【正文】 和不發(fā)酵菌的鑒別。 ⑵ 試管法：取瓊脂斜面（不含血液的）18~24h培養(yǎng)物，接種于試管內(nèi)，加入3%過(guò)氧化氫溶液1ml，如產(chǎn)生大量氣泡為陽(yáng)性。 [用途] 用于鏈球菌及革蘭陽(yáng)性球菌初步分群。而茚三酮?jiǎng)t生成還原型茚三酮。反之為陰性。離心沉淀，立即混勻。[用法] 取純菌接種培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)48h，觀察培養(yǎng)基液面。將馬尿酸鈉和肉湯（pH ）加熱溶解后分裝于試管中，每管4ml， 121℃滅菌15min。⑴ 三氯化鐵法 [配法] 馬尿酸鈉1g，肉湯100ml。 [用途] 測(cè)定細(xì)菌水解馬尿酸鈉能力。觀察結(jié)果時(shí)不必另行加堿。 ⑵ 以上為酸性磷酸酶的試驗(yàn)方法。如有酚酞釋出，菌落即變?yōu)榉奂t色為陽(yáng)性；不變色為陰性。[用法] 接種待測(cè)菌株，35℃培養(yǎng)18~24h。 [配法]含磷酸酚酞的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。用于區(qū)別葡萄球菌有無(wú)致病性，致病性葡萄球菌呈陽(yáng)性。[保存] 置4℃冰箱，2周內(nèi)用完。尿素酶陽(yáng)性者斜面變紅色,陰性者顏色無(wú)變化。經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)后備用。將前5種成分混合于蒸餾水中，加熱溶解，然后加入酚紅溶液，分裝每瓶100ml，經(jīng)121℃滅菌15min備用。 [用途] 用于細(xì)菌尿素酶測(cè)定。 [質(zhì)量控制]銅綠假單胞菌ATCC 27853陽(yáng)性；大腸埃希菌ATCC25922陰性。陽(yáng)性者立即顯粉紅色，并于5～10s內(nèi)呈現(xiàn)深紫色反應(yīng)。 [配法]鹽酸二甲基對(duì)苯二胺（或四甲基對(duì)苯二胺）。 [保存] 置4℃冰箱1周內(nèi)用完。 [質(zhì)量控制] 金黃色葡萄球菌ATCC 25923和粘質(zhì)沙雷菌 ATCC 274陽(yáng)性。[用法] 將待檢菌作點(diǎn)狀穿種在平板上，置35℃培養(yǎng)24h。[配法]DNA 2g，胰酪胨15g，大豆胨5g，氯化鈉5g，瓊脂20g，蒸餾水1L。 [質(zhì)量控制] 金黃色葡萄球ATCC 25923 陽(yáng)性；表皮葡萄球菌ATCC 12990 陰性。將載玻片孵育于35℃濕盒內(nèi)4h,取出觀察結(jié)果。將前6種成分徐徐加熱溶解后，加入甲苯胺藍(lán)溶液，分裝試管， 121℃滅菌15min后備用。 [用途] 用于檢測(cè)細(xì)菌所產(chǎn)生的耐熱脫氧核糖核酸酶。 [質(zhì)量控制]賴氨酸脫羧酶:遲緩愛(ài)德華菌陽(yáng)性，弗勞地枸櫞酸菌陰性；鳥(niǎo)氨酸脫羧酶:產(chǎn)氣腸桿菌陽(yáng)性，弗勞地枸櫞酸菌陰性。陽(yáng)性菌初期由于細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸呈黃色，若繼續(xù)孵育，氨基酸經(jīng)脫羧產(chǎn)生胺類(lèi)使培養(yǎng)基變堿，指示劑改變顏色，呈紫色或紫紅色。[用法] 將試驗(yàn)菌接種培養(yǎng)基，同時(shí)接種對(duì)照管1支。加熱慢慢溶解，按10g/L濃度加入所需要的氨基酸，呈深亮紫色。常用的氨基酸有賴氨酸、鳥(niǎo)氨酸和精氨酸。[保存] 置4℃冰箱，2周內(nèi)用完。培養(yǎng)基變?yōu)楹谏蜃厣邽殛?yáng)性；不變色者為陰性。將上述成分混合加熱溶解，分裝試管，115℃滅菌15min。 [質(zhì)量控制] 肺炎鏈球菌ATCC 10015陽(yáng)性；化膿性鏈球菌ATCC 19615陰性。[用法] 將被檢菌接種培養(yǎng)基，置35℃培養(yǎng)18~24h。分裝于13mm100mm的試管，每管2ml。先取血清25ml、蒸餾水75ml混合，置阿諾滅菌器內(nèi)加熱15min，以破壞血清內(nèi)的淀粉酶。 [用途] 用于肺炎鏈球菌與其它鏈球菌鑒別。將分離的純菌接種到糖（醇）發(fā)酵管中，置35℃培養(yǎng)18～24h。分裝于13mm100mm的試管，每管約3ml，115℃滅菌15min。 將上述成分混合后，加熱溶解。第五節(jié) 生化試驗(yàn)培養(yǎng)基一、糖發(fā)酵試驗(yàn)培養(yǎng)基 [用途] 檢查細(xì)菌對(duì)不同糖(醇)類(lèi)的發(fā)酵能力，達(dá)到鑒定細(xì)菌的目的。[用法]取標(biāo)本接種于平板，置25℃或43℃微需氧環(huán)境中培養(yǎng)48h，菌落直徑達(dá)1~2 mm，不溶血。[配法]蛋白胨10g，胰胨10g，葡萄糖10g，酵母浸膏3g，氯化鈉5g，蒸餾水900ml，脫纖維羊血100ml，萬(wàn)古霉素10mg，多粘菌素B 2 500 U，TMP 5mg，兩性霉素B 2mg。3）彎曲菌運(yùn)送可用布氏菌湯培養(yǎng)基。高濃度氧不利于細(xì)菌生長(zhǎng)，尤其是幽門(mén)螺桿菌。②?、僖?ml，再加萬(wàn)古霉素100mg和多粘菌素B ，搖勻后即可。[質(zhì)量控制] 大腸埃希菌ATCC 25922和糞腸球菌ATCC 33186不生長(zhǎng)；空腸彎曲菌胎兒亞種ATCC 29424生長(zhǎng)良好。待冷至50℃，搖勻，傾注無(wú)菌平板。[配法] 蛋白胨5g，胰蛋白胨5g，酵母膏5g，氯化鈉5g，瓊脂粉12g，萬(wàn)古霉素10ml，多粘菌素B 2500U，TMP 5mg，脫纖維羊血70ml，蒸餾水930ml。在BCYE平板上，培養(yǎng)4～5 天，菌落直徑約1～2mm，并出現(xiàn)亮藍(lán)和切削玻璃樣的構(gòu)造；繼續(xù)培養(yǎng)后菌落增大呈黃綠色，較光滑。[用法]液體標(biāo)本可直接接種培養(yǎng)基， 肺、肝、脾等固體標(biāo)本須制成100g/L懸液后再接種培養(yǎng)基，接種后的培養(yǎng)基置35℃需氧環(huán)境培養(yǎng)，培養(yǎng)箱需保持一定的濕度。另外分別配新鮮L半胱氨酸溶液（）及焦磷酸鐵溶液（），分別過(guò)濾除菌，再加入已滅菌瓊脂中， 加入1mol/L 氫氧化鉀溶液4～～，可用1mol/L 鹽酸溶液校正，傾注平板，冷卻后置4℃冰箱備用，亦可制成斜面，用于保存菌種。[配法]酵母浸液10g，活性（NoritSG）2g，瓊脂17g，N2乙酰氨基乙氨基乙醇磺酸（ACES）10g,蒸餾水80ml。(2)指示劑不能用乙醇配制，因有些細(xì)菌可使乙醇產(chǎn)酸，導(dǎo)致發(fā)酵或氧化反應(yīng)影響結(jié)果判斷。 [質(zhì)量控制]金黃色葡萄球菌ATCC2 592大腸埃希菌ATCC 25922發(fā)酵型；銅綠假單胞菌ATCC 27853氧化型；易變微球菌、糞產(chǎn)堿桿菌不利用。置35℃孵箱培養(yǎng)24~48h。將上述成分混合加熱溶解，分裝于試管中，每支試管5ml，高壓滅菌121℃15min，使成瓊脂高層，備用。 [配法] （1）HughLeifson培養(yǎng)基(革蘭陰性桿菌用)：蛋白胨2g，葡萄糖10g，磷酸氫二鉀 ，氯化鈉5g，溴麝香草酚藍(lán)（BTB），瓊脂 ，蒸餾水1L。觀察斜面上產(chǎn)色素情況。將上述成分加熱、溶解，分裝試管，118~121℃滅菌15min，制成斜面和高層備用。 (三)非發(fā)酵細(xì)菌用培養(yǎng)基 (甲)[用途] 金氏培養(yǎng)基(Kings Medium)用于檢測(cè)假單胞菌產(chǎn)生的青膿素。[質(zhì)量控制] 參照麥康凱瓊脂。與麥康凱瓊脂不同之處是挑取致病性大腸埃希菌菌落時(shí)，以無(wú)色菌落為主，同時(shí)兼取紅色菌落，如EPEC遲緩分解山梨醇，菌落呈紅色。臨用時(shí)，加熱溶解，再加山梨醇、結(jié)晶紫及中性紅溶液，搖勻傾注平板。分裝三角燒瓶100ml。 [用途] 用于致病性、侵襲性和產(chǎn)毒性大腸埃希菌分離培養(yǎng)。 [保存] 置4℃冰箱，2周內(nèi)用完。分解乳糖或蔗糖后產(chǎn)氣時(shí)有些菌株還能使培養(yǎng)基斷裂。不發(fā)酵乳糖和蔗糖的細(xì)菌僅發(fā)酵葡萄糖時(shí)使底層變黃，斜面變紅。[用法] 取待檢菌純培養(yǎng)物，用接種針作底層穿刺和斜面劃線接種，置35℃培養(yǎng)18~24h觀察結(jié)果。將前10種成分稱量混合于水中，再加瓊脂及酚紅溶液，加熱煮沸溶解。 [用途] 用于腸桿菌科細(xì)菌初步生化鑒定。[保存] 置4℃冰箱，2周內(nèi)用完。產(chǎn)硫化氫菌株可使底層或全管產(chǎn)生黑色反應(yīng)。斜面變黃，底層變黃，產(chǎn)氣者或不產(chǎn)氣者多屬大腸埃希菌群及發(fā)酵乳糖的菌株。將前8種成分稱量混合于水中，加熱溶解，再加入瓊脂和酚紅溶液，煮沸溶解分裝試管，每管4ml，經(jīng)115℃滅菌20min，立即制成高層斜面，待凝固后經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)備用。 [用途]克氏雙糖鐵瓊脂(Kliger iron agar)用于腸桿菌科細(xì)菌的初步鑒定。[質(zhì)量控制] 大腸埃希菌菌落呈紫紅色，有時(shí)有金屬光澤，直徑＞；傷寒沙門(mén)菌菌落呈灰白色，直徑＞；金黃色葡萄球菌不生長(zhǎng)。[用法] 取糞便標(biāo)本或增菌培養(yǎng)物接種平板，置35℃培養(yǎng)18~24h。將蛋白胨、磷酸鹽、瓊脂稱量混合于水中，并加熱煮沸溶解，校正pH至 ，分裝121℃滅菌15min備用。 [用途] 用于腸道致病菌及大腸菌群分離培養(yǎng)。[保存] 置4℃冰箱(避光)，1周內(nèi)用完。不發(fā)酵乳糖的腸道細(xì)菌呈無(wú)色菌落，光滑半透明。將上述成分(除中性紅外)稱量加入水中，加熱溶解，加入中性紅溶液，分裝滅菌115℃20min，冷卻至50℃左右時(shí)傾注平板。 [用途] 麥康凱瓊脂(Maconkey agar)用于腸道致病菌的分離培養(yǎng)和非發(fā)酵細(xì)菌鑒別。[保存] 避光，3天內(nèi)用完。沙門(mén)菌屬菌落呈無(wú)色半透明，產(chǎn)生硫化氫者菌落中心呈黑色；志賀菌屬的菌落呈無(wú)色半透明；大腸菌屬呈紅色渾濁；宋內(nèi)志賀菌能延緩發(fā)酵乳糖，培養(yǎng)24h后可以出現(xiàn)紅色菌落。將上述成分(除中性紅、煌綠外)混合于水中，加熱煮沸溶解，~，然后加入中性紅和煌綠溶液，充分混勻冷卻至50℃時(shí)傾注平板。 [用途]沙門(mén)菌屬和志賀菌屬(SalmonellaShigella)的分離培養(yǎng)。[質(zhì)量控制]大腸埃希菌呈黃色菌落；宋內(nèi)志賀菌呈無(wú)色菌落；傷寒沙門(mén)菌 呈紅色菌落有黑心；金黃色葡萄球菌 抑制生長(zhǎng)。[用法] 將標(biāo)本劃線接種平板，置35℃培養(yǎng)18～24h。將上述成分(酚紅除外)混合，加熱溶解，,再加入酚紅溶液混勻。 、賴氨酸、去氧膽酸鹽(XLD)培養(yǎng)基[用途] 為腸道菌選擇性培養(yǎng)基。(3)此培養(yǎng)基pH ，應(yīng)呈淡紅色。薔薇紅酸乙醇溶液無(wú)需滅菌，但加熱時(shí)應(yīng)避開(kāi)火焰。[保存] 4℃冰箱保存，1周內(nèi)用完。分解乳糖產(chǎn)酸的細(xì)菌，其菌落呈藍(lán)色；不分解乳糖的細(xì)菌，菌落為淡紅色的透明菌落。待冷卻至50℃左右，加入中國(guó)藍(lán)、薔薇紅酸乙醇溶液混勻，立即傾注平板，凝固后備用。 [配法]肉膏湯瓊脂()1L，10g/L中國(guó)藍(lán)溶液(滅菌)10ml，乳糖10g，10g/L薔薇紅酸乙醇溶液10ml。成品培養(yǎng)基應(yīng)避光保存。注：⑴ 慶大和亞碲酸鉀混合液應(yīng)新鮮配制并置冰箱保存。24h培養(yǎng)后，霍亂弧菌呈中心黑色、較大而扁平的菌落。[用法] 取待檢標(biāo)本劃線接種平板，置35℃培養(yǎng)過(guò)夜。 [配法] 蛋白胨10g，氯化鈉5g，牛肉浸膏3g，亞硫酸鈉(無(wú)水)3g，枸櫞酸鈉10g，豬膽汁粉5g，十二烷硫酸鈉20g，利凡諾（雷佛奴爾）3g，瓊脂粉12g，慶大霉素亞碲酸鉀混合液 1ml，蒸餾水1L。4℃冰箱保存，1月用完。注：⑴ 該培養(yǎng)基國(guó)內(nèi)有商品出售，多數(shù)產(chǎn)品已加入慶大霉素，使用時(shí)，應(yīng)詳閱說(shuō)明書(shū)。[質(zhì)量控制]霍亂弧菌(小川、稻葉)生長(zhǎng)良好，培養(yǎng)18~~；大腸埃希菌和變形桿菌生長(zhǎng)抑制。 由于該培養(yǎng)基抑制性強(qiáng)，其它非弧菌科細(xì)菌被抑制，而霍亂弧菌生長(zhǎng)迅速，16h菌落可達(dá)2mm，菌落青灰色，半透明，扁平，光滑濕潤(rùn)。 U，多粘菌素B6 U。 [配法]蛋白胨10g，牛肉浸膏3g，氯化鈉5g，枸櫞酸鈉10g，無(wú)水亞硫酸鈉3g，蔗糖(或白糖)10g，瓊脂15~20g，慶大霉素、多粘菌素B“雙抗液”2ml，蒸餾水1L。[保存] 置冰箱，1周內(nèi)用完。其它細(xì)菌菌落小而凸起，不透明，或有色素?；魜y弧菌迅速生長(zhǎng)，其它細(xì)菌生長(zhǎng)較緩慢。將上述成分稱量混合于水中加熱溶解，分裝121℃滅菌15min，傾注平板。 [用途] 用于霍亂弧菌分離培養(yǎng)。ELTor弧菌生長(zhǎng)良好；大腸埃希菌ATCC 25922 生長(zhǎng)抑制。在亞碲酸鉀瓊脂上菌落呈灰黑色。置35℃培養(yǎng)12~16h，觀察結(jié)果。 將前4種成分混合于水中，加熱溶解，校正pH至 ，分裝后121℃滅菌15min，傾注平板。 二、革蘭陰性桿菌分離培養(yǎng)基 (一)弧菌分離培養(yǎng)基 [用途] 用于霍亂弧菌分離培養(yǎng)。置35℃孵箱，經(jīng)24~48h培養(yǎng)，觀察結(jié)果。待冷至50℃左右，用無(wú)菌操作加入已滅菌的亞碲酸鉀溶液及羊血，混勻傾注平板。 [配法] 蛋白胨10g，氯化鈉5g，牛肉浸膏3g，葡萄糖2g，1%亞碲酸鉀45ml，脫纖維羊血100ml，瓊脂2g，蒸餾水900ml。⑶ 配制時(shí)所有器皿、棉塞等均應(yīng)高壓滅菌。注：⑴ 所用血清不能含有防腐劑。[用法] 將喉拭子直接接種于上述斜面上，置35℃培養(yǎng)16~24h。斜插在血清凝固器內(nèi)（或蒸籠）加熱80~85℃30min，使血清凝固成斜面，冷卻后放4℃冰箱內(nèi)。[配法]1%葡萄糖肉湯(pH )100ml，無(wú)菌動(dòng)物血清(牛、羊、豬、兔) 300ml。 （3）間歇滅菌的溫度不宜超過(guò)90℃。注：⑴ 本培養(yǎng)基由LowensteinJenden設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上改良。[質(zhì)量控制]用結(jié)核分枝桿菌菌株作陽(yáng)性培養(yǎng)試驗(yàn)。[用法] 取晨咳痰或其它體液標(biāo)本，（約2滴）滴種于培養(yǎng)基的斜面上，盡量搖晃，置35℃5%~10%二氧化碳溫箱內(nèi)培養(yǎng)1~4周，觀察結(jié)果。先將磷酸鹽、硫酸鎂、枸櫞酸鎂、天門(mén)冬素及甘油，加熱溶解于600ml蒸餾水中。第四節(jié) 分離培養(yǎng)基 一、革蘭陽(yáng)性桿菌分離培養(yǎng)基 [用途] 用于結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)。[保存] 置4℃冰箱，2周內(nèi)用完。[質(zhì)量控制] 有條件的實(shí)驗(yàn)室可用標(biāo)準(zhǔn)菌株，一般臨床實(shí)驗(yàn)室可用非01群弧菌，培養(yǎng)后生長(zhǎng)良好者方可使用。取表面菌液一白金環(huán)移種到堿性瓊脂、慶大瓊脂或TCBS瓊脂平板上。 將上述成分溶解于水中,校正pH ，分裝于試管8~10ml，經(jīng)121℃滅菌15min備用。 [用途] 霍亂弧菌增菌培養(yǎng)。注：⑴ 切勿高壓，隔水煮沸時(shí)間不超過(guò)5min。 [質(zhì)量控制] 培養(yǎng)基應(yīng)呈淡黃色或略呈淡綠色。 將上述成分加熱溶于水中，分裝試管（15150mm），每管5~7ml，隔水煮沸5min備用。 [用途] 用于沙門(mén)、志賀菌的增菌