【正文】 多次的洗滌步驟，特異性也會(huì)有所降低。直接法可以減少洗 滌和培養(yǎng)步驟，但對 IgM單抗很少能適用。間接法是指先將細(xì)胞與特異抗體混合培養(yǎng)，使特異抗體結(jié)合在細(xì)胞表面，然后加入預(yù)先用抗鼠IgG（二抗）處理的磁性微球。 IMM 與細(xì)胞的結(jié)合可以采取兩種方法，直接法和間接法。由于它能特異性地與靶物質(zhì)結(jié)合并使之具有磁響應(yīng)性，因此將免疫磁性微球與含有靶物質(zhì)（欲分離的物質(zhì)）的復(fù)雜混合物共同培養(yǎng)，則免疫磁性微球可以通過抗原抗體反應(yīng)選擇性地與靶物質(zhì)結(jié)合，當(dāng)此混合物通過一個(gè)磁場裝置時(shí)，與免疫磁性微球結(jié)合的靶物質(zhì)就會(huì)被磁場滯留，從而與其它復(fù)雜 物質(zhì)分離開來。下面以免疫磁性微球?yàn)榇碚f明磁性納米粒在生物醫(yī)藥方面的應(yīng)用。 另外，用磁性納米粒制備的免疫磁性微球 在生物醫(yī)藥方面的應(yīng)用也非常廣泛，而且發(fā)展較快，國外已有產(chǎn)品上市。用脂質(zhì)體包裹的超順磁性氧化鐵納米粒，可應(yīng)用于鑒別淋巴結(jié)反應(yīng)性增生和腫瘤轉(zhuǎn)移， 同時(shí)脂質(zhì)膜上結(jié)合特定的功能團(tuán)可使脂質(zhì)體包裹的造影劑成為靶向造影劑，如含乳糖基?；拾贝嫉闹|(zhì)體可用于肝細(xì)胞靶向給藥，含聚乙烯二醇醚的脂質(zhì)體可靶向于梗塞心肌等。其中磁性脂質(zhì)體較早地應(yīng)用于臨床診斷學(xué)的 MRI 造影增強(qiáng)技術(shù)中 [30]。 超順磁性氧化鐵納米粒除了應(yīng)用于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)外，也有用作腦血流灌注和心肌缺血評價(jià)的報(bào)導(dǎo)。要實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)，可減小氧化鐵核心的粒度，而氧化鐵核心的變小，又將導(dǎo)致更可觀的 T1 縮短作用，使之更加適用于MRA。在動(dòng)物模型上把 FeOBPA應(yīng)用于腹部血管的 MRA，結(jié)果證明在普通場強(qiáng)下 FeOBPA 就可進(jìn)行 MRA。同樣，由于 AMI227 血漿半衰期長，一次增強(qiáng)可作多種成像，也可增加扭曲血管或血流速度較慢血管的信號強(qiáng)度，因此 AMI227 可能是一種優(yōu)良的 MRA 對比劑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有的血管在靜注 AMI227 后45min 都增強(qiáng)效果都非常明顯，并且以三種劑量下的增強(qiáng)程度沒有明顯差別。 SHU 555A 濃度越高，肝實(shí)質(zhì)信號的強(qiáng)度下降就越顯著，門脈系統(tǒng)的對比度就越大，其中以門 脈左主支表現(xiàn)最為明顯。有人用 SHU 555A 在 48 位病人身上進(jìn)行了臨床試驗(yàn)，結(jié)果表明，靜注 SHU 555A 明顯改善了門脈系統(tǒng)的顯示，三級分支的顯示率從增強(qiáng)前的 %上升到增強(qiáng)后的 %。 (2) 肝硬化、肝炎等疾病的診斷 正常肝組織在 T2WI 上表現(xiàn)為均勻的明顯的信號降低；而肝硬化部位（增生的纖維間隔和再生結(jié)節(jié)）由于缺乏吞噬細(xì)胞，表現(xiàn)為不均勻性的信號降低，且信號降低程度低于正常肝組織；活動(dòng)性肝炎由于吞噬細(xì)胞的功能受損，可表現(xiàn)為均勻的輕度信號降低；利用這些差別，應(yīng)用超順磁性氧化鐵納米?？商岣?MRI 對于肝硬化、肝炎等肝臟疾病檢出的靈敏度。良性肝臟腫瘤的信號雖然降低，但弱于正常肝組織，而且具有一定的特征性，故良性肝臟腫瘤的檢出率仍可達(dá) 90%以上。 良性肝臟腫瘤（如局灶性結(jié)節(jié)增生和肝細(xì)胞腺瘤）由于含有吞噬細(xì)胞或血池（血管瘤），也可引起 T2WI腫瘤信號減弱，從而可與惡性腫瘤的高信號相區(qū)別 [29]。 有人 [27]在 場強(qiáng)下，對 15 例肝轉(zhuǎn)移瘤用 AMI25 進(jìn)行增強(qiáng)掃描，結(jié)果與增強(qiáng)前的 MR 圖像相比，檢出病灶的數(shù)量增加了 16 倍，檢出病灶的最小直徑也從增強(qiáng)前的 下降到 ，效果非常明顯。 241 USPIOs 由于粒徑較小，血漿半衰期較長，可誘導(dǎo)顯著的 T1 縮短效應(yīng)，在縮短 T2 值的同時(shí)引起了明顯的T1 值縮短，在使 T1WI 上組織信號增高的同時(shí)，使 T2WI 上組織信號降低。超順磁性氧化鐵納米粒分布于組織后，呈不均勻分布，造成局部磁場的不均勻，從而加速了質(zhì)子去相位的過程，縮短了組織的 T2 和 /或 T1 值，使組織信號降低（陰性增強(qiáng)）或增高（陽性 增強(qiáng)）。常見的順磁性 MR 對比劑如 GdDTPA，由于含有不成對電子（在釓原子的外層軌道上），通過質(zhì)子 /偶極子 電子 /偶極子的相互作用，可使局部磁場波動(dòng)增強(qiáng)，使質(zhì)子弛豫增強(qiáng)，結(jié)果造成組織的弛豫時(shí)間縮短。 總體上講， SPIOs 和 USPIOs 是兩類安全性較高的 MR 對 比劑。AMI227 也未見嚴(yán)重副反應(yīng)的發(fā)生。 AMI25 的臨床劑量稍大些 [27]，但 70kg 體重的成年人也只需接受約 80mg 的 Fe 就可滿足診斷需要。 SHU555A 的常規(guī)臨床劑量非常小， 8μ mol Fe/kg 就可滿足診斷需要，臨床試驗(yàn)表明，在 SHU555A 的用藥過程及用藥后，沒有明顯的疼痛或其它不適癥狀，也未見明顯的心血管毒性。 從目前臨床應(yīng)用來看，超順磁性氧化鐵的臨床應(yīng)用劑量都遠(yuǎn)小于其最低中毒劑量。超順磁性氧化鐵的毒副作用主要取決于鐵的含量。這是由于 USPIOs 粒 徑 較小而且表面包有較厚的葡聚糖層，與血漿蛋白和調(diào)理素的作用減弱，影響了吞噬細(xì)胞對其的攝入，血循環(huán)半衰期長達(dá) 100min 以上，而在血管中停留較 長時(shí)間使得其可以通過 毛細(xì)胞血管壁，更廣泛地分布于組織中，特別是可通過毛細(xì)血管末梢進(jìn)入骨髓，并可通過淋巴管，輸送到淋巴結(jié)。靜注后 2h，肝臟含量達(dá)最高值，約為 89%[26]。 超順磁性氧化鐵的粒徑大小對其進(jìn)入網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的部位有較大影響，一般直徑較大的 SPIOs 主要為肝、脾的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)所攝入。所以超順磁性氧化鐵是一種網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對比劑，可用于肝、脾、淋巴結(jié)、骨髓等富含網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞的組織和器官的 MR 增強(qiáng)。 2．超順磁性氧化鐵納米粒的生物學(xué)特性 超順磁性氧化鐵 納米粒 在體內(nèi)的分布具有明顯的特異性。 另一類是超微型超順磁性氧化鐵納米粒（ Ultrasmall superparamagic iron oxides， USPIOs）：最大直徑不超過30nm，如 Advanced Magics 公司的開發(fā)的 AMI227（ Ferumoxtran）和 Nyed 公司開發(fā)的 FeOBPA 就屬于這類制劑，前者平均直徑只有 4nm~6nm，后者顆粒更小。 AMI25 在美國、歐洲及日本等國已完成臨床試 驗(yàn)，已有商品出售，國內(nèi)現(xiàn)也有部分地區(qū)在臨床上使用。它是由 Fe3O4 和 Fe2O3 組成，外包碳氧葡聚糖，氧化鐵核心由若干個(gè)單晶體構(gòu)成，每個(gè)單一的晶體的直徑約為 ，整個(gè)親水性納米粒的直徑約為 62nm。一類是普通的超順磁性氧化鐵納米粒（ SPIO）：一般直徑 40nm~400nm 之間不等。 SPIO 產(chǎn)品之間的差別主要表現(xiàn)在粒度大小的不同上面。 SPIO 的基本結(jié)構(gòu)是以氧化鐵顆粒為核芯，外包裹葡聚糖等，以使其更好地分散，直徑一般在 nm 數(shù)量級。磁性納米粒在臨床磁共振成像（ Magic Resonance Imaging， MRI）中的應(yīng)用，主要就是指納米尺度的超順磁性氧化鐵（ SPIO）粒子在MRI 中的應(yīng)用。但隨著臨床使用的增加， GdDTPA 的一些明顯的不足這處被人們所認(rèn)識(shí)，如：它在體內(nèi)消除太快（入血后可迅速通過細(xì)胞間隙，并經(jīng)腎臟排泄）；而且體內(nèi)分布沒有特異性，使MR 圖像對比不能明顯改善，同時(shí)也需要相應(yīng)的設(shè)備能夠快速掃描，其價(jià)格也較貴。 臨床上使用較多的磁共振（ MR）對比劑是二乙二胺五醋酸釓（ GdDTPA），它能有效地提高磁共振成像的診斷水平。 磁性納米粒在臨床磁共振成像中的應(yīng)用 氧化鐵納米粒本身可以沒有磁性，當(dāng)在外加磁場存在時(shí)，氧化鐵納米粒就可很快產(chǎn)生磁性，而且一旦外加磁場撤消，其磁性又可消失，氧化鐵納米粒的這種性能被稱為超順磁性。這種治療方式有望減低化療藥物的劑量、降低化療的毒副作用、減輕病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，增強(qiáng)腫瘤治療的安全指數(shù)。一般采用的熱介質(zhì)就是氧化鐵的磁性納米粒。 值得注意的是近年來由于科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，腫瘤的治療方法也更為豐富，其中全身和局部加熱治療已成為腫瘤治療過程中繼手術(shù)和化療之后的第三個(gè)重要手段，研究表明，腫瘤對 40℃以上的溫度的耐受性很差。通過磁共振技術(shù)、藥物動(dòng)力學(xué)與組織檢查，表明一半的病人身上磁性納米粒成功地靶向輸送到了腫瘤部位，而且在治療中器官毒性沒有增加，只有當(dāng)藥物劑量超過 50mg/m2 時(shí)，有表阿霉素相關(guān)的毒性出現(xiàn)。藥物的劑量從 5 mg/m2 增加到 100mg/m2，在體外腫瘤部位應(yīng)用磁場 60min~120min。在此基礎(chǔ)上， Lubbe 等人 [22]在 14 位晚期實(shí)體瘤病人身上進(jìn)行了 載表阿霉素磁性納米粒的一期臨床試驗(yàn)。結(jié)果在實(shí)驗(yàn)條件下動(dòng)物對不同濃度的空白及載藥磁性納米粒未表現(xiàn)出任何毒副作用，也不能測定出 LD50 值，只有在非常高的劑量下，動(dòng)物在一、二天內(nèi)表現(xiàn)出嗜睡。作者認(rèn)為，這種磁性介導(dǎo)的靶向藥物輸送系統(tǒng)為惡性腫瘤的治療提供了獨(dú)特的方法和手 段，這種治療方式通常不會(huì)產(chǎn)生全身系統(tǒng)的毒性，這種技術(shù)很有可能被用于載帶放射性核素、抗腫瘤抗生素、細(xì)胞因子，甚至用于載帶基因。結(jié)果與不給藥組和耳靜脈給藥組相比，股骨動(dòng)脈給與米托蒽琨磁性納米粒之后，腫瘤出現(xiàn)完全的和永久性的緩解（ p），而沒有觀察到任何毒副作用。 磁性納米粒的水分散體在醫(yī)藥方面也有較多的研究報(bào)導(dǎo)。 小鼠 iv 給藥之后，在其左腎外加一個(gè)磁場（ 850mT，保持 10min），結(jié)果左腎的放射活性比作為對照的右腎高出 3 倍；另外有人 [19]制備了含吲哚美辛的聚甲基氰基丙烯酸甲酯的 NP，經(jīng)動(dòng)脈脈或靜脈給大鼠注射后，在大鼠的尾部外加一個(gè)磁場，到注射給藥后 60min 時(shí)，在大鼠尾部的藥物濃度比對照高出 60 倍，不加磁場時(shí)，含吲哚美辛的聚甲基氰基丙烯酸甲酯 NP 在肝脾的濃度較高。有人 [18]用 10nm~50nm 的氧化鐵磁性納米粒制備了含 3H 放線菌素 D 的聚氰基丙烯酸烷基酯 NP，其粒徑為 220nm。由于磁場聚焦的難題尚未解決，因而對于深部腫瘤的治療受到較大限制。納米粒中藥物在腫瘤組織的 緩慢釋放，能夠較長時(shí)間維持高濃度化療藥物水平 [17]。這種給藥系統(tǒng)的特點(diǎn)在于可人為控制給藥部位，使藥物在靶部位蓄積并緩慢釋放，達(dá)到抑制腫瘤生長乃至消除腫瘤的效果；另一方面，減少非病變部位的藥量，從而減少了化療藥物對正常人體組織的破壞作 用。 磁性納米粒廣泛用作藥物的載體，尤其作為抗癌藥物載體的研究較多。 磁性納米載體遞藥體系包括磁性微球、磁性納米粒和磁性納米脂質(zhì)體等。已經(jīng)證明，在血流速率為 ~，在 的外磁場下，就足以使含有 20%（ g/g）磁性載體全部滯留。 磁性遞藥體系（ Magic delivery system）將藥物靶向的過程主要是通過血液作用于納米粒的力與磁場產(chǎn)生的磁力之間的競爭來完成的。這種構(gòu)想的實(shí)現(xiàn)將降低藥物使用劑量（ Dose of administration）和毒副作用（ Side effects）、提高藥物的治療效率、拓展某些藥物的使用范圍、減輕病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，可以說這是治療物質(zhì)使用的又一次革命。如對于溫敏磁性脂質(zhì)體，還要測定脂質(zhì)轉(zhuǎn)化溫度；對于磁性免疫納米粒要測定樣品表面抗體的濃度和活性、與細(xì)胞表面結(jié)合的玫瑰花環(huán)試驗(yàn)等。測定方法是將脂質(zhì)體樣品加入人血漿，于透析管中 370C 孵育，測定不同時(shí)間從脂質(zhì)體中釋出藥物的量，并同時(shí)在顯微鏡下觀察脂質(zhì)體形態(tài)的變化。 2．物理穩(wěn)定性 脂質(zhì)體屬于膠體分散體系，屬于熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，其物理穩(wěn)定性的研究主要包括以下幾方面： 237 脂質(zhì)體中藥物的滲漏率考察、凝聚速率的考察、相轉(zhuǎn)化溫度的測定、沉降分析等；還包括觀察脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)形態(tài)、粒徑大小分布在不同時(shí)間的變化情況，來了解脂質(zhì)體的穩(wěn)定程度。 1．化學(xué)穩(wěn)定性 這種穩(wěn)定性一方面包括脂質(zhì)體中孢粉藥物的穩(wěn)定性；另一方面包括脂質(zhì)體的膜材成分磷脂等容易發(fā)生水解和氧化，由于膜材的水解會(huì)使脂質(zhì)體制劑中的酸度升高；磷脂結(jié)構(gòu)中包含不飽和基團(tuán)可以自發(fā)地發(fā)生氧化反應(yīng)，這種氧化反應(yīng)機(jī)制是游離基連鎖反應(yīng)，產(chǎn)生的氧化反應(yīng)產(chǎn)物對人體有一定毒性，因此脂質(zhì)體的化學(xué)穩(wěn) 定性著重研究防止和控制脂質(zhì)體氧化的問題，以及檢查和評價(jià)有氧化反應(yīng)產(chǎn)生的有毒的過氧化物的方法。 穩(wěn)定性考察 該項(xiàng)指針對磁性脂質(zhì)體等不穩(wěn)定體系而言尤為重要。 載藥量的測定 對于載藥的磁性納米粒，可通過一定的處理將藥物與載體分離，或采用同位素標(biāo)記，而后通過高效液相、 分光光度法或液質(zhì)聯(lián)用等分析手段進(jìn)行測定。 組織分布試驗(yàn) 在自然狀態(tài)下小鼠靜脈注射樣品后，在不同時(shí)刻，分批處死，觀察各主要臟器（如心、肝、脾、肺、腎等）物理形態(tài)的變化情況，并測定藥物或磁性物質(zhì)的含量。如以 Cu 為靶源，在 40kV和 35mA 下測定磁性納米粒的 X 射線衍射圖，然后與 ?三氧化二鐵和四氧化三鐵的標(biāo)準(zhǔn)圖 譜進(jìn)行比對，判斷磁性納米粒的特征峰是否與 ?三氧化二鐵和四氧化三鐵的特征峰一致，從而確定其結(jié)構(gòu)類型。 30 分鐘后將小鼠拉脫頸椎處死，解剖取出左右腎，分別測定其中的藥物濃度，從而對比體內(nèi)磁導(dǎo)向定位效果?？赏ㄟ^磁共振技術(shù)、藥物動(dòng)力學(xué)與組織檢查等方式進(jìn)行分析測定。如取家兔腎臟，動(dòng)脈血管接在蠕動(dòng)泵的輸出端，靜脈血管接在乳膠管上，尿管扎緊，將腎臟置于磁場或無磁場中，觀察流出液中磁 236 性制劑的量，從而定性觀察，在離體器官水平制劑的磁導(dǎo)向定位性能。將每個(gè)吸附的制劑量除以吸附制劑量和未吸附制劑的量的綜合，計(jì)算導(dǎo)向制劑的定位百分率?？梢栽O(shè)計(jì)平行多口裝置，用來考察靶部位離磁場距離的不同對磁性制劑定位的影響。 磁導(dǎo)向定位 1．體外磁導(dǎo)向定位 最簡單的方法是將磁性納米粒的水分散溶液置于試管中，在其一側(cè)加上一定大小和形狀的磁鐵，記錄磁性納米粒全部集中于試管一側(cè)所需時(shí)間，時(shí)間越短磁定位性能越好?？蓪悠贩湃氪艔?qiáng)計(jì)的樣品管中，在一定條件下測定磁性納米粒的磁滯回曲線，并自動(dòng)打印出飽和磁場強(qiáng)