實用組織化學(xué)技術(shù)-常規(guī)病理組織學(xué)和組織化學(xué)(研究生)(參考版)
2025-01-07 09:47本頁面
【正文】 。 10． 徹底脫水 ， 100％酒精 I 5— 10分鐘，再入100％ II酒精 5— 10分鐘 。 9． 切片脫水： 是由低濃度酒精到高濃度酒精。必要時放入氨水的低堿液中浸幾分鐘。 6． l％鹽酸酒精分化 ，時間幾秒鐘，肉眼觀察切片組織材料呈粉紅色即可。 4． 染細胞核 ，將切片移入蘇木素染液中染 1020分鐘。 2． 脫苯 ：用無水乙醇 I 脫苯 25分鐘，再經(jīng)無水乙醇 II 25分鐘。 一般組織病理學(xué)切片染色，染細胞核用蘇木素，染細胞質(zhì)用伊紅，故稱之為 HE染色（蘇木素 伊紅染色法） 。分兩種，一種是 酒溶性伊紅 ，另一種為 水溶性伊紅 。 ③ 伊紅 （曙紅， Eosin） 是細胞質(zhì)最常用的染料之一。 ② 蘇木素 （ Hematoxylin） 蘇木素為細胞核的染料，不經(jīng)氧化的蘇木素是不具有染色能力的。 染色需要的試劑及染色液的配制： ① 鹽酸 — 酒精： 主要是染色分色時用。 2．展切片時水溫要適當(dāng)，水溫低展不平切片，影響效果，有皺折；水溫過高切片入水后蠟片及組織熔化。 水浴鍋展片、撈片 通電后將平皿內(nèi)水溫升至 45℃ 左右 ，將已切好的薄片切割數(shù)片輕漂水中展平，不平時可用小彎鑷子輕輕展平，然后用涂有蛋白甘油等粘附劑的載片在水中選擇完整的切片以一定角度進行撈片。右手握旋轉(zhuǎn)輪搖把，按順時針方向均勻地搖動直到組織塊切面完整為止。 ⑵ ．切片刀固定于刀臺上，擰緊固定刀的螺絲，同時調(diào)整刀與蠟塊的切片距離，使刀與蠟塊貼緊后再固定刀臺螺絲，刀的角度為 25度角。 以上四部分共裝在一個鐵制的臺坐上，這樣就組成了各種類型的切片機，最常用的是石蠟切片機。來顯示）。還需載玻片、手術(shù)刀、毛筆一支、彎鑷子一個、托盤一個、大平皿一個、（展片使用）烤片盒或烤片架、蛋白甘油等。 ⑤鉻礬明膠液（略） ⑥甲醛 明膠液（略） 注意：①備用載玻片均要避免污染（尤其注意防塵）； ②一般可保存半年以上 。一個試劑盒 7ml可配成 350ml（丙酮）工作液。 主要用于免疫組織化學(xué)、原位雜交、 TUNEL染色等。 多聚賴氨酸 可反復(fù)冰凍，效果無大影響。也可適當(dāng)稀釋配成 %%濃度。主要用于常規(guī)組織學(xué)、組織化學(xué)染色用。 ② 蛋白甘油： 用雞蛋清（不要雞蛋黃）用玻璃棒充分攪拌后用數(shù)層紗布過濾后加等量的甘油攪均勻加數(shù)顆麝香草酚（防腐）。 目前主要在包埋機上操作，方便、快捷。如果操作不熟練或在冬天包埋時最好有一酒精燈，在材料包入石蠟之前稍在酒精燈上過一下（稍加一下溫），以免材料與包埋蠟溫度不符造成材料與包埋蠟有一痕跡，切片時產(chǎn)生分離現(xiàn)象。 包埋時用純石蠟溶解后（ 60℃ ）倒入包埋框內(nèi)，迅速將浸好的組織塊依次擺入框內(nèi)，待蠟逐漸冷卻凝固后就將組織材料一并凝結(jié)在石蠟內(nèi)。除此之外還有 火棉膠包埋法、炭蠟包埋法、明膠包埋法及環(huán)氧樹脂包埋法（電鏡用）。上海生物制品廠出的石蠟熔點有 52℃ — 54℃ ， 56℃ — 58℃ ， 58℃ — 60℃ ， 60℃ —62℃ 這幾種。 溶點在 50℃ 以上的石蠟稱為 硬蠟 。 ⑵ 石蠟 ：是由礦物質(zhì)中提取，質(zhì)地較疏松，色白。 蠟的種類：主要有兩類： ⑴ 蜂蠟 ：是動物體內(nèi)提取的蠟，顏色微黃，故也稱為黃蠟，溶點在 54℃ 左右。 六、浸蠟與包理 浸蠟的目的 是為了能制備一菲薄的切片做準備。 透明過程中如遇到組織塊內(nèi)部或某一個部位呈白色混濁狀態(tài)時，說明脫水不徹底，進而造成透明不徹底，無法下一步浸蠟。 二甲苯 ：是無色透明的一種有機溶媒，有很強的刺激氣味，易揮發(fā)，長期接觸對粘膜有刺激作用。 透明的時間依組織塊的大小而定，一般采用 20分鐘至 1小時左右，如組織塊過大可延長透明時間，透明好的材料如同油炸的感覺，呈透明狀。 五、透明 組織塊脫水后需要透明，因為水與蠟不能
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1