實驗七親和層析純化和sds-page鑒定目的蛋白質(zhì)(gst、sds-page)-文庫吧資料
2025-01-24 17:56本頁面
【正文】 3. 用 1 mL蒸餾水封住液面，室溫 30 min，分離膠與水之間出現(xiàn)分界線，倒掉水層，用濾紙吸干殘余的水； 4. 配制 5%濃縮膠 ，混勻，加入玻璃板間，插入梳子，靜置 30 min； 12%分離膠 試劑名稱 加液量 ddH2O mL 30% AcrBis（ 29:1） mL mol/L TrisHCl（ ） mL 10% SDS 75 uL TEMED（加速劑） 10 uL 10% AP（催化劑，最后加） 75 uL 總體積 mL 試劑名稱 加液量 ddH2O mL 30% AcrBis（ 29:1） mol/L TrisHCl（ ） 10%SDS 50 uL TEMED 20 uL 10%AP（最后加） 50 uL 總體積 mL 5%濃縮膠 5. 將膠板放入電泳槽，加入 1 TrisGly電泳緩沖液 ， 輕輕拔掉梳子； 6. 點樣： 每個樣點 30 uL， Marker點 15 uL； 7. 電泳： 100 V， 約 20 min，樣品進入分離膠后，將電 壓調(diào)到 130 V，繼續(xù)電泳。 濃縮效應 3. 電位梯度不連續(xù)性： 快離子（ Cl ）后面形成高電位梯度區(qū)，慢離子（ Gly）前面形成低電位梯度區(qū)，高電位梯度和低電位梯度之間的地方，形成一個穩(wěn)定而不斷向陽極移動的界面，蛋白質(zhì)分子在界面處濃縮成一個狹小的中間層。 （電荷效應、分子篩效應） 不連續(xù)系統(tǒng)： 緩沖液離子成分、 pH、凝膠濃度及電位梯度的不連續(xù)性。 ? 蛋白質(zhì)的遷移速度只取決于分子大小。 ? 洗脫液 : 還原型谷胱甘肽（ ） g， 溶于
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