端粒酶和抗體酶ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-01-11 15:58本頁(yè)面
【正文】 reaced with TSAconjugated FITC. 抗體酶的制備方法 V 拷貝法： 用酶作為抗原免疫動(dòng)物得到抗酶的抗體，再將此抗體免疫動(dòng)物并進(jìn)行單克隆化，獲得單克隆的抗抗體。片斷里的基因是通過(guò)細(xì)菌的形式表達(dá)出來(lái)的。從人或動(dòng)物的抗原中抽取基因，然后用酶反應(yīng)復(fù)制基因的聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）技術(shù)重新鑄造輕鏈和重鏈，這樣就可以把這些基因組合成 100萬(wàn)個(gè)含有成對(duì)輕鏈和重鏈的基因庫(kù)。將此半抗原通過(guò)共價(jià)鍵連接在載體蛋白免疫動(dòng)物產(chǎn)生的抗體，在金屬離子復(fù)合物作為輔因子的參與下，這些抗體酶能選擇性水解甘氨酸和丙氨酸之間的肽鍵。他們用三乙撐胺 Co3+鹽作為金屬離子輔因子，所用半抗原分子帶有一肽鍵。游離巰基就是適合的基團(tuán)之一，它具有高親核性，易于氧化，及能通過(guò)二硫化物進(jìn)行交換反應(yīng)或親電反應(yīng)而選擇性修飾的特點(diǎn) 抗體結(jié)合部位修飾法 用可裂解親和標(biāo)記試劑將催化基團(tuán)引入到抗體結(jié)合部位的示意 抗體酶的制備方法 III 引入輔助因子法： 很多天然酶活性中心都含有金屬離子。 細(xì)胞工程抗體 —— 雜交瘤 單克隆抗體 抗體酶的制備方法 II 抗體結(jié)合位點(diǎn)化學(xué)修飾法： 抗體酶和酶一樣也可以用化學(xué)修飾法加以改造。融合得到的雜交細(xì)胞既能產(chǎn)生抗體又能在體外培養(yǎng)。 抗體酶的催化反應(yīng)類型 ? 轉(zhuǎn)?；磻?yīng) ? 水解反應(yīng) ? Claisen重排反應(yīng) ? 酰胺合成反應(yīng) ? 5 DielsAlder反應(yīng) ? 轉(zhuǎn)酯反應(yīng) ? 光誘導(dǎo)反應(yīng) ? 氧化還原反應(yīng) ? 脫羧反應(yīng) ? 順?lè)串悩?gòu)化反應(yīng) 抗體酶的制備方法 I ? 細(xì)胞融合法： 用設(shè)計(jì)好的半抗原，通過(guò)間隔鏈與載體蛋白（如牛血清白蛋白）偶聯(lián)制成抗原。 ? 脫羧反應(yīng) ；有機(jī)溶劑引起脫羧反應(yīng)速率增加。 ? 1986年， Lerner和 Schultz兩個(gè)研究小組獨(dú)立發(fā)表了關(guān)于芳香酯和碳酸酯的抗體催化水解的報(bào)道，首次人工制得催化抗體。以此推理 ,抗體若能與過(guò)渡態(tài)類似物結(jié)合 ,則它也會(huì)與化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中的過(guò)渡態(tài)結(jié)合 ,這樣的抗體亦具有催化性能。 抗體酶出現(xiàn)的歷史背景 抗體酶出現(xiàn)的歷史背景 ? Jencks1969年的假設(shè)： 受 Pauling理論的啟發(fā) ,Jencks于 1969年提出 :抗體若能與化學(xué)反應(yīng)的過(guò)渡態(tài)結(jié)合 ,則這樣的抗體必具有催化性能。 什么是抗體酶？ 1948年 Pauling的預(yù)言： 抗體酶的理論基礎(chǔ)早在 1948年就曾被Pauling所預(yù)言。有研究發(fā)現(xiàn)，砒霜能夠抑制肝癌血管的形成，還能抑制端粒酶的活性，因此能起到高效的抗癌作用。進(jìn)一步研究探索端粒酶和端粒與衰老和癌變的關(guān)系，無(wú)疑有著重要的理論意義和實(shí)用價(jià)值。 可成為腫瘤的診斷標(biāo)記和治療靶點(diǎn)。 端粒酶 (telomerase) 端粒酶的結(jié)構(gòu) 人的端粒酶由三部分組成： 端粒酶相關(guān)蛋白（ telomeraseassociated protein， TP1/TLP1） the human RNA subunit(hTR) 5’CUAACCCUAAC3’ The human telomerase reverse transcriptase(hTERT) 端粒酶的結(jié)構(gòu) 端粒酶作用模式 端粒酶作用模式 爬行模型 端粒理論 端粒及端粒酶的意義 端粒的長(zhǎng)短及端粒酶活性變化與細(xì)胞水平的 老化 (aging)及 腫瘤 的發(fā)生有一定關(guān)系。 4. 端粒酶至少包含兩個(gè)活性位點(diǎn)．端粒酶除了具有反轉(zhuǎn)錄活性外，還具有核酸內(nèi)切酶的活性。 為特殊的逆轉(zhuǎn)錄酶，能以自身的 RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成端粒 DNA 3. 其活性取決于它的 RNA和蛋白質(zhì)亞基。因此，端?？赡艹蔀樾碌哪[瘤抑制靶點(diǎn)。 示意圖 端粒的功能 III可能腫瘤抑制靶點(diǎn) 端粒自身的鳥(niǎo)嘌呤四聯(lián)體 (guaninequadruplex)和一些端粒特異性結(jié)合蛋白對(duì)端粒長(zhǎng)度、端粒穩(wěn)定甚至對(duì)端粒酶活性都有調(diào)節(jié)作用，在腫瘤形成和生長(zhǎng)中發(fā)揮重要作用
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