凝膠層析ppt課件-文庫吧資料
2025-05-09 18:09本頁面
【正文】 成的。用去污劑 (如 SDS)、 6mo1／ L鹽酸胍和8mol/L尿素溶液可作為洗脫劑，高溫 (120℃) 消毒 ( )處理后，層析性質(zhì)沒有明顯變化。若在有機(jī)相系統(tǒng)使用時，其孔徑大小略有變化。 Sephacryl Sephacryl是由 烯丙烷基葡聚糖 與 甲撐雙丙烯酰胺 共價交聯(lián)制成的，此凝膠屬硬性凝膠，它具有一定大小的篩孔和少量的羧基基團(tuán)。 物理化學(xué)性質(zhì) 吸附性： 聚丙烯酰胺凝膠對芳香族的、酸性和堿性的化合物稍有吸附現(xiàn)象，如使用離子強(qiáng)度略高的洗脫液操作，此弊病可以克服。 聚丙烯酰胺凝膠的結(jié)構(gòu)單體丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺 一般聚丙烯酰胺凝膠均制成珠狀顆粒，并以干凝膠形式出售，使用時必須溶脹。P），由美國 BioRod廠生產(chǎn)，型號很多，從 P2至 P300共 10種， P使用范圍及效果同葡聚糖凝膠相似 ,但化學(xué)性質(zhì)較葡聚糖穩(wěn)定 ,可在 pH211范圍內(nèi)使用 .聚丙烯酰胺凝膠的商品為生物膠－ P 阿拉伯?dāng)?shù)字乘以 106表示排阻限度。即 BioG美國的為 Bio－ GA，有 6個型號 : Sepharose瓊脂糖凝膠規(guī)格 瑞典和國產(chǎn)的產(chǎn)品有 3種規(guī)格：用瓊脂糖凝膠進(jìn)行柱層析時，流速可以快些。Sephadex的上限 ,可分離 MW40 萬以上 的物質(zhì) ,因此可用來分離核酸及病毒。 （商品名為 Sepharose)當(dāng)離子強(qiáng)度大于 ，一般對弱堿性蛋白質(zhì)就無吸附力了。 3．吸附性 葡聚糖凝膠系 弱酸性 物質(zhì)、這是由于其每克干膠含 10－ 20ug當(dāng)量的羧基基團(tuán)所致。在 L HCl溶液中浸泡 12h，甚至在 ／ L HCl溶液中浸泡 6個月以上，對分離效果無明顯的影響。 2．穩(wěn)定性 葡聚糖凝膠在水溶液、鹽溶液、堿溶液、弱酸溶液和有機(jī)溶劑中是穩(wěn)定的、不溶解的，而且很少產(chǎn)生化學(xué)降解。Sephadex的 化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定 ,不溶于水、鹽、弱酸和堿 , 反之 ,交聯(lián)劑的百分比低 ,分離物質(zhì)的分子量大。的三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的網(wǎng)孔大小取決于交聯(lián)度 ,交聯(lián)度的大小可在合成 Sephadex1.聚合而成的 三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 。 葡聚糖用交聯(lián)劑 1氯代 2 （商品名為 Sephadex）純化的物質(zhì)的 分子量范圍受到限制 。（二）缺點 樣品和洗脫液的 粘度很低 。的體積和高度 ,可進(jìn)行大量樣品的分離純物物質(zhì)的變性 ,即使用來分離一些理化性其結(jié) g 一般 親水性 基質(zhì)的膨脹度比 疏水性 的 大 。VtVβ 10．膨脹度 在一定溶液中，單位重量的基質(zhì)充分 溶脹 后所占有的體積用 Vβ 表示。 表示固定相中只有 一部分 可被組分?jǐn)U散 滲入 ， 一部分被排阻 ， Ve即在Vo與 Vo+Vi＋ Vg之間變化（圖中組分 Ⅱ ）有時 Kav＞ 1， 表示凝膠對組分有吸附作用 （ 從內(nèi)水中洗脫出來的含量下降），此時 Ve＞ Vo+Vi＋ Vg。（圖中組分 Ⅲ ） 即小分子可 完全滲入凝膠內(nèi)部 時，洗脫體積應(yīng)為空隙體積與內(nèi)水體積之和。即對于根本不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部的大分子物質(zhì) 全排阻 ，洗脫體積等于空隙體積即外水體積（圖中組分 Ⅰ ）某種組分凝膠層析柱中被排阻的程度用分配系數(shù) 表示 洗脫體積； 外水體積； 凝膠床體積 在一定層析條件下， 和 均為固定值，而 隨著被分離物分子量的變化而變化。 Ｖ Ｔ ＝Ｖ ０ +Ｖ ｉ ＋Ｖ ｇ 凝膠過濾層析所用的基質(zhì)是具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、篩孔直徑較一致，且呈珠狀顆粒的物質(zhì)。9．基質(zhì)體積 (Vg) 基質(zhì)體積是指 基質(zhì) 自身 所具有的體積。8．內(nèi)水體積 (Vi) 內(nèi)水體積是指 基質(zhì)顆粒 內(nèi)部 體積 的總和。7．外水體積 (V0) 外水體積指 基質(zhì)顆粒 之間 體積 的 總和 。用 Ve表示 (見圖 37中 OB)。 Vt是基質(zhì)的 外水體積(V0)和 內(nèi)水體積 (Vi)以及 自身體積 (Vg)的 總總和和 ，即 : Vt = V0+ Vi + Vg (詳見圖 31)4．操作容量 即在特定條件下， 某種成分 與 基質(zhì) 反應(yīng)反應(yīng) 達(dá)到平衡 時， 存在于基質(zhì)上的 飽和容量飽和容量 ；
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