sds-page電泳培訓(xùn)資料(編輯修改稿)
2024-11-17 15:03 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 不能很好解決問題的情況，應(yīng)首要考慮該因素。 + 2. 樣品如何處理？ 根據(jù)樣品分離目的不同，主要有三種處理方法：還原 SDS處理、非還原 SDS處理、帶有烷基化作用的還原 SDS處理。 1）還原 SDS處理：在上樣 buffer中加入 SDS和 DTT（或 Beta巰基乙醇）后，蛋白質(zhì)構(gòu)象被解離，電荷被中和，形成 SDS與蛋白相結(jié)合的分子，在電泳中，只根據(jù)分子量來(lái)分離。一般電泳均按這種方式處理，樣品稀釋適當(dāng)濃度，加入上樣 Buffer，離心，沸水煮 5min，再離心加樣。 2）帶有烷基化作用的還原 SDS處理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并經(jīng)久牢固的保護(hù) SH基團(tuán)，得到較窄的譜帶；另碘乙酸胺可捕集過量的 DTT，而防止銀染時(shí)的紋理現(xiàn)象。 100ul樣品緩沖液中 10ul 20％的碘乙酸胺，并在室溫保溫 30min。 3）非還原 SDS處理：生理體液、血清、尿素等樣品，一般只用 1％ SDS沸水中煮 3min，未加還原劑，因而蛋白折疊未被破壞，不可作為測(cè)定分子量來(lái)使用。 + 3. SDSPAGE電泳凝膠中各主要成分的作用？ 聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺與為蛋白質(zhì)電泳提供載體，其凝固的好壞直接關(guān)系到電泳成功與否，與促凝劑及環(huán)境密切相關(guān)； 制膠緩沖液：濃縮膠選擇 ，分離膠選擇 ，選擇 tris－ HCL系統(tǒng)， TEMED與 AP： AP提供自由基， TEMED是催化劑，催化自由基引起的聚合反應(yīng)進(jìn)行；十二烷基硫酸鈉（ SDS）：陽(yáng)離子去污劑，作用有四：去蛋白質(zhì)電荷、解離蛋白質(zhì)之間的氫鍵、取消蛋白分子內(nèi)的疏水作用、去多肽折疊。 4. 提高 SDSPAGE電泳分辨率的途徑？ 聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝膠的分辨率。建議做法：待凝膠在室溫凝固后，可在室溫下放臵一段時(shí)間使用。忌即配即用或 4度冰箱放臵，前者易導(dǎo)致凝固不充分，后者可導(dǎo)致 SDS結(jié)晶。一般凝膠可在室溫下保存 4天， SDS可水解聚丙烯酰胺。 一般常用的有氨基黑、考馬斯亮藍(lán)、銀
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