常用的單克隆抗體檢測方法-展示頁
2025-04-16 21:25本頁面
【正文】 丙酮225ml，甲醛125ml；或丙酮甲醛溶液（1；1）；或20℃甲醇。淋巴細(xì)胞等懸液。h、抗原： 可溶性抗原：盡量純化，以獲得高特異性。ABTS底物使用液（測410nm的OD值）：ABTS ，底物緩沖液1ml，3% H2O2 2ul。f、底物使用液：OPD底物使用液（測490nm的OD值）：OPD 5mg，底物緩沖液10ml，3% H2O2 。e、底物緩沖液（，磷酸鹽檸檬酸緩沖液）：，再加50ml蒸餾水。c、稀釋液和封閉液：牛血清白蛋白（BSA），加洗滌液至100ml；或用洗滌液將小牛血清配成510%使用。b、洗滌緩沖液（）：KH2PO4 ，KCl ，Na2HPO4①器材和試劑a、包被緩沖液：碳酸鹽緩沖液：，再加75ml蒸餾水。. . . .常用的單克隆抗體檢測方法 通過雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體，在雜交瘤制備完成后，需要對(duì)抗體進(jìn)行一個(gè)檢測，本文介紹了幾種常用的抗體檢測的方法（1）免疫酶技術(shù)免疫酶技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶對(duì)底物顯色反應(yīng)的高效催化作用有機(jī)結(jié)合而成的免疫學(xué)技術(shù)。由于它特異性強(qiáng)，靈敏度高，現(xiàn)已廣泛用于篩選和鑒定單抗。TrisHCl緩沖液（，）：，加蒸餾水至1000ml。12H2O ，NaCl ，Tween20 ，加蒸餾水至1000ml。d、酶反應(yīng)終止液（2mol/L H2SO4）：，滴加濃硫酸（98%）。檸檬酸溶液及配成的底物緩沖液不穩(wěn)定，易形成沉淀，因此一次不宜配制過多。TMBS或TMB底物使用液（測450nm的OD值）：TMBS或TMB（1mg/ml），底物緩沖液10ml，1% H2O2 25ul。g、抗體對(duì)照：以骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清作為陰性對(duì)照，以免疫鼠血清作為陽性血清。病毒感染的傳代細(xì)胞或全菌抗原。i、酶標(biāo)抗鼠抗體或酶標(biāo)SPA或其他類似試劑。k、聚苯乙烯微孔板：40孔、96孔、或條孔；硬板或軟板均可使用。m、吸管、加樣器及水浴箱、離心機(jī)等。b、以50100ul/孔量加入酶標(biāo)板孔中，置4℃過夜或37℃吸附2小時(shí)。d、每孔加200ul封閉液4℃過夜或37℃封閉2小時(shí)；該步驟對(duì)于一些抗原，可省略。f、每孔加50100ul待檢雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清，同時(shí)設(shè)立陽性、陰性對(duì)照和空白對(duì)照；37℃孵育12小時(shí)；洗滌，拍干。h、加底物液，每孔加新鮮配制的底物使用液50100ul，37℃1030分鐘。j、結(jié)果判定：以P/，或PN+3D為陽性。③全菌抗原的ELISASa、新鮮培養(yǎng)的細(xì)菌用蒸餾水或PBS懸浮，并調(diào)整細(xì)菌濃度至1108個(gè)/ml。b、每孔中加100ul 5%戊二醛溶液（+25%戊二醛溶液5ml），37℃
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