酶的定向催化ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-01-11 20:18本頁(yè)面
【正文】 克隆在文庫(kù)的群體擴(kuò)增過(guò)程中容易丟失； ? 轉(zhuǎn)化效率普遍較低； ? 不適合文庫(kù)的長(zhǎng)期保存。 五、基因文庫(kù)的構(gòu)建 構(gòu)建理想的基因文庫(kù)要考慮的因素 （ 1）基因文庫(kù)的質(zhì)量 ? (a) 文庫(kù)的代表性（包容性） ? (b) 突變基因片段的序列完整性 （ 2）文庫(kù)篩選可選擇的方法 ? 控制突變庫(kù)的大小與特定的篩選容量相適應(yīng) 突變體基因的構(gòu)建策略 ? DNA隨機(jī)酶切片段拼接 ? 單鏈 DNA隨機(jī)拼接（提高不同親代基因的同源片段重組形成嵌合體基因的效率） ? 限制性酶切片段隨機(jī)拼接（防止 PCR擴(kuò)增產(chǎn)生相同的親代基因） 構(gòu)建突變基因文庫(kù)的載體系統(tǒng) （ 1）噬菌體載體系統(tǒng)； ? 插入片段的裝載容量大，適合于大片段的克隆； ? 構(gòu)建出的基因文庫(kù)質(zhì)量高、代表性好； ? 適合長(zhǎng)期保存； ? 主要缺點(diǎn)是構(gòu)建成基因文庫(kù)后，可采用的文庫(kù)篩選方法有限。 （ d）隨機(jī)引物體外重組法 (RPR) ? 單鏈 DNA為模板，隨機(jī)序列引物 PCR， DNA小片段互為模板擴(kuò)增獲得重新排布的突變基因 （ e）交錯(cuò)延伸原理 ? 采用基因家族的改組效果明顯高于單個(gè)基因的改組效果。 ? 在 PCR循環(huán)過(guò)程中，隨機(jī)片段之間互為模板和引物進(jìn)行擴(kuò)增，直到獲得全長(zhǎng)的基因，這導(dǎo)致來(lái)自不同基因片段之間的重組。 ? 分子育種。 （ 3） DNA改組技術(shù) (DNA shuffling) ? 又稱有性 PCR，指 DNA分子的體外重組，是基因在分子水平上進(jìn)行有性重組。此法突變具有一定的密碼偏向性。 ? 控制
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