酶組織化學ppt課件(參考版)
2025-01-08 20:14本頁面
【正文】 ? 底物標記法 —— 是指用同位素、色素、金屬標記酶的底物，在酶的作用下，底物分解后沉著于酶所在部位，通過各種方法對此進行檢測。 ? 把 二甲基－對－苯二胺 和 α －萘酚 加入底物混合液中，由酶作用而釋放的 氧 與此二者發(fā)生結(jié)合，形成 靛酚藍 ，而顯示出酶的定位。 SDH存在于所有有氧呼吸的細胞，以心肌、腎曲管上皮細胞、肝細胞含量最豐富△ 抑制物： 丙二酸鹽（競爭抑制） —— 對照 【 孵育液 】 琥珀酸鈉 , 磷酸鹽緩沖液 NBT(硝基藍四唑 ) 【 步驟 】 1. 新鮮組織低溫冰凍切片 2. 孵育液 1535 分鐘 3. 生理鹽水洗 4. Fca(氯化鈣 Formalin)固定 10分鐘 5. 入 80%乙醇 5分鐘 6. 甘油明膠封固 【 結(jié)果 】 酶活性處為藍紫色沉淀 小鼠心肌冰凍切片 琥珀酸脫氫酶 X400 ? 思考題： 在細胞培養(yǎng)中，常用的 MTT法 測定細胞活性，用的是什么原理？檢測的是什么酶？ 顯示酶的組織化學方法 （二）聯(lián)苯胺色素法 ? 檢測 過氧化物酶 ? 酶作用釋放的 氧 使無色的聯(lián)苯胺 脫氫 而形成有色的 聯(lián)苯胺藍 ，再形成聯(lián)苯胺褐。 四唑鹽法 用于顯示氧化酶和脫氫酶 原理 : 四唑鹽或雙四唑鹽 氫離子 與 與 底物混合液 無色四唑鹽結(jié)合 紅色或蘭色的沉淀 脫氫酶 +2H 被還原 常用四唑鹽種類 三苯四唑氯化物 TTC 藍四唑鹽 BT 新四唑鹽 NT ? 硝基藍四唑 NBT ? 四硝基藍四唑 TNBT ? 噻唑藍 MTT 以 琥珀酸（鈉鹽） 為底物，在酶的作用下脫氫，人工合成的 硝基藍四唑 （ NBT）為受 H體，其接受 H后被還原成紫色不溶物以代表琥珀酸脫氫酶的活性。 分布于腎近端小管核周，肝毛細膽管周圍。 ⑤ 用 Apathy糖膠或甘油明膠封固。 孵育液：磷酸奈酚 AS— BI 二甲基亞砜 （溶劑） 六氮化對品紅 緩沖液 充分混勻并 過濾 ② 蒸餾水洗 ③ 入 Mayer蘇木精內(nèi)染 1分鐘。 方法 標本： 大白鼠腎、肝恒冷箱切片，厚 810微米。 （二）后偶聯(lián)法 ? 為了 防止重氮鹽對酶的抑制作用 ，先使酶在底物內(nèi)發(fā)生作用，使分解產(chǎn)物沉著，然后再浸漬于重氮鹽溶液中，使其形成偶氮色素。 （二）偶氮偶聯(lián)法（偶氮色素法） 底物混合液 PRP與 不溶性 重氮鹽結(jié)合 偶氮色素 2. 方法 同時偶聯(lián)法 后偶聯(lián)法 酶 偶氮偶聯(lián) 顯示酶的組織化學方法 ? 重氮鹽種類不同，其 偶氮顏色多樣 （藍色、紫色、紅色、褐色、黑色、棕色等） ? 重氮鹽還有不同程度的 抑制酶活性作用 ，故必須選用其中抑制作用最弱的種類使用。 ［應用范圍］ “ 鉛法 ” 適用于： ACP， 5’核
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