畢業(yè)論文羅非魚制取呈味肽的研究-文庫吧資料
2025-05-28 05:27本頁面
【正文】 魚下腳料與水按 1:4 的比例混合，煮沸 10 min，使蛋白質(zhì)變性，以利于蛋白酶作用，然后放入高速組織搗碎 機進行勻漿；按每克蛋白質(zhì)加入 1200 U的中性蛋白酶， 置于 50 ℃ 下水解 5 h，經(jīng) 8000 r/min 離心分離 20 min，取得清液，再利用膜分離設(shè)備對清液進行分離，取 截留分子量為 360 D~2500 D 之間的濾液，用于氨肽酶脫苦試驗。成功從腐乳中篩選出了適用于制備氨肽酶的巨大芽孢桿菌菌株，但由于條件和時間有限本實驗未能完成各菌株產(chǎn)生氨肽酶的最佳 8 條件進行實驗也并未進行各因素的水平正交實驗，僅以適用于大部分桿菌的條件進行實驗，此點希望引起注意。 測氨肽酶酶活記錄 菌種 搖床前 PH 搖床后 PH 搖床前OD600 搖床后OD600 酶液 原 液OD405 酶液原液 的酶活U/mL 酶液稀釋十倍OD405 枯草芽孢桿菌 7 6 3.9563 — 巨大芽孢桿菌 7 4.6996 — L71811 7 3.6206 — L197 7 4.0042 — W7181 7 3.0451 — 菌種鑒定 經(jīng)過試驗發(fā)現(xiàn)巨大芽孢桿菌即代號 L19 酶活較高故采取該菌株作為制取氨肽酶的菌種。超聲完畢，離心取上清液。并最后做對照試驗測定氨肽酶活最高的組別。酶活高代表該菌種適用于復(fù)篩。 菌種鑒定方法 形態(tài)及生理生化特性鑒定 根據(jù)《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》和《工業(yè)微生物實驗技術(shù)手冊》進行形態(tài)鑒定及生理生化特性鑒定，并以《伯捷氏細菌鑒定手 冊 (第八版 )》作為分類參考。培養(yǎng)基配制后，調(diào)節(jié) pH ，分裝至 1000 mL 三角瓶，每瓶裝液 200 mL， 121 ℃ 滅菌 20 min，冷卻后備用。7H 2O 2 g/L，MgSO4 復(fù)篩和發(fā)酵方法 把初篩的菌株點到復(fù)篩培養(yǎng)基上進行復(fù)選，并于結(jié)束后測酶活，選取酶活最高的作為菌種。 初篩方法 將平板分離所得的菌接入裝有 5ml 初篩培養(yǎng)基的大試管內(nèi)， 37℃培養(yǎng)18h，初測酶活。） 菌種篩選流程與方法 無菌條件下稱取 5g 腐乳，加入盛有 25mL 無菌生理鹽水的 250mL 三角瓶內(nèi)，振蕩均勻，懸浮液在 80℃下保持 10min，取 2mL 接入盛有 20mL 富集培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)， 37℃培養(yǎng) 18h。 7H2O ， MgSO4 保藏培養(yǎng)基 (g/L ) 可溶性淀粉 2,蛋白胨 5，牛肉膏 2,酪蛋白 1，瓊脂 20 , 初篩培養(yǎng)基 (g/L ) 麥芽糖 5,蛋白胨 12，牛肉膏 2, KH2PO4 1, MgSO4 , 平板分離培養(yǎng)基 (g/L ) 可溶性淀粉 5，蛋白胨 2，干酪素 10, KH2PO4 1, MgSO4蛋白陳 F403 (BR),，牛肉浸膏((BR)，干酪素 (BR)，可溶性淀粉 (AR)，三（羥甲基）胺基甲烷 (AR)，中國醫(yī)藥（集團 )上海化學(xué)試劑公司。 5 第三章 氨肽酶產(chǎn)生菌的篩選與鑒定 材料與方法 材料與試劑 腐乳。在酶解的最佳條件下，短肽得率達到 %。 131517192123250 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10時間 / h短肽得率 / %6 0 0 U / g 8 0 0 U / g1 0 0 0 U / g 1 2 0 0 U / g 圖 5 不同加酶量對短肽得率的影響 本章小結(jié) 采用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和堿性蛋白酶對羅非魚下腳料進行酶解， 堿性蛋白酶的酶解能力最強。但是，由于部分短肽繼續(xù)被水解，酶解后期的短肽得率與加酶量的關(guān)系并不是正相關(guān)。 8121620242840 45 50 55 60溫度 / ℃水解率 / %81216202428短肽得率 / %水解率 短肽得率 圖 2 溫度對堿性蛋白酶酶解作用的影響 酶用量與時間的優(yōu)選 在 55℃ 、 、液固比 3:1的條件下，按投入原料的蛋白質(zhì)含量計算加酶量，分別加入 600 U/g、 800 U/g、 1000 U/g、 1200 U/g 的堿性蛋白酶進行酶解，不同加酶量的 短肽得率如圖 5所示。圖 2可以看出，溫度對堿性蛋白 酶的酶解作用有很大的影響，兩個指標(biāo)均因溫度不同而具有較大的差異， 堿性蛋白酶在 55℃ 時的水解率和短肽得率均為最高。雖然水解率和短肽得率的最大值在酶解過程的不同時間出現(xiàn)，但兩者畢竟具有一定關(guān)聯(lián)性， 55℃ 的溫度條件有利于酶解，從而同時有利于獲得較高的水解率和短肽得率。 11131517192123250 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10酶解時間 / h短肽得率 / %液固比 1 :1 液固比 2 :1液固比 3 :1 液固比 4 :1 圖 4 不同液固比對短肽得率的影響 pH 的優(yōu)選 在不同溫度下， 堿性蛋白酶酶解過程中水解率和短肽得率的最大值如圖 2所示。對于各個液固比的底物體系，隨著酶解時間的增加，短肽得率首先呈現(xiàn)逐漸增大的趨勢，最大值出現(xiàn)在 5~6 h；在繼續(xù)酶解的過程中，由于部分短肽轉(zhuǎn)化為氨基酸或二肽，導(dǎo)致短肽得率隨后逐漸減小。水解率是蛋白酶作用的重要指標(biāo)，試驗結(jié)果表明，堿性蛋白酶更適合應(yīng)用于羅非魚下腳料的酶解。 實驗結(jié)果與討論 蛋白酶的優(yōu)選 在各種蛋白酶的最適作用條件范圍內(nèi)，木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和堿性蛋白酶對羅非魚下腳料的水解率如圖 1 所示。 液固比和加酶量的優(yōu)選 分別調(diào)節(jié)不同的液固比和加酶量，采用優(yōu)選的蛋白酶在最佳的溫度和 pH 下進行酶解，研究液固比和加酶量對短肽得率的影響，確定制備呈味肽的最佳液固比、加酶量及酶解時間。 中性蛋白酶（ 610 4 U/g） 、 堿性蛋白酶（ 210 5 U/g）購 于 北京奧博星生物科技有限公司 ，木瓜蛋白酶（ 110 6 U/g）購 于廣西龐博生物工程有限公司，胰蛋白酶（ 10 6 U/g）購 于北京格源天潤生物技術(shù)有限公司；其它試劑均為分析純。以及應(yīng)用氨肽酶對制得的呈味肽進行脫苦的應(yīng)用。為有力降低呈味肽的生產(chǎn)成本及周期做研究的意義。這些下腳料是寶貴的蛋白質(zhì)資源，一般含有 12%~15%的蛋白質(zhì) [4~5]，具有極高的綜合利用價值。我國是羅非魚養(yǎng)殖及加工的大國，養(yǎng)殖和加工的產(chǎn)量均占世界總產(chǎn)量的 50%以上 [1~2]。由于肽類因肽鏈長度、氨基酸組成及排列結(jié)構(gòu)等不同而具有復(fù)雜的呈味功能，并因含有 氨基和羧基兩性基團而具有細膩微妙的風(fēng)味，呈味肽已是新型調(diào)味基料研究的熱點。 Aminopeptidase。 flavor peptides。在最適的條件下，呈味肽溶液的游離氨基酸增量為 mg/L，疏
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