【正文】 然后取混合液滴注于實驗動脈表面 ， 觀察 4～ 6h， 則可模仿遲發(fā)性 CVS的表現(xiàn) 。 此法適用于藥物治療 CVS的研究 。 ? （ 三 ） 動脈周圍放置致血管痙攣物質(zhì)或血管收縮劑法 開顱暴露實驗動脈 ， 于動脈周圍放置致痙攣物質(zhì) ， 如 OxyHb或血管收縮劑 （ 如 5HT和兒茶酚胺 ） 等 。該法制作的 CVS模型類似人的動脈瘤破裂所致的 SAH后 CVS， 效果較為確實，但手術(shù)創(chuàng)傷較大。 枕大池注血法的缺點是注血部位距生命中樞較近 ， 不易造成顱內(nèi)壓增高 。 腦池注血法已在兔 、 狗 、 貓 、 猴 、 大鼠 、 豬和狒狒等動物成功的制作出 CVS模型 ， 此法操作簡單 ， 可隨意控制注血速度和注血量 ， 動物死亡率低 ， 效果確切 ， 重復(fù)性好 ， 便于在穩(wěn)定的條件下進行單因素分析 ， 適用于發(fā)病機制的探討 。 ? （ 二 ） 腦池注血法 ? ① 枕大池注血法：枕大池穿刺注血法和開顱置管注血法； ② 視交叉池注血法：可直接經(jīng)內(nèi)眥或外眥進針沿眶壁推進 ， 經(jīng)視神經(jīng)孔刺入視交叉池注血 ， 或先去除眶內(nèi)容物后再穿刺視交叉池注血； ③ 側(cè)腦室穿刺注血法； ④ 經(jīng)顳頂部蛛網(wǎng)膜下腔穿刺注血法； ⑤ 經(jīng)軟腭基底池穿刺注血法 。 ? 2．不開顱法 應(yīng)用改良線栓法，將血管內(nèi)插線改用頭端尖銳的 30單股絲線，由一側(cè) ECA進入，導(dǎo)入同側(cè) ICA至頸動脈分叉處時，用線段的尖端刺破該動脈的分叉部，抽出導(dǎo)線，即可產(chǎn)生 SAH模型。 這些方法的優(yōu)點是近似人類動脈瘤破裂造成的蛛網(wǎng)膜下腔出血 ， 缺點是破壞性大 ， 且出血量及出血速度難以精確控制 ， 可能造成同組動物出現(xiàn)的癥狀不同 ， 給實驗結(jié)果分析帶來困難 。 ? 一 、 無癥狀性 CVS模型 ? （ 一 ） 顱內(nèi)動脈刺破法 ? 1． 開顱法 開顱暴露實驗動脈 ， 于該動脈處置一絲線并引出線的末端埋藏于皮下 ， 若干天后將線抽出 ， 造成相應(yīng)的動脈破裂及蛛網(wǎng)膜下腔出血 。 CVS存在著雙期現(xiàn)象，一般認為早期多發(fā)生在 SAH后 ，不超過 1h，晚期常始于 3~4h或 24~72h， 持續(xù)數(shù)天甚至1周以上。 第六節(jié) 蛛網(wǎng)膜下腔出血模型 ? 理想的蛛網(wǎng)膜下腔出血 （ SAH） 所致腦血管痙攣 （ CVS） 動物模型應(yīng)符合下列條件：動物出現(xiàn)的 CVS的癥狀與人類 CVS的癥狀相似；制作簡單 、 費用低；所用動物腦血管變異較少；可以控制 CVS的程度；可用此模型進行慢性實驗；可在一定的部位有較高的腦缺血發(fā)生率；有類似動脈瘤破裂時動脈壁的損傷；有急性顱內(nèi)壓增高的表現(xiàn)；在蛛網(wǎng)膜下腔中有足夠的血凝塊 。 SHR的高血壓發(fā)展過程、發(fā)病機制及并發(fā)癥與人類原發(fā)性高血壓有許多相似之處，是一種遺傳性高血壓模型，適合于出血性卒中的研究。 20周鼠齡SHRSP食用高 Na+低 K+飲食 ， 很快就發(fā)生非常明顯的卒中 ， 大約 100%死于出血性卒中 。 ? 三 、 高血壓腦出血模型 ? 采用自發(fā)性高血壓大鼠模型的制備方法制備自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHR） ， SHR的后代 100%發(fā)生高血壓 ， 3月齡后逐漸出現(xiàn)腦 、 心等器官實質(zhì)性損害 。病變過程與急性梗死性出血相似。膠原酶誘導(dǎo)腦出血模型操作簡單，整個操作過程僅需 20min， 產(chǎn)生的血腫大小基本一致，血腫形成后基本保持恒定，重復(fù)性好。誘導(dǎo)后 2h既有明顯的血腫區(qū)形成，有的血腫區(qū)內(nèi)還可出現(xiàn)較大的血凝塊。 融合常不完全 ， 出血區(qū)與腦組織混雜存在 。 血腫的體積與注入的膠原酶呈劑量依賴性 。 膠原酶是一種金屬蛋白酶 ， 可以分解細胞基質(zhì)及血管基底膜的膠原蛋白 ， 腦內(nèi)注射后 20min即可損害腦血管基底膜上的膠原蛋白 。 ? （ 二 ） 膠原酶誘導(dǎo)腦出血模型 ? 實驗研究表明 ， 用含 ~鹽水 2μl， 通過立體定向術(shù)經(jīng)微量注射器于 9min內(nèi)注入尾殼核 ， 。用肝素化注射器快速回輸放出的血液，使平均動脈壓驟增超過原血壓基線 17mmHg， 造成大幅度波動，使 rCBF改變，誘發(fā)腦出血。 ? 模型制備方法：新生 Beagle幼犬（生后 12~72h）， 體重 208~405g， 氣管切開人工通氣維持在 PO2在 40~60mmHg，PCO2在 30~40mmHg。 出血主要好發(fā)部位是覆蓋尾核上的胚胎基質(zhì) 。 根據(jù)臨床病理學(xué)研究 ， 新生兒顱內(nèi)出血可能與腦缺血 、 高碳酸血癥 、 全身血容量和血壓大幅度變化有關(guān) 。 因此 ， 微氣囊充脹腦出血模型與臨床腦出血尚有差異 ，但其制作簡單 、 重復(fù)性好 ， 易標(biāo)準化 ， 仍不失為研究腦出血占位效應(yīng)及清除占位后繼發(fā)性腦損害的有效模型 。 微氣囊充脹法能產(chǎn)生一致的 、 可重復(fù)的腦損害 ， 避免了腦內(nèi)注血所出現(xiàn)的血液進入蛛網(wǎng)膜下腔或破入腦室以及血腫形態(tài)不一的缺陷 。 ? （ 二 ） 微氣囊充脹腦出血模型 ? 將微氣囊置于 25號針中 ， 經(jīng)立體定向刺入大鼠尾殼核中心 ， 穩(wěn)定 30min后 ， 在100mmHg壓力下于 20秒內(nèi)充脹微氣囊 ， 造成類似腦出血的占位效應(yīng) 。光鏡下，尾殼核注血后血腫上方的皮質(zhì)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)性損害。 ? 這種方法操作有一定困難，注血速度稍快，血液往往順針道返流而進入蛛網(wǎng)膜下腔或硬腦膜下腔，且血腫易破入腦室，并常有血液外滲到胼胝體等白質(zhì)內(nèi)，血腫形態(tài)和大小一致性較差。大鼠腦容量約 2ml， 因而鼠腦 1μl出血量約相當(dāng)于人腦 。是人類高血壓腦出血最好發(fā)部位，所以大鼠腦出血模型多定位于尾殼核。 兔平均腦重約 30g， ~體積 3%~5%的注血量相當(dāng)于人腦 50~70ml左右的出血量 。 大于腦內(nèi)注血量與動物腦體積有關(guān) ， 大鼠 ~， 兔 ~3ml，狗 1~4ml， 一般多按平均腦體積的 1%~5%計算注血量 。 大鼠等小動物多用立體定向方法注血 ，大動物如狗和猴等三種方法都可采用 。 ? 一 、 腦內(nèi)占位模型 ? （ 二 ） 腦內(nèi)直接注血腦出血模型 ? 直接將自體新鮮血液或凝血塊注入動物腦內(nèi) （ 皮質(zhì)下 、 腦室 、 尾殼核 、 丘腦或基底節(jié) ） 產(chǎn)生實驗性腦出血是多數(shù)研究者用來建立腦出血模型的主要方法 ， 其優(yōu)點是可成批制作 ， 易于標(biāo)準化 ， 制作簡單 。由于大鼠具有：①腦血管解剖及生理較接近人類；②腦體積較少，易于病理學(xué)及生化學(xué)觀察；③價格低廉且容易管理和實施手術(shù)；④生理、生化、藥理、形態(tài)學(xué)方面實驗資料豐富，易于比較。多數(shù)實驗動物如鼠、兔、貓、狗、豬、猴和狒狒等，都可用來制做腦出血模型，但不同部位和不同類型的腦出血模型對選擇動物的要求也各不相同。值得注意的是，在電灼雙側(cè)椎動脈時，應(yīng)將組織分離完全，充分暴露雙側(cè)的翼小孔內(nèi)的椎動脈，否則，電灼椎動脈容易失敗。然后在頸后第一、二頸椎之上切口，暴露第一頸椎兩側(cè)翼小孔，用直徑 雙側(cè)的翼小孔中燒灼雙側(cè)椎動脈，造成永久性閉塞。 ? 五 、 四血管閉塞 （ 4VO） 全腦缺血模型 ? 1979年， Pulsinelli首先建立了 4VO全腦缺血模型。 ? 優(yōu)點：與臨床栓塞性卒中的病理過程最為貼切，操作簡單，效果可靠，適用于纖維蛋白原激活系統(tǒng)血栓效應(yīng)的研究和溶栓治療觀察。 雖然部分出現(xiàn) ACA供應(yīng)區(qū)腦組織缺血損害 ， 但仍以 MCA供應(yīng)區(qū)損害為主 ，故仍是可以選用的 MCAO模型 。 但該模型造成的模擬腦梗塞現(xiàn)象與人類腦梗塞的發(fā)生機理差異較大 。 動物蘇醒后 ， 一般不出現(xiàn)病灶對側(cè)前趾屈曲或爬行向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈 。 ? 3． 評價標(biāo)準 術(shù)后 24h處死動物取腦 ，可見照射部位出現(xiàn)一圓形或橢圓形灰紅色病灶區(qū) ， 直徑約 ~， 與周圍組織有較明顯的分界 。 2min后以 3000勒克斯（ lx） 的光照度照射 10min。 ? ? 2．實驗方法 將家兔或大鼠麻醉，俯臥固定于手術(shù)臺上，常規(guī)消毒，采用顱頂部正中切口，暴露顱骨，以冠狀縫后方 縫左側(cè) ，用骨鉆鉆透顱骨，暴露硬腦膜，直徑 ~ 。本模型的缺點是結(jié)扎一側(cè)動脈不一定全部發(fā)生腦梗死 ， 而且一旦發(fā)生大面積梗死 ， 多數(shù)動物會在短時間內(nèi)死亡 ， 使實驗中斷 ， 不適用于慢性實驗 。 腦梗塞病灶的大小多種多樣 ，最容易出現(xiàn)在腹側(cè)海馬皮質(zhì)部 ， 病灶大時也可波及海馬區(qū) 、 紋狀體 、 大腦皮質(zhì) 、 間腦和中腦等部位 。 ? 3． 評價標(biāo)準 Kahn曾做過歸納總結(jié)：一側(cè)動脈搏動停止；對側(cè)后肢外張；對側(cè)足指伸展不對稱 ， 肌肉無力；動物爬行時向手術(shù)側(cè)轉(zhuǎn)圈；手術(shù)側(cè)眼瞼下垂 。 Levine和 Payan曾做過該項實驗 ， 腦梗死的發(fā)病率為 30%~65%， 其中大部分動物在數(shù)小時至三天內(nèi)死亡 。 因此 ， 一側(cè)頸總動脈阻塞時 ， 該側(cè)的大腦中 、 后動脈必須通過對側(cè)相應(yīng)的大腦動脈供血區(qū)的血液提供營養(yǎng) ， 因而結(jié)扎一側(cè)頸總動脈即可導(dǎo)致腦梗死 。由于顱內(nèi)血管存在變異，約有 20%動物不出現(xiàn)梗塞灶和癥狀體征，實驗時應(yīng)棄用。 ? 4．優(yōu)缺點 該模型的優(yōu)點是不需要特殊設(shè)備、不開顱，栓塞部位容易控制、成功率較高、重復(fù)性較好，栓塞機理與臨床腦血栓的機理較為接近。 ? ④ 蒸餾水沖洗 30秒后 ， 置于載玻片上 ，肉眼或顯微鏡下觀察 （ 4倍 ） 。 ? ② 大鼠缺血再灌注 24h斷頭取腦斷頭后迅 ?速取腦 ， 不固定 ， 連續(xù)冠狀切片 ， 片厚 1mm。 TTC為受氫體 ，與氫離子結(jié)合后形成紅色 、 光敏脂溶性的Formazen， 使正常腦組織染成紅色 ， 缺血區(qū)無此反應(yīng)則顯白色 。 ? 3． 評價指標(biāo) ? （ 1） 動物蘇醒后 ， 手術(shù)側(cè)出現(xiàn) Horner征 ， 提尾手術(shù)對側(cè)前肢屈曲或爬行時向手術(shù)對側(cè)轉(zhuǎn)圈者入選 。手術(shù)時間超過 30min、 術(shù)中發(fā)生呼吸困難、出血量過多、術(shù)后 2h仍不蘇醒的動物棄用。 ? 缺血后（時間根據(jù)實驗要求而定）拔出絲線至有阻力感，說明絲線頭部已離開 ICA而位于ECA內(nèi)，將體外的絲線剪斷，完成缺血再灌注動物模型的制備。 動脈夾夾閉CCA和 ICA， 結(jié)扎 ECA遠端 ， 在 ECA靠遠端處剪一小切口 ， 將尼龍線頭端插入約 18~22mm， 至有阻力感即到 MCA的起始部 。動物腹腔注射麻醉 ， 仰臥固定于手術(shù)臺上 ， 頸部正中切口 ， 暴露左側(cè) （ 或右側(cè) ， 根據(jù)需要而定 ）頸總動脈 （ CCA） 、 頸外動脈 （ ECA） 、 頸內(nèi)動脈 （ ICA） ， 注意勿過度刺激迷走神經(jīng) 。將插線抽出后 ， 恢復(fù)了上述返流的血液 ， 可達到再灌注的目的 ， 即短暫性局灶性腦缺血再灌流模型 ，如不抽線即為永久性局灶性腦缺血模型 。目前最常用的為大鼠 ， 兔 、 小型豬 、 猴等動物也可應(yīng)用線栓法建立此類模型 ， 本書不做贅述 。 本節(jié)主要介紹線栓法制備局灶性腦缺血再灌流動物模型 。 第四節(jié) 腦缺血再灌流模型 ? 缺血性腦血管病是急性腦血管病中最常見的類型 ， 因而用于腦缺血 / 再灌流(MCAO/R)研究的動物模型也較多 。③高血壓狗可存活幾年，在同一狗身上可反復(fù)觀察各種藥物的降壓作用。腎性高血壓模型需經(jīng)過一定的手術(shù)或其它附加因素處理，與人類高血壓病的臨床不完全一致，但它有如下優(yōu)點，①血壓升高較明顯，持久和恒定，容易反應(yīng)出藥物的降壓作用。 ? 遺傳性高血壓動物模型能模擬人類高血壓的自然過程，可用作高血壓發(fā)病機理、藥物干預(yù)的研究。 SHRSP出生后出現(xiàn)嚴重高血壓外 ， 90%以上出現(xiàn)腦出血和腦栓塞； 20周鼠齡 SHRSP食用高 Na+低 K+飲食 ， 很快就發(fā)生非常明顯的卒中 ，大約 100%死于出血性卒中 。 該鼠自發(fā)性高血壓的變化與人類相似，是目前應(yīng)用最廣泛的高血壓模型，它可產(chǎn)生腦血栓、梗塞、出血、腎硬化、心肌梗塞和纖維化等變化。 ? 五 、 鈉負荷高血壓模型 ? 用高濃度鹽水作為日常飲水喂養(yǎng) Saltsensitive大鼠 （ SStrain） 誘發(fā)高血壓 ， 大鼠血壓會超過 180mmHg。將大鼠麻醉后摘除其一側(cè)腎臟，然后給予飲用 1%的鹽水，脫氧皮質(zhì)醇醋酸鹽（ deoxycortcosterone acetate， DOCA） 皮下注射，劑量每周 20~30mg/kg體重，一周內(nèi)分幾次注射或每周一次性注射。 即使停止應(yīng)用鹽皮質(zhì)激素 ， 動物的高血壓 、 多尿 、 尿鈉消失現(xiàn)象也會持續(xù)下去 。 當(dāng)動物單側(cè)腎臟摘除 ， 大量給于高濃度鹽水和腎上腺鹽皮質(zhì)激素時 ，將導(dǎo)致動物體內(nèi)鈉水潴留 。 也可肌肉注射垂體后葉素配合電刺激 ， 一般兔在實驗后 11天 、 大鼠 30天 、 狗 35天即出現(xiàn)血壓升高 ， 在實驗觀察的 2~3個月內(nèi) ， 動物血壓會始終保持穩(wěn)定的升高狀態(tài) ， 而且動物死亡率很低 。 一類以心理應(yīng)