常用的單克隆抗體檢測方法-資料下載頁
2025-04-07 21:25本頁面
【正文】 然后100℃水浴處理1小時(shí)；將冷卻至37℃的熱處理LPS與6%醛化紅細(xì)胞等量混合，37℃攪拌作用45分鐘；取出離心2000r/min 10分鐘，；配制成4%致敏血球，分裝，保存于4℃?zhèn)溆?，或凍干保存。c、McAb的篩選：取待測McAb樣品25ul，加入V型微量血凝板孔中，同時(shí)設(shè)立陰性、陽性對照；%致敏紅血球懸液25ul，在振蕩器上混勻30秒；置室溫或37℃ 3060分鐘觀察結(jié)果。陰性對照孔應(yīng)呈緊縮的圓點(diǎn)。③可溶性蛋白抗原的間接血凝試驗(yàn)a、紅細(xì)胞醛化：采用雙醛法。采綿羊或人“O”型抗凝血，每次加10倍于紅細(xì)胞壓積的PBS洗滌46次，然后配成8%紅細(xì)胞懸液；向此8%紅細(xì)胞懸液緩慢加入等量含有3%丙酮醛和3%甲醛的PBS，于室溫緩慢攪拌17小時(shí)；其后洗滌3次，配成20%雙醛化紅細(xì)胞懸液，% NaN3防腐，4℃保存?zhèn)溆?。b、致敏紅細(xì)胞：取20%，1500r/min 10分鐘，棄上清，并加最適濃度（應(yīng)預(yù)先測定，蛋白抗原為50ug/ml左右）的抗原1ml，混勻，于45℃致敏30分鐘，有時(shí)輕輕搖動(dòng)，使紅細(xì)胞不下沉。然后離心去上清，并用20倍于紅細(xì)胞壓積的PBS洗34次，%致敏紅細(xì)胞，4℃保存?zhèn)溆?。c、McAb測定：同上法。（4）放射免疫測定放射免疫測定是用放射性同位素標(biāo)記抗原或抗體，以檢測相應(yīng)抗原或抗體的定量方法。在篩選和鑒定單抗時(shí)常用抗原固相法，即用抗原包被聚乙烯微板，借以檢測樣品中的McAb，其操作步驟如下：a、用碳酸鹽緩沖液將抗原稀釋至適宜的濃度（1100ug/ml），滴加聚乙烯微板孔內(nèi)，100ul/孔，4℃過夜或37℃ 2小時(shí)。b、棄去抗原液，% BSA的PBS，4℃ 12小時(shí)封閉。c、用BSAPBS洗滌3次，每次3分鐘。d、加待檢樣品，每孔100ul，設(shè)立陰性孔、陽性孔和空白孔；37℃12小時(shí)，同法洗滌。e、每孔加125I標(biāo)記的抗鼠Ig抗體工作液100ul，37℃ 12小時(shí)，同法洗滌。f、用γ射線閃爍計(jì)數(shù)儀分別測定各孔放射性。通常要求樣品孔和陽性對照孔的放射性脈沖分別超過本底5倍和10倍。若以空白孔的放射性為基準(zhǔn)，凡樣品孔與陰性孔放射性之比大于3的樣品定為陽性。歡迎您的光臨，！希望您提出您寶貴的意見，你的意見是我進(jìn)步的動(dòng)力。贈(zèng)語； 如果我們做與不做都會(huì)有人笑，如果做不好與做得好還會(huì)有人笑，那么我們索性就做得更好，來給人笑吧！ 現(xiàn)在你不玩命的學(xué)，以后命玩你。我不知道年少輕狂，我只知道勝者為王。不要做金錢、權(quán)利的奴隸；應(yīng)學(xué)會(huì)做“金錢、權(quán)利”的主人。什么時(shí)候離光明最近？那就是你覺得黑暗太黑的時(shí)候。最值得欣賞的風(fēng)景，是自己奮斗的足跡。壓力不是有人比你努力，而是那些比你牛幾倍的人依然比你努力。學(xué)習(xí)參
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