sds-page電泳培訓(xùn)資料-文庫吧資料
2024-10-20 15:03本頁面
【正文】 凝固不均勻所致，多出現(xiàn)于較厚的凝膠中。一般凝膠可在室溫下保存 4天， SDS可水解聚丙烯酰胺。建議做法：待凝膠在室溫凝固后，可在室溫下放臵一段時間使用。 + 3. SDSPAGE電泳凝膠中各主要成分的作用？ 聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺與為蛋白質(zhì)電泳提供載體，其凝固的好壞直接關(guān)系到電泳成功與否，與促凝劑及環(huán)境密切相關(guān)； 制膠緩沖液：濃縮膠選擇 ，分離膠選擇 ，選擇 tris－ HCL系統(tǒng)， TEMED與 AP： AP提供自由基， TEMED是催化劑，催化自由基引起的聚合反應(yīng)進行；十二烷基硫酸鈉（ SDS）：陽離子去污劑，作用有四：去蛋白質(zhì)電荷、解離蛋白質(zhì)之間的氫鍵、取消蛋白分子內(nèi)的疏水作用、去多肽折疊。 100ul樣品緩沖液中 10ul 20％的碘乙酸胺，并在室溫保溫 30min。一般電泳均按這種方式處理，樣品稀釋適當(dāng)濃度，加入上樣 Buffer，離心，沸水煮 5min，再離心加樣。 + 2. 樣品如何處理？ 根據(jù)樣品分離目的不同，主要有三種處理方法：還原 SDS處理、非還原 SDS處理、帶有烷基化作用的還原 SDS處理。當(dāng)樣品進入分離膠后，由于膠中 pH的增加，呈堿性，甘氨酸大量解離，泳動速率增加，直接緊隨氯離子之后，同時由于分離膠孔徑的縮小，在電場的作用下，蛋白分子根據(jù)其固有的帶電性和分子大小進行分離。在濃縮膠中，其 pH環(huán)境呈弱酸性，因此甘氨酸解離很少，其在電場的作用下，泳動效率低；而 CL離子卻很高，兩者之間形成導(dǎo)電性較低的區(qū)帶，蛋白分子就介于二者之間泳動。 脫色：染色后的凝膠，棄掉染色液，加入脫色液在搖床上再脫色，直到蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰。 水：當(dāng)天純化水 A液： B液： C液： 1%SDS(要配臵成 10%的母液 ) D液： E液： 10%AP: F液： TEMED 染色液：考馬斯亮藍(lán)（先用 50ML的乙酸溶解再加甲
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