生物化學(xué)研究技術(shù)--3sds-page鑒定菠蘿蛋白酶的純度(編輯修改稿)
2025-02-12 13:28 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 加熱溶解） (7) 2 電極緩沖液 (%SDS––甘氨酸緩沖液， ):取 6gTris， 1g SDS加水溶解后，定容至１ 000ml（配好的溶液 ）(12個組可配 2升 ,使用時再稀釋 2倍 )。 (8) 樣品溶解液： 取 SDS ２ g， β巰基乙醇 ５ ml，甘油10ml，溴酚藍 ， –HCl緩沖液 (濃縮膠緩沖液 )10ml，加蒸餾水 25ml， (最后的總體積為 50 ml),裝于棕色瓶。 (9)染色液（ %考馬斯亮藍 45%甲醇 10%冰乙酸溶液）： 1g考馬斯亮藍 R250，加入 450 ml 甲醇、 100ml冰乙酸，用水定容至 1000 ml。 (12個組可配 2022 ml) (10)脫色液 高甲醇 1000ml：甲醇 454ml，冰醋酸 75ml， dH2O 471 ml 低甲醇 1000ml ：甲醇 50ml，冰醋酸 75ml， dH2O 875 ml 七．實驗步驟 。 （注意不能涂多，以防弄臟玻璃板）。 。 6ml蒸餾水， 2ml 30%凝膠儲液， 20 ul TEMED， 100ul 10％過硫酸銨，混勻，迅速倒入封口槽處 (一定要快！ )，靜置約 10min直到凝固。 聚丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，操作時要戴手套 dH2O于兩層玻璃之間，檢查玻璃底是否漏水；如果漏水，要重裝。 12%分離膠，混勻，灌膠，高度離梳子約 1～ ，然后覆蓋一層水，凝膠時間為 15～30min，膠與水分層，傾倒去水。 12%分離膠 5%濃縮膠 30%凝膠貯液 4000μl 810 μ
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