酶組織化學應用ppt課件(參考版)
2025-01-19 14:52本頁面
【正文】 ? 不需輔酶的存在 ? SDH存在于所有有氧呼吸的細胞，以心肌、腎曲管上皮細胞、肝細胞含量最豐富，和線粒體膜牢固結合 ? 最適 PH 7. 【 顯示方法 】 Pearson 二甲亞砜法 【 基本原理 】 琥珀酸鹽 + 受氫體（四唑鹽） 富馬酸 +還原的受氫體 （無色） （藍色沉淀） 【 作用液 】 琥珀酸鈉 , 磷酸鹽緩沖液 PH NBT(硝基藍四唑 ), 二甲亞砜 (DMSO) 【 步驟 】 1. 新鮮組織低溫冰凍切片 2. 作用液 15~35 分鐘 3. 生理鹽水洗 4. Fca(氯化鈣 Formalin)固定 10分鐘 5. 入 80%乙醇 5分鐘 6. 甘油明膠封固或脫水、透明、中性樹膠封片 【 結果 】 酶活性處為藍紫色沉淀 小鼠心肌冰凍切片 琥珀酸脫氫酶 X400 2. 乳酸脫氫酶（ LDH） ? 需輔酶的脫氫酶 ? 廣泛分布的可溶性酶，為糖原分解的酶系 ? 最適 PH ? 肝、骨骼肌的酶活性高于心肌 【 基本原理 】 催化乳酸和丙酮酸的互變反應 乳酸鹽 + NAD 丙酮酸鹽 + （ NADH+H+） LDH （輔酶 Ⅰ ） （還原型輔酶 Ⅰ ） （二）過氧化物酶 ? 催化各種物質(zhì)被過氧化氫（ H2O2）所氧化 ? 見于乳腺、甲狀腺、唾液腺、肥大細胞等 ? 髓過氧化物酶見于中性和嗜酸性白細胞及其前體細胞中，對造血系統(tǒng)疾病的鑒別診斷極為重要 ? 免疫組化中常用辣根過氧化物酶（ HRP）作為大分子示蹤劑 【 顯示方法 】 二氨基聯(lián)苯胺法示過氧化物酶 【 基本原理 】 過氧化物酶作用于底物（ 3， 3二氨基聯(lián)苯胺，DAB），催化底物被 H2O2氧化，生成棕色的沉淀 【 作用液 】 DAB， Triscl緩沖液， H2O2 【 結果 】 酶活性處呈棕色 小鼠腹腔巨噬細胞 過氧化物酶 *400 白血病涂片 過氧化物酶 X400 。主要用于顯示膜性 ATPase，也可示線粒體 ATPase 2. 鈣激活的 ATP酶法 (鈣鈷法 ): 在 ATP酶活性處 , 出現(xiàn)黑色硫化鈷沉淀。 經(jīng)甲醛固定而失活 硝酸鉛法顯示 G6p酶 : 葡萄糖 6p 葡萄糖 +磷酸 磷酸鉛 硫化鉛 G6p酶 (五 ) 腺苷三磷酸酶 又稱 ATP酶 ATP ADP + Pi + 能量 根據(jù)所用激活劑
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