動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體-資料下載頁(yè)
2025-04-29 04:27本頁(yè)面
【正文】 隆抗體與藥物相結(jié)合，制成“ 生物導(dǎo)彈 ”。 ?為什么滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑？ 因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合。 ?不滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑嗎？ 不能，因?yàn)椴粶缁畹牟《緯?huì)感染細(xì)胞。 如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測(cè)及克隆化培養(yǎng)？ 融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但 這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞 ，通常用 “ 有限稀釋法 ” 來(lái)選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用 多孔細(xì)胞培養(yǎng)板 培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過(guò)一個(gè)，通過(guò)培養(yǎng)讓其增殖。然后 檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體 （常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法）， 那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。 陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行 3～ 4次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過(guò)程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。 在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下，培養(yǎng)得到的細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來(lái)的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的 單克隆 確有 單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過(guò) 克隆的 不是 B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞 。 雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體。 整個(gè)制備過(guò)程為何要經(jīng)過(guò) 兩次篩選 ? 第一次篩選：用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出多種雜交瘤細(xì)胞 第二次篩選 （克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)） ：篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。 單克隆抗體的 概念： 由 單個(gè)雜交瘤細(xì)胞 進(jìn)行無(wú)性繁殖 ,也就是通過(guò)克隆，形成細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的 化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體 稱為單克隆抗體。 單克隆抗體的制備 抗原注入小鼠體內(nèi) 骨髓瘤細(xì)胞 分離 B淋巴細(xì)胞 細(xì)胞融合 雜交瘤細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 選擇培養(yǎng)細(xì)胞 注入小鼠 體內(nèi)培養(yǎng) 培養(yǎng)基 體外培養(yǎng) 從腹水提取 從培養(yǎng)液提取 單克隆抗體 能產(chǎn)生抗體 能無(wú)限增殖 既能產(chǎn)生抗體又能無(wú)限增殖 我們以制備單克隆抗體為例來(lái)說(shuō)明這一問(wèn)題。我們知道，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬(wàn)種以上，但是每一個(gè) B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體， 如果僅取一個(gè)脾細(xì)胞（含 B淋巴細(xì)胞）和一個(gè)瘤細(xì)胞雜交，我們不能確定該脾細(xì)胞分泌的抗體是否正是我們所需要的； 若用大量的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，就可以從融合細(xì)胞中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。
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