層析技術(shù)ppt課件-文庫吧資料
2025-01-20 15:24本頁面
【正文】 是 否 暢 通 1 2 Gel Gel 繼 續(xù) 流 洗 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ?層析柱的選擇 ?層析柱大?。焊鶕?jù)樣品量的多少以及對(duì)分辨率的要求來進(jìn)行選擇 ?層析柱的長度對(duì)分辨率影響較大，長的層析柱分辨率要比短的高；但層析柱長度不能過長，否則會(huì)引起柱子不均一、流速過慢等實(shí)驗(yàn)上的一些困難 ?一般柱長度不超過 100cm，為得到高分辨率，可以將柱子串聯(lián)使用 ?層析柱的直徑和長度比一般在 1:25－ 1:100之間 ?用于分組分離的凝膠柱，如脫鹽柱由于對(duì)分辨率要求較低，所以一般比較短 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 凝膠柱的鑒定 ?肉眼觀察應(yīng)均勻、無紋路、無氣泡 ?采用一種有色的物質(zhì)，如藍(lán)色葡聚糖 202血紅蛋白等上柱，觀察有色區(qū)帶在柱中的洗脫行為以檢測(cè)凝膠柱的均勻程度 ?如果色帶狹窄、平整、均勻下降，則表明柱中的凝膠填裝情況較好，可以使用；如果色帶彌散、歪曲，則需重新裝柱 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 洗脫液的選擇 ?凝膠層析的分離機(jī)理簡(jiǎn)單以及凝膠穩(wěn)定工作的pH范圍較廣，所以洗脫液的選擇主要取決于待分離樣品，一般來說只要能溶解被洗脫物質(zhì)并不使其變性的緩沖液都可以用于凝膠層析。 基本骨架： 葡聚糖（ dextran） 交聯(lián)劑： 3氯代 1 ,2環(huán)氧氯丙 烷使葡聚糖之間通過醚鍵交聯(lián) 聚合而成的 三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 。 對(duì)某些溶質(zhì)分子具有吸附作用 。 四 、 凝膠層析的缺點(diǎn) 樣品和洗脫液的粘度很低 。 2. 操作條件較溫和 。 VT = 1/4 ?D2h 外水體積 V0 VT = Vg + V0 + Vi 數(shù)理關(guān)系 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 Ve –Vo Kd = ———— Vi 分配系數(shù)（ Kd ）： 特點(diǎn)： （ 1）與被分離物質(zhì)分子的大小和凝膠顆?？紫兜拇笮∮嘘P(guān) （ 2）與柱的長短粗細(xì)無關(guān) 每個(gè)溶質(zhì)分子在流動(dòng)相和固定相之間有一個(gè)特定的分配系數(shù)（ Kd） Ve=Vo+KdVi 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 (2)Ve = Vo + Vi Kd = 1 ?分子完全不被排阻 ?完全向凝膠顆粒內(nèi)部擴(kuò)散 ?在兩相分配的比值為 1,最后流出 . (1)Ve = Vo Kd = 0 ?分子完全被排阻于凝膠顆粒之外 ?全部分布于流動(dòng)相里 , ?最先流出 。 顆粒內(nèi)部所含水相的體積它可從 干凝膠顆粒重量 和吸水重量相減求得。 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 層析技術(shù)概述 1 凝膠層析 2 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 凝膠層析 ?凝膠層析 （ gel chromatography） ?凝膠排阻層析 （ gel exclusion chromatography） ?分子篩層析 （ molecular sieve chromatography） ?凝膠過濾 （ gel filtration） ?凝膠滲透層析 （ gel permeation chromatography） 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 固定相（凝膠） ?——三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) A good gel for gel filtration contains about 95% water 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ■ 凝膠層 析法： 樣品 固 定 相 流 動(dòng) 相 小分子 被延滯 小分子 大分子 較 快流出 分子篩效應(yīng) ： 分子大小不同 ,在凝膠受到的
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