【正文】 鏈球菌及革蘭陽性球菌初步分群。[用法] 取純菌接種培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)48h，觀察培養(yǎng)基液面。觀察結果時不必另行加堿。 [配法]含磷酸酚酞的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。經(jīng)無菌試驗后備用。陽性者立即顯粉紅色，并于5～10s內呈現(xiàn)深紫色反應。[用法] 將待檢菌作點狀穿種在平板上，置35℃培養(yǎng)24h。將前6種成分徐徐加熱溶解后，加入甲苯胺藍溶液，分裝試管， 121℃滅菌15min后備用。[用法] 將試驗菌接種培養(yǎng)基，同時接種對照管1支。培養(yǎng)基變?yōu)楹谏蜃厣邽殛栃?；不變色者為陰性。分裝于13mm100mm的試管，每管2ml。分裝于13mm100mm的試管，每管約3ml，115℃滅菌15min。[配法]蛋白胨10g，胰胨10g，葡萄糖10g，酵母浸膏3g，氯化鈉5g，蒸餾水900ml，脫纖維羊血100ml，萬古霉素10mg，多粘菌素B 2 500 U，TMP 5mg，兩性霉素B 2mg。[質量控制] 大腸埃希菌ATCC 25922和糞腸球菌ATCC 33186不生長；空腸彎曲菌胎兒亞種ATCC 29424生長良好。[用法]液體標本可直接接種培養(yǎng)基， 肺、肝、脾等固體標本須制成100g/L懸液后再接種培養(yǎng)基，接種后的培養(yǎng)基置35℃需氧環(huán)境培養(yǎng)，培養(yǎng)箱需保持一定的濕度。 [質量控制]金黃色葡萄球菌ATCC2 592大腸埃希菌ATCC 25922發(fā)酵型；銅綠假單胞菌ATCC 27853氧化型；易變微球菌、糞產(chǎn)堿桿菌不利用。觀察斜面上產(chǎn)色素情況。與麥康凱瓊脂不同之處是挑取致病性大腸埃希菌菌落時，以無色菌落為主，同時兼取紅色菌落，如EPEC遲緩分解山梨醇，菌落呈紅色。 [保存] 置4℃冰箱，2周內用完。將前10種成分稱量混合于水中，再加瓊脂及酚紅溶液，加熱煮沸溶解。斜面變黃，底層變黃，產(chǎn)氣者或不產(chǎn)氣者多屬大腸埃希菌群及發(fā)酵乳糖的菌株。[用法] 取糞便標本或增菌培養(yǎng)物接種平板，置35℃培養(yǎng)18~24h。不發(fā)酵乳糖的腸道細菌呈無色菌落，光滑半透明。沙門菌屬菌落呈無色半透明，產(chǎn)生硫化氫者菌落中心呈黑色；志賀菌屬的菌落呈無色半透明；大腸菌屬呈紅色渾濁；宋內志賀菌能延緩發(fā)酵乳糖，培養(yǎng)24h后可以出現(xiàn)紅色菌落。[用法] 將標本劃線接種平板，置35℃培養(yǎng)18～24h。薔薇紅酸乙醇溶液無需滅菌，但加熱時應避開火焰。 [配法]肉膏湯瓊脂()1L，10g/L中國藍溶液(滅菌)10ml，乳糖10g，10g/L薔薇紅酸乙醇溶液10ml。[用法] 取待檢標本劃線接種平板，置35℃培養(yǎng)過夜。[質量控制]霍亂弧菌(小川、稻葉)生長良好，培養(yǎng)18~~；大腸埃希菌和變形桿菌生長抑制。[保存] 置冰箱，1周內用完。 [用途] 用于霍亂弧菌分離培養(yǎng)。 將前4種成分混合于水中，加熱溶解，校正pH至 ，分裝后121℃滅菌15min，傾注平板。 [配法] 蛋白胨10g，氯化鈉5g，牛肉浸膏3g，葡萄糖2g，1%亞碲酸鉀45ml，脫纖維羊血100ml，瓊脂2g，蒸餾水900ml。斜插在血清凝固器內（或蒸籠）加熱80~85℃30min，使血清凝固成斜面，冷卻后放4℃冰箱內。[質量控制]用結核分枝桿菌菌株作陽性培養(yǎng)試驗。[保存] 置4℃冰箱，2周內用完。 [用途] 霍亂弧菌增菌培養(yǎng)。 [用途] 用于沙門、志賀菌的增菌。增菌靈敏度：傷寒沙門菌1105，鼠傷寒及副傷寒沙門菌1107。其它成分稱量混合，加入蒸餾水800ml，加熱溶解，待冷卻后兩液混合，充分搖勻，校正pH ~(通過調整磷酸鹽緩沖對的比例來校正pH值)。 [用途] 血液和骨髓液病原菌的增菌培養(yǎng)。 [用法] 將采取的血液標本，以無菌手續(xù)注入培養(yǎng)瓶中（血液1ml，培養(yǎng)液10ml），置35℃培養(yǎng)箱內，每天1次取出觀察結果。第三節(jié) 保存和增菌培養(yǎng)基一、菌種保存培養(yǎng)基 [配法] 蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化鈉3g，磷酸氫二鈉2g，蒸餾水1L 。 [質量控制] 流感嗜血桿菌ATCC 1021肺炎鏈球菌ATCC 6305生長良好，菌落典型。[配法] pH ~ 100ml，脫纖維羊血(或兔血) 5~10ml。[保存] 置4℃冰箱內可以使用較長時間。 [用途] 細菌培養(yǎng)最基礎的培養(yǎng)基，除用于一般細菌的培養(yǎng)外，又可以作營養(yǎng)瓊脂及其它培養(yǎng)基的基礎。將上述成分溶于水中，校正pH ,分裝試管，每管2~3ml，置121℃滅菌15min備用。(改良Ryu法)A液：5%石炭酸10ml，鞣酸2g，飽和硫酸鋁鉀溶液 10ml； B液：結晶紫乙醇飽和液。⑶ 脫色液：95%乙醇⑷ 復染液：，95%乙醇100ml為貯存液，取貯存液10ml，加蒸餾水90ml為應用液。 志賀菌屬4種多價血清：痢疾志賀菌Ⅰ、Ⅱ血清，福氏志賀菌多價血清及分型血清（1～6型），宋內志賀菌診斷血清，鮑氏志賀菌多價血清及分型血清。 ⑵ SMZ紙片（、）：出現(xiàn)抑菌圈即為敏感。質控菌株：表皮葡萄球菌陽性， 腐生葡萄球菌陰性。染色前24h將A液、 B液混合,過濾后裝入試劑瓶內備用。③復染液(呂弗勒美藍液)：美藍乙醇飽和溶液30ml，100g/，蒸餾水100ml。乙液：碘 2g，碘化鉀3g，蒸餾水300ml。[配法] 蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，蒸餾水1L。稱取500g置容器加入蒸餾水1L，攪勻后置冰箱過夜，次日煮沸加熱30min，并用玻棒不時攪拌用絨布或麻布進行粗過濾，再用脫脂棉過濾即成。 [配法] 蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂粉（優(yōu)質）12g，蒸餾水1L。[保存] 置4℃冰箱，1周內用完。 [配法] , 胰化酪蛋白20g,氯化鈉5g，蒸餾水1L。大腸埃希菌(ATCC 25922)生長良好,動力陽性；福氏志賀菌(ATCC 12022)生長良好,動力陰性；金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)生長良好,動力陰性。在觀察的過程中，至少應作兩次分離培養(yǎng)?！?U青霉素酶。[用法] 取新鮮標本1g或棉拭子采樣直接種于該培養(yǎng)管內。 ⑵ 磷酸鹽緩沖對中，兩者的用量比例與亞硒酸鹽及蛋白胨的品種有關。[用法] 取糞便標本1g直接種于增菌液內，35℃16~18h培養(yǎng)，取出轉種于分離培養(yǎng)基即可。[用法] 將待檢標本接種到堿性胨水中，置35℃培養(yǎng)6~8h，霍亂弧菌呈均勻混濁生長，表面有菌膜出現(xiàn)。 [配法] ，枸櫞酸鎂(或枸櫞酸鈉) ，甘油12ml，蒸餾水600ml，馬鈴薯淀粉30g，新鮮雞卵液1L，2%孔雀綠水溶液20ml。（2），一般無須校正。白喉桿菌在上述培養(yǎng)基上，菌落呈圓形，表面光滑、完整，9g/L氯化鈉溶液中易乳化，用阿爾培脫染色，兩極異染顆粒明顯。[用法]將標本直接接種于亞碲酸鉀平板上?；魜y弧菌生長較快，菌落大而扁平，呈青灰色，半透明，光滑濕潤。[用法] 取糞便標本或增菌培養(yǎng)物1接種環(huán)接種平板，置35℃溫箱培養(yǎng)16~18h。 將上述成分(除“雙抗液”外)稱量混合于水中，加熱溶解，分裝滅菌121℃15min，待冷卻至50℃后，每100ml內加“雙抗液”，另加5g/，再傾注平板。⑵“雙抗液”配制：98ml滅菌蒸餾水中加慶大霉素(25 000 U/ml)1ml,多粘菌B或抗敵E(300 000 U/ml)1ml。[質量控制] 配成的培養(yǎng)基呈亮黃色透明；ELTor弧菌稻葉型生長良好；ELTor弧菌小川型生長良好；大腸埃希菌ATCC25922抑制生長。[用法] 將標本接種平板，置35℃18～24h。若過堿呈鮮紅色，過酸則呈藍色，均不適用。[保存] 貯存于4℃有效期5天。注：煌綠要新配，中性紅要優(yōu)質。注：非發(fā)酵細菌在該平板上是否生長，是臨床鑒定某些非發(fā)酵細菌的指標之一。[保存] 置4℃冰箱，1周內用完。[質量控制]奇異變形桿菌 K/A 硫化氫陽性；大腸埃希菌 A/A；志賀痢疾桿菌 K/A；傷寒沙門菌 K/A 硫化氫陽性；銅綠假單胞菌 K/K。發(fā)酵乳糖或蔗糖的菌可使斜面及底層均變黃色。 [配法] 蛋白胨5g，月示胨3g，氯化鈉5g，膽鹽（豬、牛、羊）5g，山梨醇10g，瓊脂粉12g，5g/L中性紅溶液5ml，蒸餾水1L將前4種成分混合于水中，加熱溶解，再加入瓊脂粉加熱煮沸溶解。[保存] 置4℃冰箱，1周內用完。 （2）葡萄球菌O/F(葡萄球菌和微球菌鑒別用)：胰蛋白胨10g，酵母浸膏10g，瓊脂20g，蒸餾水1L，葡萄糖10g。（四）其它革蘭陰性桿菌用培養(yǎng)基緩沖活性炭酵母瓊脂培養(yǎng)基（BCYE）[用途] 用于嗜肺軍團菌的分離培養(yǎng)。[保存] 在室溫、暗室中可保存1周（1）Skirrow’s培養(yǎng)基[用途] 用于空彎及幽門螺桿菌分離培養(yǎng)。 2）彎曲菌屬系微需氧菌，培養(yǎng)時可提供5%氧氣及10% 二氧化碳。[質量控制] 大腸埃希菌ATCC 25922不生長；糞腸球菌ATCC 33186不生長；空腸彎曲菌胎兒亞種ATCC 29424生長良好。接種菌若能分解培養(yǎng)基中的糖（醇）類而生成酸，使指示劑呈酸性反應，若產(chǎn)生氣體，則可使液體培養(yǎng)基中的倒管(Durham管)內出現(xiàn)氣泡；若接種菌不分解糖（醇）則無反應。分解菊糖的菌株使培養(yǎng)基變黃；不分解菊糖的菌株，培養(yǎng)基不變色。二、酶類測定培養(yǎng)基和試劑 [用途] 檢查細菌使氨基酸脫羧基形成胺使培養(yǎng)基變堿的能力。陰性呈黃色或不變色。陽性反應在孔周圍出現(xiàn)不小于4mm直徑粉紅色圈，陰性反應培養(yǎng)基的顏色無改變。表皮葡萄球菌ATCC 14990和大腸埃希菌ATCC 25922陰性。[保存]置棕色瓶內可用一周，4℃冰箱保存，或分裝于棕色瓶內密封。 [質量控制] 普通變形桿菌ATCC 13315(8h)整個培養(yǎng)基變紅、肺炎克雷伯菌ATCC 27236僅斜面變紅(24h)；大腸埃希菌ATCC 25922為陰性(24h)。在平皿蓋上滴加濃氨水1滴，熏蒸片刻。該培養(yǎng)基常用方法有2種。經(jīng)10～30min觀察結果，出現(xiàn)穩(wěn)定沉淀物為陽性。 [質量控制] 金黃色葡萄球菌ATCC 25923陽性；無乳鏈球菌ATCC 13813陰性。[用途] 苯丙氨酸脫氨酶是變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬和摩根菌屬所特有，可與腸桿菌科及其它細菌區(qū)別。注：(1) 苯丙氨酸試驗須在加入三氯化鐵試劑后立即觀察，因綠色易很快褪去，無論陽性或陰性結果都必須在5min內作出判斷。附：Lugol碘液配制 ⑴ 貯存液：將碘化鉀 10g溶于100m1蒸餾水中，緩慢加入5g結晶碘不斷研磨振蕩直至溶解，裝入棕色瓶中。碘液易于褪色，使用前應進行質量控制。 [配法] 蛋白胨10g，粘液酸10g，蒸餾水1L，2g/L溴麝香草酚藍溶液12ml。 [配法] 酵母浸膏1g，硫酸銨2g，磷酸二氫鉀 ，氯化鈉2g，丙二酸鈉3g，蒸餾水1L。 [配法] 醋酸鹽2g，氯化鈉5g，硫酸鎂2g/L，磷酸氫銨1g，磷酸氫二鉀1g，瓊脂20g，蒸餾水1L。 [用途]幫助屬間鑒別、種間鑒別和沙雷菌屬菌種的鑒定。 [配法2(Christensen)]枸櫞酸鈉3g，磷酸氫二鉀1g，氯化鈉5g，,瓊脂5g，蒸餾水 lL（）先將鹽類溶解于水內，調整pH，再加入瓊脂，加熱溶化后，加入指示劑，混合均勻后分裝試管，高壓滅菌121℃15min，放成斜面。⑶ 通常培養(yǎng)24h觀察結果，但有些枸櫞酸鹽陽性的細菌則需孵育48h以上，才能使培養(yǎng)基的pH變化?？捎枚喾N細菌試驗同一含碳化合物，亦可用多種含碳化合物試驗同一種細菌。乙液：，5mol/L冰醋酸溶液 100m1?？捎谠嚬軆仍偌尤肷僭S鋅粉，如出現(xiàn)紅色證明產(chǎn)生芳基肼，表示硝酸鹽仍然存在；如仍不產(chǎn)生紅色，表示硝酸鹽已被還原為氨和氮。48h培養(yǎng)物檢測亞硝酸鹽存在與否。 [配法] 蛋白胨10g,氯化鈉5g,牛肉浸膏5g,新鮮膽汁(豬、牛)400m1,蒸餾水600m1。 [配法]同血瓊脂平板。 ⑶ 用無菌9g/L氯化鈉溶液洗滌3次的羊紅細胞，制成5%含量的羊血瓊脂平板效果較好。[用法]將培養(yǎng)物接種上述培養(yǎng)基中，掛上紙條經(jīng)35℃孵育24h。（Optochin sensitivity test)[用途] 測定細菌對化學藥品奧普托欣敏感性。其判定敏感的最低標準為抑菌環(huán)直徑15~16mm或更大；若＜15mm，應加做膽汁溶解試驗來確定。 [配法] ，葡萄糖 2g/L。[用法] 取純培養(yǎng)物接種兩管，1支氰化鉀實驗管，1支對照管，置35℃培養(yǎng)24~72h。 （4）用于VP試驗。然后加肌酐保存3~4周。 ⑵ 試劑必須用已知陽性和陰性的標準菌株進行對照檢查。氫氧化鉀溶液可長期保存。通常每毫升培養(yǎng)物滴加1滴指示劑。（3） 色氨酸滴板法試劑： （pH ）。有瓊脂擴散法和稀釋法兩種。 [質量控制] 用質控菌株測定藥物的抑菌環(huán)與NCCLS的標準參比判斷培養(yǎng)基的質量。 二、MH肉湯培養(yǎng)基 [用途] 用于稀釋法細菌藥物敏感試驗(MIC和MBC測定)。配法如下:，即為含鈣離子10mg/ml貯存液。同上述高滲鹽培養(yǎng)基，唯高壓蒸汽滅菌時采用115℃ 20min，以免蔗糖分解。如發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液產(chǎn)生混濁、溶血、絮狀沉淀或瓶壁上附有粘性顆粒等細菌生長現(xiàn)象，立即分離至L型細菌分離平板上進行鑒定。放在密封塑料袋中，置4℃冰箱備用。在誘導區(qū)與非誘導區(qū)同時見到