8第八章原位雜交組織化學(xué)(參考版)
2025-02-23 11:19本頁(yè)面
【正文】 上午 11時(shí) 5分 59秒 上午 11時(shí) 5分 11:05: MOMODA POWERPOINT Lorem ipsum dolor sit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blanditut cursus. 感謝您的下載觀看 專(zhuān)家告訴 。 2023年 3月 上午 11時(shí) 5分 :05March 12, 2023 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 :05:5911:05:59March 12, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 11:05:5911:05:5911:05Sunday, March 12, 2023 1知人者智，自知者明。 11:05:5911:05:5911:053/12/2023 11:05:59 AM 1越是沒(méi)有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 上午 11時(shí) 5分 59秒 上午 11時(shí) 5分 11:05: 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 2023年 3月 上午 11時(shí) 5分 :05March 12, 2023 1少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 :05:5911:05:59March 12, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 :05:5911:05Mar2312Mar23 1世間成事，不求其絕對(duì)圓滿，留一份不足，可得無(wú)限完美。 , March 12, 2023 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒(méi)有。 2023年 3月 12日星期日 11時(shí) 5分 59秒 11:05:5912 March 2023 1做前，能夠環(huán)視四周；做時(shí)，你只能或者最好沿著以腳為起點(diǎn)的射線向前。 2023年 3月 12日星期日 上午 11時(shí) 5分 59秒 11:05: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 11:05:5911:05:5911:05Sunday, March 12, 2023 1乍見(jiàn)翻疑夢(mèng)，相悲各問(wèn)年。 11:05:5911:05:5911:053/12/2023 11:05:59 AM 1以我獨(dú)沈久，愧君相見(jiàn)頻。 靜夜四無(wú)鄰，荒居舊業(yè)貧。 ⑧ 流水洗 510min，直至水無(wú)色為止。 ⑥ 將切片浸入緩沖也 Ⅲ 以終止反應(yīng)。定期卻出切片在顯微鏡下檢測(cè)反應(yīng)強(qiáng)度，根據(jù)反應(yīng)強(qiáng)度決定延長(zhǎng)或終止反應(yīng)。 ⑤ 浸入 BCIP/NBT中，室溫孵育 10～ 30min（或更長(zhǎng)時(shí)間，視需要而定）。 ③ 加數(shù)滴抗地高辛抗血清，室溫孵育 2h。 3）顯示 ① 用緩沖液 Ⅰ 沖洗雜交后的載波片 2 3min。 2）雜交 以含 cRNA探針（ ）的雜交液，按每張切片 1020ul的量覆蓋切片。 ⑦ 浸入新鮮配制的 %乙酸酐以封閉非特異性結(jié)合部位。 ⑤ 在 4%多聚甲醛 /PBS 3min。消化時(shí)間應(yīng)根據(jù)組織的種類(lèi)，厚度反復(fù)試驗(yàn)調(diào)整。其他切片暫放于 PBS內(nèi)。 ① PBS洗 2 3min。經(jīng)水洗后經(jīng) 37℃ 烤箱 4h或者過(guò)夜，然后進(jìn)行雜交前的處理。 石蠟包埋切片： 應(yīng)脫蠟經(jīng)梯度酒精脫水。 地高辛探針的應(yīng)用 基本操作步驟： 1）組織處理 冷凍切片： 切片貼在預(yù)先清潔、高溫處理并涂以粘附劑的載玻片上，先在 37℃ 預(yù)干燥 4h，然后置于 37℃ 烤箱中過(guò)夜。與生物素標(biāo)記探針相比，地高 辛探針不受組織、細(xì)胞中內(nèi)源性生物素的干擾，敏感性高。為節(jié)省核酸探針的用量，凡使用過(guò)的含有 探針的雜交液也可反復(fù)多次使用。 AKP靈敏度和分辨率較 HRP高，但 HRP的優(yōu)點(diǎn)為廉價(jià)、穩(wěn)定。 常用的免疫酶學(xué)檢測(cè)方法： DigHRP檢測(cè)系統(tǒng)： 以 DAB/H2O2為底物，結(jié)果為棕色； 以 4氯 1萘酚 / H2O2為底物，結(jié)果為藍(lán)色。通過(guò)隨即引物或缺口平移法，將 Dig11dUTP與探針的核酸分子相連，構(gòu)成 Dig配基標(biāo)記的核酸探針。 ⑩ 水洗，復(fù)染，脫水，透明和以甘油 /PBS或 DPX封固。 ⑧ PBS洗 2 3min。 ⑥ PBS洗 2 3min。 ④ PBS洗 2 3min。 ② 將載玻片浸入 %H2O2，以封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。 2 酶促生物素標(biāo)記 cRNA探針的應(yīng)用 原理： 酶促生物素標(biāo)記探針是用缺口平移法，隨機(jī)引物法或末端加 尾法等把修飾的核苷酸摻入到探針 DNA 中，制成標(biāo)記探針， 敏感度高于化學(xué)修飾法，但操作程序復(fù)雜，產(chǎn)量低，成本高。 21 20mmol/L EDTA， 。 19 緩沖液 Ⅱ 洗 2 5min。 17 5min。 15 3%BSA（ %Triton X100 PBS配） 37℃ 保溫 30min。 13 1
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