單克隆抗體技術(shù)ppt課件-wenkub
2023-03-09 00:15:23 本頁面
【正文】 2022年治療用單抗銷售總額已超過 52億美元。 ● 完全人源化單抗現(xiàn)有多個處于臨床前階段 多克隆抗體 Epitope, Antigenic determinant 抗原決定基 ● 一 個 抗原分子上可能 有 數(shù)個 抗原決定基 ● 每個 抗原決定基 至少誘生一種 專一性抗體 ● 蛋白 質(zhì) 性 抗原決定基 含有 六 個 以上 氨 基酸 整體水平抗體生成技術(shù) 細胞工程抗體生成技術(shù) 基因工程抗體生成技術(shù) 多克隆抗體（抗血清） 單克隆抗體 嵌合抗體、改形抗體 “小型化抗體”（單鏈抗體） 組合抗體庫技術(shù) 噬菌體抗體庫技術(shù) Ig基因轉(zhuǎn)基因小鼠 抗體真核表達技術(shù) 多克隆抗體（ polyclonal antibody） 指由不同 B細胞克隆產(chǎn)生的針對抗原物質(zhì)中多種抗原決定簇的多種抗體混合物。 ? 在抗原的反復(fù)刺激下，抗體的 V區(qū)發(fā)生高頻率突變，產(chǎn)生高親和力抗體的細胞被選擇，抗體進行類別轉(zhuǎn)換，最終抗體成熟。②改變抗原注入的途徑，基礎(chǔ)免疫可直接采用脾內(nèi)注射。一般取最后一次加強免疫 3天后的脾臟。目的是將抗體分泌細胞、抗體非分泌細胞、特異性抗體分泌細胞和無關(guān)抗體分泌細胞分開。 基因工程抗體 1 人一鼠嵌合抗體 (Chimeric Antibodies) 人一鼠嵌合抗體是將鼠源單抗的可變區(qū)與人抗體的恒定區(qū)融合而得到的抗體。為避免人抗體的恒定區(qū)產(chǎn)生不需要的副作用，可通過點突變來修飾調(diào)整其效應(yīng)。 CDR移植即把鼠抗體的 CDR序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)，所得到的抗體稱 CDR移植抗體或 改型抗體 ，也就是 人源化抗體。合成所有 DNA片段，每組片段分別退火，然后逐組連接成完整的可變區(qū)基因，插入質(zhì)粒中，進一步即可用于構(gòu)建和表達改形抗體。 小分子抗體有很多優(yōu)點 : 可以用細菌發(fā)酵生產(chǎn)，成本低 。 易于與毒素或酶基因連接，便于直接獲得免疫毒素或酶標(biāo)抗體等。 (2)Fv 或 ScFv Fv ScFv 連接肽 Fv由 VH與 VL構(gòu)成，由于其結(jié)合是非共價結(jié)合，故Fv不穩(wěn)定。 單鏈抗體 的構(gòu)建在已知親本 DNA序列時可用完全人工合成法 。產(chǎn)量高，可達細菌蛋白總量的 5%20%，但需進行變性復(fù)性，使其形成正確的立體結(jié)構(gòu)，恢復(fù)抗體活性 。它只由一個結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，故稱 單域抗體。乃是一種小分子的雙價雙特異性抗體片段。 即能 結(jié)合靶腫瘤細胞 又能 結(jié)合高細胞毒性的效應(yīng)細胞 ,將效應(yīng)細胞富集在腫瘤周圍 ,而且可以模擬天然配體的作用 ,與細胞表面引發(fā)分子結(jié)合 ,激活效應(yīng)細胞 ,實現(xiàn)對腫瘤細胞的殺傷和裂解。 所以雙特異性抗體與既往腫瘤免疫治療相比 ,除了能 特異性識別腫瘤細胞 外 ,還能 將循環(huán)血液中的免疫效應(yīng)細胞再導(dǎo)向至腫瘤細胞處 ,從而使效應(yīng)細胞的抗腫瘤活性增強 ,發(fā)揮免疫導(dǎo)向作用 ,這是腫瘤治療的新突破。 噬菌體表面展示文庫技術(shù)。 噬菌體抗體庫技術(shù) 1990年 Mc Cafferty等成功地建立了 噬菌體表面展示系統(tǒng) ，通過將抗溶菌酶單鏈抗體基因克隆于 fd噬菌體基因 3的下游，使 ScFv以融合蛋白的形式展示于噬菌體表面，利用親和層析，兩輪富集達 106倍。 篩選到的噬菌體再將基因 g3或 g8切除后，轉(zhuǎn)入大腸桿菌， 該項技術(shù)的優(yōu)點 : 將 抗體的基因型和表型緊密聯(lián)系 起來 。可規(guī)?；a(chǎn) 。 。 噬菌體抗體庫技術(shù)的發(fā)展具有很大優(yōu)越性。 抗體基因篩選的范圍廣 。 噬菌體表面展示系統(tǒng) (phage surface display system ) 噬菌體表面展示文庫技術(shù)的要點 : 外源基因表達多肽以融合蛋白形式展示在外殼蛋白 N端 將基因組合文庫插入噬菌體編碼膜蛋白的基因 g3或g8 的先導(dǎo)系列的緊靠下游 隨機克隆入相應(yīng)載體形成組合文庫 從免疫或未被免疫的 B細胞中 PCR擴增抗體全套基因片段 用固相化抗原經(jīng) “ 親和結(jié)合一洗脫一擴增 ” 數(shù)個循環(huán)直接、方便、簡捷、高效地篩選出表達特異性好、親和力強的抗體噬菌體庫。 它是在 PCR技術(shù)和 Phage Display的基礎(chǔ)上實現(xiàn)的。 PCR技術(shù) 。同樣地 ,將 VHA與 VLB連接 ,將兩組嵌合基因 置于雙順反子的表達質(zhì)粒中 ,構(gòu)建成雙鏈抗體的表達質(zhì)粒 ,目前報道的表達質(zhì)粒均為雙順反子。 1種為對應(yīng)腫瘤相關(guān)抗原。
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