動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體的制備-資料下載頁(yè)
2025-05-12 09:14本頁(yè)面
【正文】 是生物的方法，其融合率都不可能是 100%。僅用兩個(gè)細(xì)胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細(xì)胞。更重要的是，即使兩個(gè)細(xì)胞已發(fā)生融合，但并不一定是研究者期望得到的細(xì)胞類(lèi)型。目前動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最有價(jià)值的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制備單克隆抗體為例來(lái)說(shuō)明這一問(wèn)題。我們知道，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類(lèi)可多達(dá)百萬(wàn)種以上，但是每一個(gè) B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，如果僅取一個(gè)脾細(xì)胞（含 B淋巴細(xì)胞）和一個(gè)瘤細(xì)胞雜交，我們不能確定該脾細(xì)胞分泌的抗體是否正是我們所需要的；若用大量的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，就可以從融合細(xì)胞中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。 知識(shí)拓展 ？ 融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用 “ 有限稀釋法 ” 來(lái)選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋?zhuān)枚嗫准?xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過(guò)一個(gè)，通過(guò)培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋?zhuān)话阈柽M(jìn)行 3～ 4次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過(guò)程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。 知識(shí)拓展 單倍體（ haploid）是指具有配子染色體數(shù)目的個(gè)體。單倍體可以自發(fā)產(chǎn)生，也可以誘發(fā)產(chǎn)生。動(dòng)物中（除蜜蜂、白蟻等外）的單倍體，由于生理上不正常，在胚胎發(fā)育時(shí)期就會(huì)死亡。植物上自發(fā)產(chǎn)生單倍體的植物很多，如番茄、棉花、咖啡、甜菜、大麥、小麥、油菜等，共有約 10個(gè)科 26個(gè)屬 36個(gè)種的植物可以自發(fā)產(chǎn)生單倍體。 除了自發(fā)產(chǎn)生單倍體外，人工誘導(dǎo)產(chǎn)生單倍體的方法有： （ 1）種間和屬間雜交。由于遠(yuǎn)緣雜交，雖然不能受精，但在遠(yuǎn)緣物種的花粉誘導(dǎo)下，卵細(xì)胞可以在未受精情況下發(fā)育成胚，這種情況在馬鈴薯、大麥、小麥、玉米中都可以發(fā)生； （ 2）物理和化學(xué)誘變?；ǚ劢?jīng)射線照射或化學(xué)藥品處理失去受精能力，但仍可以刺激卵細(xì)胞發(fā)育成胚； （ 3）雙生苗篩選。有些植物可以產(chǎn)生多胚種子，即 2～ 3個(gè)胚共處于一個(gè)種皮中，這樣的種子可以形成單倍體植株； （ 4）花藥或花粉培養(yǎng)。單倍體具有很好的應(yīng)用價(jià)值：在植物育種上，單倍體經(jīng)過(guò)加倍可以使后代迅速純合，縮短育種年限；由于單倍體經(jīng)加倍后，在理論上各基因位點(diǎn)應(yīng)處于純合狀態(tài)，對(duì)后代進(jìn)行選擇時(shí)，選擇到的個(gè)體代表著真實(shí)的變異，避免了雜交育種中雜交優(yōu)勢(shì)對(duì)選擇個(gè)體的干擾，提高了選擇效率；用單倍體作為轉(zhuǎn)基因的受體，獲得的轉(zhuǎn)基因材料經(jīng)加倍后基因即可純合，避免了體細(xì)胞作為受體，會(huì)由于后代分離需要多代選擇的麻煩。目前以油菜小孢子作為轉(zhuǎn)基因受體已得到轉(zhuǎn)基因植株。
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