電泳技術及其在分子生物學中的應用-文庫吧資料
2025-01-22 19:44本頁面
【正文】 Dimensional SDSPAGE Isoelectric Focusing (IEF) 等電聚焦電泳的過程 電泳時可將樣品置于凝膠的任何位置； 初始位置在負極時，因 pH＞ pI，蛋白質分子帶負電，電泳時向正極移動；移動過程中， pH逐漸下降，所帶負電荷量逐漸減少，蛋白質移動速度減慢；當移動到 pH=pI時，蛋白質所帶凈電荷為零， 蛋白質即停止移動； 各種不同蛋白質在電泳結束后，會分別聚集于相應的等電點位置，形成一個很窄的區(qū)帶；區(qū)帶的位置是由 pH梯度的分布和蛋白質的 pI所決定，而與蛋白質分子的大小和形狀無關。 當?shù)鞍踪|分子量在 15KD到 200KD之間時 ， 電泳遷移率與分子量的對數(shù)呈線性關系 。 蛋白質 SDS復合物的形狀近似于長的橢圓棒，它們的短軸是恒定的，而長軸與蛋白質分子量的大小成比例。 限制性片段多態(tài)性 (RFLP) 點多態(tài)性實驗方法 SDS聚丙烯酰胺凝膠 電泳 （ SDSPAGE） 的原理 在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進 SDS（十二烷基磺酸鈉）， SDS能斷裂分子內和分子間氫鍵，破壞蛋白質的二級和三級結構，同時，在強還原劑（ beta巰基乙醇）作用下，使半胱氨酸之間的二硫鍵斷裂。這樣，利用該限制性內切酶消化此 DNA 時，便會產(chǎn)生與正常不同的限制性片段。一亞甲雙丙烯酰胺參與下，聚丙烯胺鏈與鏈之間交叉聯(lián)接而形成凝膠 . 與瓊脂糖凝膠電泳的比較 , PAGE的特點 ?分辨率很強，長度上相差 1bp的 DNA即可分開； ?從聚丙烯酰胺凝膠中回收的 DNA純度很高，可適用于要求最高的實驗（如胚胎注射）； ?裝載更多的 DNA量； ?最適合分離小片段 DNA(5500bp),可以分離 蛋白質 。 聚丙烯酰胺凝膠 聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE） 聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺單體，在催化劑 TEMED(N， N， N， N39。 ? 凝膠和電泳緩沖液中的溴化乙錠 。 雙鏈 DNA分子在凝膠中的 遷移率 ?影響 DNA 在瓊脂糖凝膠中的遷移速
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