【正文】 但對(duì)于多糖得率而言則并不盡然，第七天就已經(jīng)出現(xiàn)的高峰可以解釋為原來(lái)培養(yǎng)基中的糖尚未得到完全的消耗，因此糖含量非常高。不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)于菌絲體質(zhì)量和 多糖產(chǎn)量的影響如條形圖 39 與 310。 177。 4000177。 4400177。 177。 3800177。 因此，在正交試驗(yàn)中，我們將以 為基準(zhǔn)，看這一條件與其他條件是否能契合。不同 pH值對(duì)于菌絲體質(zhì)量和多糖產(chǎn)量的影響如條形圖 37 與 38。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 第七章 不同無(wú)機(jī)離子對(duì)于杏鮑菇菌絲體生物量及多糖得率的影響 無(wú)機(jī)離子 菌絲生物量 g/L 多糖得率 mg/L MgSO4其中又以 KH2PO3 的效果最為卓著，其多糖得率較次佳無(wú)機(jī)離子 K2HPO3 高%，比鎂離子和鈣離子分別高 %和 %。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鈣離子顯然最有利于菌絲體的生長(zhǎng)，這與在大多數(shù)的真菌生長(zhǎng)過(guò)程中鈣離子都與菌絲體延長(zhǎng)的生理過(guò)程有關(guān)。 在無(wú)機(jī)離子的單因子實(shí)驗(yàn)中我們主要考慮了大量元素，而痕量元素因?yàn)樵谝后w藥瓶中一般不添加而不在考慮范圍之內(nèi)。 表 33. 不同氮源對(duì)于杏鮑菇菌絲體質(zhì)量的影響 表 34. 不同氮源對(duì)于杏鮑菇胞外多糖產(chǎn)量的影響 8 無(wú)機(jī)離子單因子實(shí)驗(yàn) 無(wú)機(jī)離子單因子的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 33，表中分別顯示了其生物量和多糖提取率。 硫酸銨 5355177。 醋酸銨 2817177。 尿素 5269177。 胰胨 4188177。 酵母提取物 11573177。 牛肉膏 11331177。 7 第六章 不同氮源對(duì)于杏鮑菇菌絲體生物量及多糖得率的影響 氮源 菌絲生物量 mg/L 多糖得率 mg/L 蛋白胨 6377177。但在胞外多糖的獲得率方面，有機(jī)氮源蛋白胨的效果顯然要更加理想，其多糖的得率顯然要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于后面幾種備選 的氮源。 供試氮源有無(wú)機(jī)氮源（硫酸銨，醋酸銨）和復(fù)雜有機(jī)氮源（蛋白胨，酵母提取物，牛肉膏，尿素，胰胨）。 表 31. 不同碳源對(duì)于杏鮑菇 菌絲體質(zhì)量的影響 6 表 32. 不同碳源對(duì)于杏鮑菇胞外多糖產(chǎn)量的影響 氮源單因子實(shí)驗(yàn) 氮源單因子的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 32，表中分別顯示了其生物量和多糖提取率。 可溶性淀粉 9867177。 D甘露醇 7900177。 D果糖 7777177。 蔗糖 8067177。 D木糖 5339177。 D甘露糖 6884177。 L阿拉伯糖 5899177。 麥芽糖 7025177。 D山梨醇 7832177。 鼠李糖 6316177。 乳糖 7049177。 D葡萄糖 7102177。 第五章 不同碳源對(duì)于杏鮑菇菌絲體生物量及多糖得率的影響 碳源 菌絲生物量 mg/L 多糖得率 mg/L 半乳糖 7054177。以半乳糖作為碳 源，多糖得率較葡萄糖高出 12%，較乳糖高出 17%。 因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)著眼于培養(yǎng)基各元素對(duì)于胞外多糖產(chǎn)量的影響，所以首要關(guān)注的是能提高胞外多糖產(chǎn)量的碳源。多糖明顯更利于真菌菌絲體的生長(zhǎng)而不是產(chǎn)生胞外多糖。 在單糖中，最適碳源是半乳糖。 在選取被試碳源時(shí)，我們考慮到了不同類(lèi)別的糖類(lèi)對(duì)于胞外多糖產(chǎn)量的影響。 單因子實(shí)驗(yàn) 碳源單因子實(shí)驗(yàn) 碳源單因子的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 31，表中分別顯示了其生物量和多糖提取率。 多糖提取率的計(jì)算依照如下公式： 多糖提取率（ mg/L） = 粗多糖干重（ mg） / 發(fā)酵液體積（ ml） * 1000 4 結(jié)果與討論 食用菌液體發(fā)酵的技術(shù)關(guān)鍵在于培養(yǎng)基的選取，不同的菌種對(duì)于培養(yǎng)基的需求均有差異。 第五章 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案 A： 碳源 B： 氮源 C:無(wú)機(jī)離 子 D：起始 pH 值 水平 1 25g/L 5g/L 1g/L 水平 2 30g/L 7g/L 2g/L 6 水平 3 35g/L 9g/L 3g/L 杏鮑菇菌絲體生物量測(cè)定 培養(yǎng)九天的發(fā)酵液經(jīng)紗布過(guò)濾，并用蒸餾水反復(fù)沖洗菌絲體，置于 60 攝氏度恒溫烘箱中烘干至恒 重，稱(chēng)重。培養(yǎng)時(shí)間為九天。每 150 ml 錐形瓶裝入 50 ml 培養(yǎng)基，接種量 10%，于 25 ℃ ， 150 r/min 培養(yǎng)九天，最后測(cè)其生物量 和胞外多糖含量。每 150 ml 錐形瓶裝入 50 ml培養(yǎng)基，接種量 10%，于 25 ℃ ， 150 r/min 培養(yǎng)九天，最后測(cè)其生物量和胞外多糖含量。每 150 ml 錐形瓶裝入 50 ml 培養(yǎng)基，接種量 10%，于 25 ℃ ， 150 r/min 培養(yǎng)九天，最后測(cè)其生物量和胞外多糖含量。每 150 ml 錐形瓶裝入 50 ml 培養(yǎng)基，接種量 10%，于 25 ℃ ， 150 r/min 培養(yǎng)九天，最 3 后測(cè)其生物量和胞外多糖含量。每 150 ml錐形瓶裝入 50 ml 培養(yǎng)基，接種量 10%，于 25 ℃ ， 150 r/min 培養(yǎng)九天，最后測(cè)其生物量和胞外多糖含量。選擇菌絲生長(zhǎng)最為旺盛的平板備用。 主要設(shè)備 HYGA 全溫?fù)u床柜，無(wú)菌操作臺(tái)，恒溫磁力攪拌器，立式蒸汽滅菌器，電子分析天平，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 RE52，循環(huán)水真空泵，酸度計(jì)，冰箱，微波爐，超聲波清洗器，電子天平。 ），加入 1000ml 蒸餾水中 ， 115℃高壓滅菌 20 分鐘。 培養(yǎng)基 菌種保藏培養(yǎng)基： PDA 斜面培養(yǎng)基 馬鈴薯 20%，葡萄糖 2%，瓊脂 2%， pH 自然。 供試無(wú)機(jī)離子 七水合硫酸，磷酸氫二鉀，磷酸二氫鉀，氯化鉀，氯化鈣。 試劑 供試碳源 D木糖， D果糖， D葡萄糖， L阿拉伯糖， D甘露糖，半乳糖，鼠李糖，乳糖，麥 芽 2 糖，蔗糖， D甘露醇，可溶性淀粉， D山梨醇，糊精。該試驗(yàn)的結(jié)果將對(duì)食用菌來(lái)源的抗氧化、降血脂等保健產(chǎn)品的生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)具有一定的指導(dǎo)意義，為杏鮑菇多糖衍生食品和藥物開(kāi)發(fā)提供前期的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，令杏鮑菇及其多糖產(chǎn)品為人類(lèi)的健康做出更大的貢獻(xiàn)，產(chǎn)生更多的經(jīng)濟(jì)效益。液體發(fā)酵技術(shù)屬于現(xiàn)代生物技術(shù)之一，它比傳統(tǒng)的食 (藥 )用 1 真菌栽培生產(chǎn)技術(shù)具有明顯的優(yōu)越性：周期短、成本低、產(chǎn)量大，且有工廠(chǎng)化生產(chǎn)前景 [16]。 本文所涉及的發(fā)酵技術(shù)為液體發(fā)酵 [14]，液體發(fā)酵是食藥用菌液體培養(yǎng)的一種，它是將菌種培養(yǎng)在發(fā)酵罐或錐形瓶?jī)?nèi)，通過(guò)不斷通氣攪拌或振蕩，使菌體在液體深層處繁育的方法[15]。楊立紅 [11]等以杏鮑菇子實(shí)體為材料，分離純化了杏鮑菇多糖，并利用MDA(丙二醛 )、 GSHOPX(谷胱甘肽過(guò)氧化物酶 )活力、血清 GBT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶 )活力、 GOT(谷草轉(zhuǎn)氨酶 )活力、 GK(肌酸激酶 )活力等指標(biāo)研究杏鮑菇多糖對(duì)力竭小鼠自由基代謝及心肌、肝臟、骨骼肌損傷的影響，以觀察杏鮑菇多糖抗氧化、抗損傷功效 [12]。 現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，杏鮑菇中所含的真菌多糖能增強(qiáng)肌體免疫功能 [7]，具有抗病毒，降低機(jī)體膽固醇含量，防止動(dòng)脈硬化等功能 [8]。人們逐步認(rèn)識(shí)到多糖物質(zhì)具有重要的生物學(xué)功能，涉及到有機(jī)體生命活動(dòng)的整 個(gè)時(shí)空序列，如：受精、著床、分化、發(fā)育、免疫、感染、癌變和衰老等 [6]。糖生物學(xué)是糖的化學(xué)和生物學(xué)研究相結(jié)合而產(chǎn)生的一門(mén)新興學(xué)科，主要研究糖綴合物糖鏈的結(jié)構(gòu)、生物合成和生物學(xué)功能，其研究領(lǐng)域包括糖化學(xué)、糖鏈生物合成、糖鏈在復(fù)雜生物系統(tǒng)中的功能和糖鏈操作技術(shù)等 [5]。糖類(lèi)是地球生物不可缺少的化學(xué)物質(zhì)，其最簡(jiǎn)單的形式成為生物體賴(lài)以生存的主要能源，但其最主要的生物學(xué)功能則是以糖復(fù)合物或者多糖的形式出現(xiàn)的 [4]。杏鮑菇是聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織向各國(guó)推薦的食用菌品種，被列為 21 世紀(jì)最具開(kāi)發(fā)潛力的十種食用菌之一。 杏鮑菇的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高。 杏鮑菇菌絲白色，初期纖細(xì)，逐漸濃密蔓延。三年后， Ferri 首先進(jìn)行了商業(yè)性栽培的嘗試。 杏鮑菇原產(chǎn)于歐洲 地中海 區(qū)域、中東和北非，但也在亞洲部分地區(qū)生長(zhǎng)。杏鮑菇屬于 側(cè)耳屬 的最大一個(gè)種。我國(guó)目前能進(jìn)行人工栽培的食用菌有 80 多種，其中可進(jìn)行商業(yè)化栽培的僅 30 余種 [1]。其中絕大多數(shù)屬于擔(dān)子菌類(lèi)，少數(shù)屬于子囊 菌。 per liter of fermentation liquor. Keywords Pleurotus eryngii； extracellular polysaccharides； fluid medium optimization 目錄 1 引言 ................................................................................................................................ 0 2 材料與方法 .................................................................................................................... 1 主要材料與試劑 ................................................................................................. 1 生物材料 .................................................................................................. 1 試劑 .......................................................................................................... 1 培養(yǎng)基 ...................................................................................................... 2 主要設(shè)備 ............................................................................................................. 2 試驗(yàn)方法 ............................................................................................................. 2 菌種活化 .................................................................................................. 2 碳源單因子實(shí)驗(yàn) ...................................................................................... 2 氮源單因子實(shí)驗(yàn) ...................................................................................... 2 無(wú)機(jī)離子單因子實(shí)驗(yàn) .............................................................................. 3 pH 值單因子實(shí)驗(yàn) .................................................................................... 3 培養(yǎng)時(shí)間單因子實(shí)驗(yàn) .............................................................................. 3 液體發(fā)酵培養(yǎng)條件正交試驗(yàn) .................................................................. 3 杏鮑菇菌絲體生物量測(cè)定 ...................................................................... 3 杏鮑菇胞外多糖的提取及定量 .............................................................. 3 3 結(jié) 果與討論 .................................................................................................................... 4 單因子實(shí)驗(yàn) ...........