[理化生]12基因工程基本操作程序-文庫吧資料
2025-01-09 23:50本頁面
【正文】 四環(huán)素的完全培養(yǎng)基 （大腸桿菌內(nèi)含有氨芐青霉素抗性基因，不含有四環(huán)素抗性基因） 只具有氨芐青霉素抗性基因農(nóng)桿菌 不存活 存活 證明：目的基因已導(dǎo)入質(zhì)粒 證明：重組質(zhì)粒已導(dǎo)入大腸桿菌 培養(yǎng) 培養(yǎng) 完全培養(yǎng)基 。 細菌的檢測，將每個受體細胞單獨培養(yǎng)形成菌落，檢測菌落中是否有目的基因的表達產(chǎn)物。 —— 個體生物學(xué)水平的鑒定 （ 1）多細胞個體 抗蟲、抗病接種實驗，活性比較實驗 不能，受體細胞必須表現(xiàn)出特定的性狀，才能說明目的基因完成了 表達 。 提取 （ 3）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 方法 ： 抗原 抗體雜交 蘇云金桿菌 Bt毒素蛋白 將 Bt毒蛋白注射小鼠體內(nèi) 從小鼠血管抽出血液分離出抗Bt毒素的抗體 抗體 蛋白質(zhì) 出現(xiàn)雜交帶 脫分化 組織培養(yǎng) 證明： 提取蛋白質(zhì)與 Bt毒素蛋白質(zhì)一樣 例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說明未攝入目的基因或攝入目的基因未表達。 目的基因進入受體細胞后，是否都能穩(wěn)定維持 和表達？ 不一定，需要檢測 ： 分子雜交技術(shù)： （ 1） DNA分子與 DNA分子的之間雜交 （ 2） DNA分子與 RNA分子的之間雜交 （ 3）蛋白質(zhì)分子（抗原與抗體）之間雜交 ： 抗蟲、抗病結(jié)種實驗，活性比較實驗 轉(zhuǎn)基因生 物的 DNA 探針 15N 15N 14N 14N （ 1）檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA上是否插入了 目的基因 基因探針： 放射性同位素等標記的 DNA分子 方法： DNA分子雜交技術(shù) 變性 變性 如果顯示出雜交帶，就表明待測樣品含有目的基因。 以酵母菌作為工程菌可以嗎 ? 答：可以，酵母菌為真核生物（真菌類）。 Hin d限制性酶 ⅠⅡ Hin dIII Hin dIII 目的 DNA Ti質(zhì)粒 蘇云金桿菌 構(gòu)建表達載體 Bt毒素蛋白基因 蘇云金桿菌 DNA連接酶 TDNA (可轉(zhuǎn)移 DNA) 知識拓展 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的過程： 花粉管通道法： 將目的基因?qū)胫参锛毎? ① 操作方法： ② 特點： 在植物花受粉后，花粉形成花粉管還末愈合前期，剪去柱頭，然后，滴入 DNA（含目的基因）使目的基因借助花粉管通道進入受體細胞 十分簡便經(jīng)濟 ③ 例： 轉(zhuǎn)基因抗蟲棉 基因槍法： 利用壓縮氣體產(chǎn)生的動力 ，將包裹在金屬粒表面的表達載體 DNA打入受體細胞中，使目的基因與其整合并表達的方法 ① 操作方法： ② 金屬粒： 將目的基因?qū)雴巫尤~植物細胞 鎢粉粒子和金粉粒子，粒子的直徑一般在 ～ 4um 。 （ 2）將目的基因?qū)雱游锛毎?—— 顯微注射法。 （ 1） 將目的基因?qū)胫参锛毎? ③ 基因槍法：單子葉植物?？茖W(xué)家又在有啟動子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入抗蟲基因 終止子 ，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長的植株，有了抗蟲能力。 資 料 : 科學(xué)家在培育抗蟲棉時，起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達。 這種方法針對性差，完全靠運氣，也無法確定什么基因?qū)肓耸荏w細胞。 (3)終止子：是使轉(zhuǎn)錄在需要的地方停止 (4)標記基因：是鑒別受體細胞中是否含有目的基因從而將含有目的基因的細胞篩選出來 (2)啟動子：是 RNA聚合酶識別和結(jié)合部位 (1)目的基因
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