操作步驟大致如下：a、將抗原液25ul點加于纖維素膜上，室溫37℃干燥。b、將纖維膜浸入封閉液中，37℃ 30分鐘。c、用洗滌液洗2次，吸干后加待檢McAb樣品，37℃ 1小時；用洗滌液振蕩洗滌三次，每次5分鐘，加HRP或AP或膠體金標記的抗鼠Ig抗體，37℃作用30分鐘。d、同法洗滌，吸干，用新配的相應底物溶液顯色，然后水洗終止反應，觀察結(jié)果。⑧免疫組化染色法該法主要用于檢測針對細胞抗原成分的McAb，常用的方法是間接免疫過氧化物酶試驗（IIP，indirect immunoperoxidase）及APAAP技術(shù)。其結(jié)果用光鏡或倒置顯微鏡檢查。（2）免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)可用于多種抗原的雜交瘤抗體檢測，如細胞性抗原（包括細菌和動物細胞）、感染細胞中的病毒抗原和膜抗原等。其操作簡單、敏感性高，可直接觀察抗原定位等優(yōu)點，在McAb的篩選與鑒定上具有重要的應用價值。①器材和試劑a、供檢測抗體用的抗原制備固定細胞片或板，活細胞懸液。b、PBS（，）c、待檢的McAb樣品。d、冷丙酮e、FITC（異硫氰酸熒光素）或TRITC（四甲基異硫氰酸羅丹明熒光素）標記的抗鼠Ig抗體等f、熒光顯微鏡，磁力攪拌器，離心機，水浴箱等。②間接免疫熒光法a、固定細胞片的制備：生長在蓋片上的細胞（接種或未接種病毒），可直接收獲蓋片，在PBS中洗滌，用4℃丙酮固定10分鐘，空氣干燥，置密封容器于20℃保存?zhèn)溆?；單細胞懸液可在蓋片上制成涂片，固定方法同上。細胞涂片的制備：將10ul細菌懸液（1108個/ml）涂抹721mm蓋片上，自然干燥后，用20℃丙酮固定1015分鐘，于20℃保存?zhèn)溆谩、蓋片在去離子水中濕潤后置架上滴加1020ul雜交瘤上清或其他待檢樣品；設立陽性、陰性對照；置37℃。c、取出蓋片置PBS中用磁力攪拌器洗滌15分鐘。d、蓋片置架上，滴加工作濃度的抗鼠Ig的熒光抗體1020ul，37℃。e、同法洗滌15分鐘；取出蓋片
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