【正文】 能力。隨大棗、香菇的配比增大，復(fù)合物的吸光值先增加后逐漸減小。of pounds of LNT and JDP 還原能力的大小與其吸光值成正比。 最佳增效劑與香菇多糖抗氧化配比實(shí)驗(yàn)還原能力測(cè)定結(jié)果如圖7所示。DPPH清除實(shí)驗(yàn)中對(duì)香菇多糖有抗氧化拮抗作用或無清除能力，推測(cè)可能是大豆多肽的加入反而稀釋了香菇多糖的濃度，減弱了其清除自由基能力。而大豆多肽僅在還原能力上對(duì)香菇多糖增效，在DPPH清除實(shí)驗(yàn)和OH。推測(cè)可能是三七皂苷的結(jié)構(gòu)對(duì)香菇多糖的結(jié)構(gòu)在清除OH的效果提高了約10%，由SPSS軟件分析知大棗多糖對(duì)香菇多糖的 OH of the mixture of Len with JDP and PNS 注：采用Duncan39。OH清除能力的協(xié)同增效作用。OH的IC50值的濃度分別配制大棗多糖、三七皂苷和香菇多糖溶液，后按照體積比1:1將2種物質(zhì)分別與香菇多糖復(fù)配。OH清除能力實(shí)驗(yàn) 因?yàn)榇蠖苟嚯牟痪哂辛u自由基清除的能力，因而不進(jìn)行下一步的配比實(shí)驗(yàn)。的清除能力。但差異性大小由大棗多糖、三七皂苷、大豆多肽依次遞減。三組測(cè)試結(jié)果與香菇多糖之間DPPH而大豆多肽對(duì)香菇多糖的DPPH of the mixture of Len with peptides, JDP and PNS 注：采用Duncan39。圖 5 大棗多糖、大豆多肽、三七皂苷與香菇多糖的復(fù)配物對(duì) DPPH 清除能力的協(xié)同增效作用。達(dá)到IC50值時(shí)的濃度溶液，再按照體積比1:1將3種物質(zhì)分別與香菇多糖復(fù)配。 三種提取物與香菇多糖復(fù)配物DPPH其中香菇大豆組的還原能力測(cè)定值與其他組的香菇多糖組的顯著性差異最大。圖4 大豆多肽、三七皂苷、大棗多糖與香菇多糖的復(fù)配物還原能力Fig. 4 Reducing power of the mixture of Len with peptides, PNS and JDP注：采用Duncan39。以香菇多糖為對(duì)照，比較三種提取物對(duì)香菇多糖還原能力的協(xié)同增效作用。大棗多糖的抗氧化能力比香菇多糖稍低，大豆多肽的抗氧化能力在四種提取物中最低。香菇多糖和三七粗皂苷在三種抗氧化實(shí)驗(yàn)中均有較好的抗氧化能力，且后者在清除能力和OH清除能力較差。OH清除能力大小為：三七皂苷香菇多糖大棗多糖大豆多肽。表2 四種物質(zhì)清除羥自由基能力IC50值Table 2 IC50 values of scavenging 根據(jù)四種提取物羥自由基清除能力曲線得到回歸曲線方程，計(jì)算出四種提取物大棗多糖在4mg/mL后香菇多糖及大棗多糖的OH清除能力均隨溶液濃度的增大而增大，OH清除能力，而大豆多肽不具有該活性。圖3 香菇多糖、大棗多糖、三七皂苷對(duì)羥自由基的清除能力 Ability of scavenging 香菇多糖、三七皂苷粗提物、大棗多糖和大豆多肽的其中大豆多肽的DPPHof all extracts種類回歸曲線方程IC50/(mg/mL)香菇多糖y=++ R2=大豆多肽y=+ R2=大棗多糖y=+ R2=三七皂苷y=++ R2= 據(jù)圖2及表1分析得四種物質(zhì)IC50值大小為：香菇多糖三七皂苷大棗多糖大豆多肽，相同濃度下四種物質(zhì)的DPPH表1 四種提取物DPPH 清除率曲線的回歸方程可計(jì)算出這4種物質(zhì)DPPH 清除率隨濃度的增加變化緩慢，在25mg/mL時(shí)清除率達(dá)到61%。大棗多糖和三七皂苷DPPH清除能力均隨濃度的增大而增大。的清除能力 Ability of scavenging DPPH 清除率測(cè)定結(jié)果如圖2所示。 四種提取物清除DPPH結(jié)果表明：~，在同一吸光值下所需各提取物濃度按三七皂苷、香菇多糖、大棗多糖、大豆多肽的順序遞增；在A700為其他濃度時(shí)，四種提取物物也近似呈現(xiàn)類似變化趨勢(shì)。由圖1可知，四種提取物的還原能力在一定濃度范圍均與其濃度呈正相關(guān)。結(jié)果與討論 四種提取物還原能力測(cè)定 香菇多糖、三七皂苷、大棗多糖、大豆多肽的還原能力測(cè)定結(jié)果見圖1。3能力和 最佳搭配物質(zhì)與香菇多糖的抗氧化最佳配比實(shí)驗(yàn) 根據(jù)提取物與香菇多糖的抗氧化配比增效實(shí)驗(yàn)，得到大豆多肽、三七皂苷和大棗多糖三種代表提取物中的最佳香菇抗氧化增效劑。測(cè)定混合物的還原能力、DPPHOH清除能力下不同提取物的濃度。 根據(jù)還原能力實(shí)驗(yàn)和自由基清除率實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得到具有相同還原能力和相同DPPHOH，亞鐵離子可被[31] 采用鄰二氮菲亞鐵法。具體方法如下： 還原能力的測(cè)定——鐵氰化鉀還原法[29] 清除DPPH自由基能力——改進(jìn)的Nagai法[30] DPPH（二苯代苦味?；杂苫┦且环N很穩(wěn)定的自由基，在乙醇溶液中呈現(xiàn)深紫色，在517nm處有最大吸收峰。和羥自由基（根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)肽含量。取20μL稀釋液，加200μLBCA搖勻，平行三組，一組空白對(duì)照，37℃下靜置1h。 多肽含量測(cè)定 大豆多肽提取液采用BCA法測(cè)定肽含量[28]。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=＋(r2=）。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確稱取5mg人參皂苷對(duì)照品，加乙醇定容至5mL，配置成1mg/mL皂苷溶液。 四種提取物含量測(cè)定 多糖含量測(cè)定香菇多糖及大棗多糖提取液經(jīng)淀粉KI試驗(yàn)無顏色變化，采用硫酸苯酚法[26] 測(cè)定其多糖含量。采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量[25] 測(cè)得濃度為34μg/mL，取料液比1: 30，溫度60℃，%的木瓜蛋白酶水解2h，100℃，5min 終止水解。離心后所得沉淀物即為大豆蛋白。 大豆多肽的制備（堿溶酸沉協(xié)同酶解法） ，按料液比1: 10加入蒸餾水，水浴50℃振蕩30min，冷卻，離心。合并提取液，在50℃下蒸發(fā)濃縮。 三七皂苷粗提物提?。ù继岱ǎ? 將三七放置在燒杯中，用蒸餾水浸泡48小時(shí)，粉碎成細(xì)小塊狀，過濾，濾渣放置烘箱中烘干，將濾液蒸發(fā)濃縮。4000r/min離心10分鐘，取上清液，醇沉，離心，取沉淀物。 大棗多糖提取（微波輔助法） 干大棗切碎，在60℃鼓風(fēng)干燥箱中干燥至恒重， 粉碎后過60目篩。冷卻至室溫后4000r/min離心，取上清液，醇沉，離心后取沉淀物。香菇溶液預(yù)熱至55℃，加入酶液，恒溫振蕩。超聲提取溫度60℃，時(shí)間40min。 試劑木瓜蛋白酶酶活2000U/mg杰輝生物技術(shù)有限公司纖維素酶酶活15U/mg上海博奧生物科技有限公司無水乙醇分析純天津市天力化學(xué)試劑有限公司抗壞血酸（Vc）分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司鹽酸分析純?nèi)R陽康德化工有限公司冰乙酸分析純?nèi)R陽康德化工有限公司高氯酸分析純?nèi)R陽康德化工有限公司DPPH（二苯代苦味?；杂苫┓治黾兠绹?guó)Sigma公司鐵氰化鉀分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司鄰二氮菲亞鐵分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司硫酸亞鐵分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司雙氧水分析純洛陽市昊華化學(xué)試劑有限公司磷酸二氫鈉分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司磷酸氫二鈉分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司Tris分析純?nèi)鹗縍oche公司EDTA分析純?nèi)鹗縍oche公司鄰苯三酚分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司二硫蘇糖醇（DTT）分析純天津市科密歐化學(xué)試