【正文】 許多實驗證明，硒多糖能顯著提高老齡小鼠體內(nèi)的 超氧化物歧化酶 及 谷胱甘肽過氧化物酶 活性，延緩小鼠的衰老速度，且其作用效果與硒多糖的服用劑量呈正相關(guān)經(jīng)過多次實驗，總抗氧化能力越高，說明多糖延緩衰老的效果越明顯。 根據(jù)總抗氧化能力 試劑 盒的要求 ， 進(jìn) 行 實驗。 總抗氧化能力測定 采用總抗氧化能力 （ TAOC） 測定試劑盒測定。 OH） 的清除率逐漸增加，最高為 %，相比硒化前的多糖在同樣濃度 下的清除率 %提高了 %，因此，硒化的乳酸菌胞外多糖體外羥自由基（ OH） 清除率可以達(dá)到 50%以上。 OH）清除作用 從圖 23可以看出 硒化乳酸菌胞外多糖和未經(jīng)硒化的乳酸菌胞外多糖對羥自由基都具有清除能力，且其清除率都隨濃度的增加增強(qiáng)，但是硒多糖的清除率始終大于未經(jīng)硒化的多糖，且在低濃度，約 2mg/mL 之前，硒化多糖的清除率比未硒化多糖的清除率有西安培華學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 硒化乳酸菌胞外多糖理化性質(zhì)及其抗氧化活性研究 8 上升的趨勢，隨后就慢慢接近平行，但始終要高與未硒化多糖的清除率。 OH） 清除率比較結(jié)果，如下圖 23 所示。 羥自由基 (配制 5mmol/L 鄰二氮菲 溶液， 130 mmol/L磷酸鹽緩沖液（ pH =）， 5 mmol/L的 FeSO4溶液， %的 H2O2溶液和不同濃度的樣品溶液。 OH能力的物質(zhì)，與水楊酸競爭 OH的多少，吸光值越大， OH，以 西安培華學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 硒化乳酸菌胞外多糖理化性質(zhì)及其抗氧化活性研究 7 羥自由基（當(dāng)多糖濃度達(dá) 4mg/mL 以上時，硒化乳酸菌胞外多糖對超氧自由基 （ O2） 清除率可以達(dá)到 50%以上。經(jīng)過多次實驗，對比，優(yōu)化，選擇之后，選取濃度 ， ， ， ， 1， 2， 4， 8mg/mL8個濃度的測定結(jié)果，經(jīng)數(shù)據(jù)處理后得硒多糖與未硒化多糖在相同濃度范圍內(nèi)清除超氧自由基 （ O2） 清除率比較結(jié)果，如下圖22所示。每測一個濃度配一次測樣液，而且配完了就要馬上測定，否則反應(yīng)結(jié) 束了就沒法測速率了。 配制 50mmol/L TrisHCl緩沖液（ pH=）， 3mmol/L的鄰苯三酚溶液和不同濃度的樣品溶液。的能力，因此入一定量的具有抗氧化作用的不同濃度的多糖液可對 O2生成有色的中間產(chǎn)物，可用分光光度法進(jìn)行測定，當(dāng)有清除劑存在時， O2 體外抗氧化活性的測定 對超氧陰離子自由基（ O2 ⑥ 顯色 在除去溶劑后的薄層板上，均勻噴上顯色劑，置于烘箱中顯色，烘箱中加熱顯色溫度一般選擇 85℃ 為宜，顯色時間 10min。點樣過程中用吹風(fēng)機(jī)使樣品干燥。 ④ 點樣 將葡萄糖 、鼠李唐、木糖、果糖、半乳糖、甘露糖的單糖標(biāo)準(zhǔn)液和處理過的樣品液，7 種液體按順序分別點樣在薄層板上。 ③ 展開系統(tǒng)及顯色劑的配制 展開系統(tǒng)：分別把乙酸乙酯、吡啶、無水乙醇、水按 8： 1： 1： 2（ V/V） 的比例混合搖勻。 ① 單糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 分別稱取葡萄糖、鼠李唐、木糖、果糖、半乳糖、甘露糖，分別溶于蒸餾水中制得五種單糖標(biāo)準(zhǔn)液，濃度均為 1mg/mL。以蒸餾水作為陰性西安培華學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 硒化乳酸菌胞外多糖理化性質(zhì)及其抗氧化活性研究 4 對照，淀粉溶液 (1mg／ m1)作為陽性對照。因此，陰性反應(yīng)證明沒有糖類物質(zhì)的存在；而陽性反應(yīng)，則說明有糖存在的可能性，需要進(jìn)一步通過其他糖的定性試驗才能確定有糖的存在。自由存在和結(jié)合存在的糖均呈陽性反應(yīng)。 結(jié)果表明，硒多糖溶液碘 碘化鉀反應(yīng)呈陰性，說明不含有淀粉多糖。取 lml 濃度為 1mg／ ml的硒多糖溶液加入碘 碘化鉀溶液，觀察顏色變化。 24h 后觀察結(jié)果 中可以看出，硒化乳酸菌胞外多糖在水中呈均勻溶解狀態(tài)，而在乙醇和丙酮中沉于底部，在氯仿中呈漂浮狀態(tài)，說明乳酸菌胞外多糖不溶于乙醇，丙酮和氯仿等有機(jī)溶劑。 稱取 4 份 的硒化乳酸菌胞外多糖于事先準(zhǔn)備好的 10mL 的小燒杯中，在燒杯壁上貼上標(biāo)簽，注明水，乙醇，丙酮，氯仿四種不同的溶劑，然后根據(jù)標(biāo)簽往燒杯中分別倒入四種高濃度溶劑，以倒入燒杯總量的 2/3 為宜。 試劑 總抗氧化能力（ TAOC）測試盒（南京建成生物工程研究所），乙酸乙酯（天津市博迪化工有限公司），吡啶（上海展云化工有限公司），苯胺（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），二苯胺（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）， D木糖（上海晶純試劑有限公司）， D半乳糖（上海晶純試劑有限公司），葡萄糖（上海展云化工有限公司）， D果糖（ Aladdin 西安培華學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 硒化乳酸菌胞外多糖理化性質(zhì)及其抗氧化活性研究 3 Chemistry .）， L鼠李唐（上海晶純試劑有限公司）， Tris，鄰苯三酚，濃 HCl，鄰二氮菲，磷酸鹽， FeSO4， H2O2，無 水乙醇，丙酮，氯仿， NaOH。冷卻到室溫，用 Na2CO3 調(diào) pH56,加入適量無水 Na2SO3 沉淀反應(yīng)液中的氯化鋇，用高速冷凍離心機(jī)下在 5000r/min 的條件下離心 20min 后取上清液，再用無水乙醇沉淀 (4℃冰箱過夜 )，收集沉淀，透析 24h,冷凍干燥后，即為硒多糖。 西安培華學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 硒化乳酸菌胞外多糖理化性質(zhì)及其抗氧化活性研究 2 1 材料 材料 a 乳酸菌胞外多糖：由實驗室制備所得。但是對微生物的硒化多糖的研究還不多見。此外，通 過多糖硒化修飾或化學(xué)合成等化學(xué)方法也可以獲得大量的硒多糖 [11]。天然硒多糖一般存在于植物或微生物中，但含量較低，即使在高硒地區(qū)的富硒植物或微生物中，硒多糖中 的硒含量也相對較低。 硒多糖是硒的一種有機(jī)存在形式，相對無機(jī)硒 [7]而言有機(jī)硒 [8]毒性低、副作用小，能夠更好地發(fā)揮硒的生理活性 [9]。 近幾十年來 , 由于微生物胞外多糖在產(chǎn)品結(jié)構(gòu)、性能及生產(chǎn)方面所具有的特殊優(yōu)勢而得到大力研究和開發(fā) , 微生物胞外多糖的開發(fā)已成為工業(yè)微生物研究的熱點之一。而且，大量的研究證實乳酸菌產(chǎn)生的 EPS 具有抗腫瘤活性、免疫激活作用、降低血清膽固醇和益生元作用等，對人類的健康有著重要的意義 [5,6]。微生物 EPS 具有增稠和凝膠的特性，已被用作工業(yè)中的增稠劑、凝膠劑和穩(wěn)定劑。 EPS 常常以莢膜多糖和黏多糖兩種形式存在，但對于微生物來說 ,主要是指不與細(xì)胞表面永久粘附的黏多糖 [3]。 ）清