chapter親和層析ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-01-12 13:27本頁(yè)面
【正文】 吸附操作要保證吸附介質(zhì)對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物有較高的吸附容量 ， 雜質(zhì)的非特異性吸附要控制在盡可能低的水平 。 親和吸附平衡 色素配基與載體介質(zhì)有吸附作用 ， 在高鹽濃度下 ， 兩者間可發(fā)生強(qiáng)疏水性作用 ，造成色素配基倒伏 ， 導(dǎo)致吸附容量下降 、 。 親和吸附平衡 親和吸附平衡 色素親和吸附平衡 色素配基 CB為一種生物模擬色素 ， 具有特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu) ， 可以和多種蛋白通過(guò)不同機(jī)理結(jié)合 。如：AHSepharose 4B 手臂 作用：減少親和作用空間位阻 連接：通過(guò)化學(xué)反應(yīng)與活化基團(tuán)連接 手臂化合物： 乙二胺 NH2CH2CH2NH2 ? 已二胺 NH2CH2CH2CH2CH2NH2 ? 6氨基已酸 NH2CH2CH2CH2CH2COOH ? 環(huán)氧氯丙烷 ? 1， 4 丁二醇縮水甘油醚 親和吸附等溫線(xiàn) 親和吸附平衡基本上可以用 Langmuir 或 Freundlich等溫式表達(dá) 。 “ 接臂 ” 的途徑： 常用二胺化合物（丁二胺、乙二胺、己二胺）。 親和色譜介質(zhì) 溴化氰法是最早使用且最常用的活化方法。 圖 714 間隔臂的作用 間隔臂 親和吸附劑及其制備方法 偶聯(lián)（親和吸附劑的制備） 配體一定，改造載體（基質(zhì)） 1）基質(zhì)活化： 不同的載體活化需要不同的 活化劑 。 配體的選擇： 所要分離的目的產(chǎn)物 相應(yīng)的配基 酶 抗體 凝集素 激素 底物、抑制劑、輔酶（輔因子） 抗原、病毒、細(xì)胞 多糖、糖蛋白、細(xì)胞受體 受體、載體蛋白 目的產(chǎn)物與相應(yīng)的配基 親和配基 酶的抑制劑 抗體 A蛋白 凝集素 輔酶和磷酸腺苷 色素配基 過(guò)渡金屬離子 組氨酸 肝素 親和色譜介質(zhì) 當(dāng)配基的分子量較小時(shí)，將其直接固定在載體上，會(huì)由于載體的 空間位阻 ，配基與生物大分子不能發(fā)生有效的親和吸附作用，如圖 714a所示。 優(yōu)良配體須具備的條件： 1）與待純化的物質(zhì)有 較強(qiáng)的親和力 。 最常用的是瓊脂糖， Sepharose 1B到 10B 基質(zhì)的選擇 一對(duì)可逆結(jié)合的生物分子中與載體相偶聯(lián)的一方稱(chēng)配體。 常用的載體有 葡聚糖 、 聚丙烯酰胺 等 ， 近年來(lái) 多孔硅膠 和 合成高分子化合物 載體正在被開(kāi)發(fā)應(yīng)用于親和層析 。 固體粒子稱(chēng)為配基的 載體 。 經(jīng)清洗后，選擇適當(dāng)?shù)南疵撘夯蚋淖?洗脫條件 進(jìn)行洗脫（圖中 c），使被分離物質(zhì)與固定相配基 解離 ，即可將目標(biāo)產(chǎn)物分離純化。分子）被吸附。 親和色譜原理 然后把含有目的物質(zhì)的混合液作為 流動(dòng)相 ，在有利于固定相配基與目的物質(zhì)形成 絡(luò)合物 的條件下進(jìn)入層析柱。 親
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