生物顯微技術第五章原位雜交(參考版)
2025-01-19 18:45本頁面
【正文】 實驗結果的判定 ? Northern 和 Southern印跡雜交法證明的方式 ? 免疫組織化學檢測蛋白的表達。 ?雜交前使用的器皿、試劑嚴格處理。 原位雜交中注意的問題： 雜交前處理要嚴格避免 RNA酶的污染。C 過夜 Buffer1 10min 3，室溫 Buffer3 5min 1， 室溫 加顯色液，黑暗室溫靜止顯色。C ?50%甲酰胺 SSC， 30min 2， 55 186。g/ml 變性探針 雜交后處理： ?50%甲酰胺 5 SSC， 15min 1， 55 186。C， 16小時以上 雜交液： 5 SSC 50%甲酰胺 %BSA 250 181。C保存 ? 室溫干燥 30分鐘或 50186。 ? 切片： 10181。 ? 塑料器皿的處理： DEPC處理 ? 藥品的配制：藥品專用、必要時 DEPC處理 ? 載片的處理：清潔如玻璃儀器 硅化處理：多聚賴氨酸處理 探針的標記 ? 根據(jù)被檢測基因的 cDNA序列設計合成引物 ? RTPCR的方法得到擴增產物 ? 回收擴增產物克隆到質粒載體 ? 測序 ? 使用地高辛標記的 dUTP應用體外轉錄系統(tǒng)轉錄合成標記的 RNA探針 ? 取材： 根據(jù)需要把材料切成 35mm的小塊迅速投入，液氮中， 70 186。 ?
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