【正文】 ？其主要依據(jù)是？主要目的：為了治療需要和方便使用，把原料藥制成各種不同給藥形式，根據(jù)：藥典、藥品標(biāo)準(zhǔn)或其他適當(dāng)處方，將原料藥物按照劑型要求制成的最終供用藥對(duì)象使用的藥品統(tǒng)稱為制劑。GLP的檢查對(duì)象 物飼養(yǎng)設(shè)施 ，蛋白藥物PEG化的有何優(yōu)點(diǎn)。GLP是就實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)研究從計(jì)劃、實(shí)驗(yàn)、監(jiān)督、記錄到實(shí)驗(yàn)報(bào)告等一系列管理而制定的法規(guī)性文件，涉及到實(shí)驗(yàn)室工作的所有方面。 GMP所規(guī)定的內(nèi)容，是食品藥品加工企業(yè)必須達(dá)到的最基本的條件。、GMP、GLP的主要內(nèi)容是？GMP是英文Good Manufacturing Practice 的縮寫(xiě)，中文的意思是“良好作業(yè)規(guī)范”，或是“優(yōu)良制造標(biāo)準(zhǔn)”，是一種特別注重在生產(chǎn)過(guò)程中實(shí)施對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量與衛(wèi)生安全的自主性管理制度。一般說(shuō)來(lái)，吸收快的劑型藥物血濃度的峰值較高，單位時(shí)間內(nèi)排出也較多，故維持時(shí)間較短。？①溫度的影響②pH對(duì)蛋白質(zhì)構(gòu)象的影響③有機(jī)溶劑的影響④鹽的影響⑤ 表面活性劑對(duì)蛋白質(zhì)構(gòu)象的影響？ 1. 有利于制劑形態(tài)的形成 2. 使制備過(guò)程順利進(jìn)行 3. 提高藥物的穩(wěn)定性 4. 調(diào)節(jié)有效成分的作用或改善生理要求，劑型對(duì)藥物的作用有何影響？（這一部分PPT沒(méi)有集中答案，網(wǎng)上找的）蛋白質(zhì)藥物劑型主要有：①現(xiàn)用溶液劑；②使用前需復(fù)溶的凍干粉；③現(xiàn)用混懸劑同一藥物的不同劑型吸收速率和分布的范圍可以不同，從而影響藥物起效時(shí)間、作用強(qiáng)度和維持時(shí)間等。特異性鑒別利用蛋白質(zhì)的哪一性質(zhì)？根據(jù)抗原抗體特異性反應(yīng)？給藥系統(tǒng)：靶向制劑（包括靶向修飾）、脈沖給藥系統(tǒng)、擇時(shí)給藥系統(tǒng)、自調(diào)式釋藥系統(tǒng)、經(jīng)皮給藥系統(tǒng)、生物技術(shù)制劑、粘膜給藥系統(tǒng)常用的有片劑、丸劑、散劑、注射劑、酊劑、溶液劑、浸膏劑、軟膏劑等。蛋白質(zhì)的紫外特征吸收峰長(zhǎng)多少？引起的原因l 利用蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸中苯環(huán)的共軛雙鍵具有紫外吸收功能。l 還原型SDS－PAGE電泳l 分子篩（HPLC）l 質(zhì)譜 檢測(cè)蛋白質(zhì)純度指標(biāo)的方法。 – 用于蛋白質(zhì)復(fù)性的層析折疊復(fù)性法主要有凝膠過(guò)濾(GC)，疏水層折 （HIC）、離子交換層析（IEC）和親和層析法（AC，含金屬鰲合色譜）– 主要的問(wèn)題就是復(fù)性過(guò)程中（可能在進(jìn)樣過(guò)程中，或在樣品溶液與流動(dòng)相混合但蛋白未和固定相接觸之前）會(huì)產(chǎn)生蛋白質(zhì)聚集體或沉淀 1影響包涵體復(fù)性的主要因素? 蛋白質(zhì)本身的性質(zhì) – 二硫鍵的數(shù)量，氨基酸的種類，蛋白質(zhì)的復(fù)性效率在20%左右? 蛋白質(zhì)的復(fù)性濃度 – ? pH和溫度 – – 溫度影響反應(yīng)速度，過(guò)高影響蛋白質(zhì)穩(wěn)定性? 其他– 變性劑的起始濃度和去除速度、– 氧化還原電勢(shì)和離子強(qiáng)度– 共溶劑和其他添加劑的存在與否四、生物檢測(cè)部分 作為一個(gè)藥用重組蛋白需要檢測(cè)的理化性質(zhì)有那些？分子量、純度、等電點(diǎn)、特異性鑒別、紫外光譜掃描、肽圖分析、氨基酸組分分析、N－末端氨基酸序列、C－末端氨基酸序列分析、二硫鍵的分析 ? 層析法：– 蛋白質(zhì)在變性劑存在下，利用其在填料上的反復(fù)分配作用，逐步使其構(gòu)象由U轉(zhuǎn)化為N狀態(tài)。? 透析法：– 好處是不增加體積，通過(guò)逐漸降低外透液濃度來(lái)控制變性劑去除速度，– 易形成無(wú)活性蛋白質(zhì)聚體，且不適合大規(guī)模操作，無(wú)法應(yīng)用到生產(chǎn)規(guī)模。1包涵體復(fù)性的主要方法稀釋法透析法超濾法層析法? 稀釋法：– 優(yōu)點(diǎn)直接加入水或緩沖液，簡(jiǎn)便 – 缺點(diǎn)是體積增加較大，變性劑稀釋速度太快，不易控制。（2）污染物特性，這里主要是指它在不同介質(zhì)中，不同溫度下的溶解性、荷電性和它可氧化性及可酶解性等。膜的清洗在任何膜分離技術(shù)應(yīng)用中，盡管選擇了較合適的膜和適宜的操作條件，在長(zhǎng)期運(yùn)行中，膜的透水量隨運(yùn)行時(shí)間增長(zhǎng)而下降現(xiàn)象，即膜污染問(wèn)題必然發(fā)生，因此必須采取一定的清洗方法，使膜面或膜孔內(nèi)污染物去除，達(dá)到透水量恢復(fù)，延長(zhǎng)膜壽命的目的。pH值則對(duì)細(xì)胞荷電性產(chǎn)生影響。在濃差極化現(xiàn)象不嚴(yán)重情況下，通?？捎迷黾訅毫?lái)提高透水率，但需用實(shí)驗(yàn)確定其限度，因?yàn)樘岣邏毫?，?huì)使?jié)獠顦O化與膜污染加重，到一定壓力后“凝膠層”形成，透水率不再隨壓力提高而增加，因此操作壓力要合適，以不形成凝膠層為限。通常高的料液流速可以減小濃差極化或沉積層的形成、提高透水量。膜的結(jié)構(gòu)操作參數(shù)的選擇膜的化學(xué)特性膜的化學(xué)特性對(duì)其與被分離溶質(zhì)間的相互作用有決定性影響。組件結(jié)構(gòu)當(dāng)發(fā)酵液中固體含量較低且產(chǎn)物在透過(guò)液中時(shí)，發(fā)酵液首先是要澄清，則選擇組件結(jié)構(gòu)余地較大。為使組分在柱內(nèi)兩相間達(dá)到一次分配平衡所需要的柱長(zhǎng)。① 理論塔板數(shù)（ number of theoretical plate ）:一個(gè)組分流過(guò)色譜柱時(shí)，在兩相間進(jìn)行平衡分配的總次數(shù)。組分隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱后，就在兩相間進(jìn)行分配。應(yīng)用凝膠過(guò)濾層析應(yīng)注意哪些問(wèn)題a、裝柱：均勻、垂直、無(wú)氣泡b、化學(xué)物理穩(wěn)定性c、上樣量：25%1高效液相色譜的柱效用什么表示評(píng)價(jià)柱效：理論塔板數(shù)(N)；理論塔板高度(H)將色譜柱比作蒸餾塔，把一根連續(xù)的色譜柱設(shè)想成由許多小段組成。）– 柱效:理論塔板數(shù)(N)；理論塔板高度(H)– 不對(duì)稱因子(Tf)– 分離度 定義：是色譜圖中相鄰兩峰分離程度的量度。 b、 峰高 ：從色譜峰頂點(diǎn)到基線的距離叫峰高，以h表示 c、 峰底寬度Wb ：在色譜峰兩邊的轉(zhuǎn)折點(diǎn)所畫(huà)的切線與基線相交的截距 d、 半峰寬：峰高一半處的峰寬度，即從峰高的中點(diǎn)作基線的平行線與峰兩側(cè)相交的截距 e、 峰面積A ：峰與基線延長(zhǎng)線所包圍的面積。分子間相互作用力有哪些氫鍵、離子鍵、范德華力、配位鍵、疏水鍵色譜法純化的常用術(shù)語(yǔ)a、基線：當(dāng)沒(méi)有待測(cè)組分進(jìn)入檢測(cè)器時(shí)，在實(shí)驗(yàn)操作條件下，反映檢測(cè)器噪聲隨時(shí)間變化的曲線稱為基線。 b、 根據(jù)以上指標(biāo)計(jì)算所得指標(biāo)： 總活性（U）＝單位體積蛋白活性（U/ml）總體積(ml)； 比活性(U/mg蛋白)＝單位體積蛋白活性（U/ml）247。在進(jìn)行蛋白質(zhì)純化前應(yīng)作哪些工作? 盡量多地了解目標(biāo)蛋白的信息– 一級(jí)結(jié)構(gòu)、二硫鍵、幾條肽鏈– 大小、形狀、等電點(diǎn)、電荷、溶解度– 高級(jí)結(jié)構(gòu)– 特性：含糖否、疏水性、與金屬離子的結(jié)合、結(jié)構(gòu)域– 穩(wěn)定性：熱穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性、時(shí)間穩(wěn)定性– 純化標(biāo)簽蛋白質(zhì)純化總結(jié)表包括哪些指標(biāo)（必考）? 三個(gè)測(cè)定指標(biāo)：蛋白濃度、體積、活性? 五個(gè)計(jì)算指標(biāo)：總活性、總蛋白、比活、得率、純化倍數(shù)a、各組分測(cè)定的指標(biāo)：蛋白濃度（mg蛋白/ml）、單位體積蛋白活性（U/ml）、總體積(ml)；主要有三大類：伴侶蛋白、熱激蛋白70家族和熱激蛋白90家族。缺點(diǎn)：①細(xì)胞生長(zhǎng)在微載體表面，易受到剪切損傷，不適合貼壁不牢的細(xì)胞生長(zhǎng)②微載體價(jià)格較貴，一般不能重復(fù)使用③需要較高的細(xì)胞接種量?！袢菀撞捎霉嘧⑴囵B(yǎng)，從而達(dá)到提高細(xì)胞密度的目的；因細(xì)胞固定表面，不需過(guò)濾系統(tǒng)●當(dāng)細(xì)胞貼壁于生長(zhǎng)基質(zhì)時(shí)，很多細(xì)胞將更有效的表達(dá)一種產(chǎn)品●同一設(shè)備可采用不同的培養(yǎng)液/細(xì)胞的比例?，F(xiàn)在常用的是反饋補(bǔ)料培養(yǎng)。包涵體：措施①上游：融合表達(dá)、分泌表達(dá)、和分子伴侶共表達(dá)等發(fā)酵工藝：降低溫度、調(diào)節(jié)pH、分批誘導(dǎo)②采用傳質(zhì)、傳熱效率高的生物反應(yīng)器，防止乙