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2024-10-13 14:54本頁面
【正文】 烯酰胺（ Bis） ，加蒸餾水至 100ml，過濾后置棕色瓶中。如果凝的太慢，可能是 TEMED， APS劑量不夠或者失效。可能由于凝膠緩沖系統(tǒng)和電級緩沖系統(tǒng)地 PH選擇錯(cuò)誤，即緩沖系統(tǒng)地 PH和被分離物質(zhì)的等電點(diǎn)差別太小，或緩沖系統(tǒng)的離子強(qiáng)度太高 ? （指示劑前沿呈現(xiàn)向上的曲線形），說明凝膠的不均勻冷卻，中間部分冷卻不好，導(dǎo)致分子有不同的遷移率所致 ? （指示劑前沿呈現(xiàn)向下的曲線形），由于電泳槽的裝置不合適，尤其是凝膠和玻璃板組成的 “ 三明治 ” 底部有氣泡或靠近隔片得凝膠聚和不完全 ? 。蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，因此一起向正極移動(dòng)，其中氯離子最快，甘氨酸根離子最慢，蛋白居中。當(dāng)樣品液和濃縮膠選 Tris/HCL緩沖液，電級液選 Tris/甘氨酸。l 100℃ 沸水浴， 35min ？（蛋白變性） 7. 微量注射器（加樣器）上樣 , 上樣量 15181。l + 2 上樣 buffer 10181。注膠過程最好一次性完成 ,避免產(chǎn)生氣泡 * 水封的目的：保持分離膠上沿平直，排氣泡 * 膠凝好的標(biāo)志：膠與水層之間形成清晰的界面 ,按比例配好濃縮膠 ,連續(xù)平穩(wěn)加入濃縮膠至離邊緣 5mm處 ,迅速插入梳子 ,靜置到膠凝 * 梳子需一次平穩(wěn)插入 ,梳口處不得有氣泡 ,梳底需水平 ,拆掉密封條，在內(nèi)槽中加入緩沖液 *用吸瓶將加樣孔內(nèi)和玻璃板下面放密封條位置的氣泡全部排出 ： （ 1） marker 5181。l 10181。l 100181。l 100181。 符合如下方程式： Lg MW =－ b ? m R + K 其中 ， MW 為蛋白質(zhì)的分子量 ， m R 為相對遷移率 ， b為斜率 ， K為截距 。這種復(fù)合物由于結(jié)合大量帶負(fù)電荷的 SDS，好比蛋白質(zhì)穿上帶負(fù)電的 “ 外衣 ” ，蛋白質(zhì)本身帶有的電荷則被掩蓋了。實(shí)驗(yàn)八 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE） 一 . 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? SDSPAGE測定蛋白質(zhì)分子量的原理 ? ? 二 . 實(shí)驗(yàn)原理 ? SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 :是在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進(jìn) SDS（十二烷基磺酸鈉） ? 1967年， Shapiro等人首先發(fā)現(xiàn)，如果在 聚丙烯酰胺凝膠電泳 (聚丙烯酰胺凝膠中主要取決于三種因素：蛋白大小，形狀和電荷 )系統(tǒng)中加入一定量的十二烷基硫酸鈉（ SDS），則蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決于蛋白質(zhì)的分子量大??？ SDS的作用 ? SDS是一種陰離子去垢劑， SO32帶負(fù)電荷。因此蛋白質(zhì)在含有強(qiáng)還原劑的 SDS溶液中與SDS分子結(jié)合時(shí)，可形成 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物。從而起到消除各蛋白質(zhì)分子之間自身的電荷差異的作用 ? 因此在電泳時(shí)，蛋白質(zhì)
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