【正文】 — 79 —。如果外消旋體已經(jīng)上市，研究者希望開發(fā)單一對映體，則應(yīng)測定該對映體轉(zhuǎn)化為另一對映體的程度是否顯著，以及該對映體單獨(dú)用藥是否與其作為外消旋體組分時(shí)的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)一致，這對豐富和解釋單一對映體研發(fā)的立題依據(jù)、優(yōu)化劑量、制定給藥方案具有重要的意義。對映異構(gòu)體具有幾乎相同的物理性質(zhì)（旋光性除外）和化學(xué)性質(zhì)（在手性環(huán)境中除外），通常需要特殊的手性技術(shù)對它們進(jìn)行鑒定、表征、分離和測定，但生物系統(tǒng)常常很容易區(qū)分它們，并可能導(dǎo)致不同的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)（吸收、分布、代謝、排泄），以及藥理學(xué)、毒理學(xué)效應(yīng)的量或質(zhì)的區(qū)別。對于創(chuàng)新性的藥物，可利用體外藥代動(dòng)力學(xué)手段預(yù)先對動(dòng)物種屬進(jìn)行篩選，以選擇藥物動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)與人體最接近的動(dòng)物，提高試驗(yàn)結(jié)果的臨床預(yù)測價(jià)值。由于動(dòng)物藥代動(dòng)力學(xué)研究是聯(lián)系動(dòng)物研究與人體研究的重要橋梁，動(dòng)物選擇的恰當(dāng)與否是該研究價(jià)值大小的關(guān)鍵。藥代動(dòng)力學(xué)的體外方法學(xué)的應(yīng)用，在不影響或優(yōu)化臨床前研究信息量的同時(shí)，減少了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用，使動(dòng)物倫理學(xué)的實(shí)施逐漸可行。體外方法學(xué)可以通過應(yīng)用不同輔酶、不同選擇性抑制物，不同重組基因純酶，在試驗(yàn)設(shè)計(jì)上，可以彌補(bǔ)動(dòng)物體內(nèi)方法學(xué)的缺陷。隨著體外生物技術(shù)的發(fā)展，為深層次地了解和闡明藥物的某一性質(zhì)以及與藥效和毒性的相關(guān)性，不少藥代動(dòng)力學(xué)的體外方法有效地應(yīng)用于藥物代謝和相互作用評價(jià)，如體外吸收模型（Caco2細(xì)胞模型）、體外肝系統(tǒng)研究、體外轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)等。此外，在進(jìn)行中藥、天然藥物非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，應(yīng)充分考慮中藥、天然藥物所含化學(xué)成分不同于化學(xué)合成藥物的特點(diǎn)，結(jié)合其特點(diǎn)選擇適宜的方法開展體內(nèi)過程或活性代謝產(chǎn)物的研究，為后續(xù)研發(fā)提供參考。若有足夠證據(jù)表明某類結(jié)構(gòu)相似的一類成分中某一個(gè)成分的藥代動(dòng)力學(xué)屬性可以代表該類成分的藥代動(dòng)力學(xué)特征，可從同類成分中選擇一個(gè)代表性成分進(jìn)行測定。對于非單一活性成分但物質(zhì)基礎(chǔ)基本清楚的中藥、天然藥物，其中藥效或毒性反應(yīng)較強(qiáng)、含量較高的成分，一般需要進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)探索性研究。中藥活性成分情況較為復(fù)雜，有些活性成分較為單一，有些物質(zhì)基礎(chǔ)比較清楚但成分較多，有些活性成分復(fù)雜且不清楚。實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)提供放射性回收率，代謝產(chǎn)物鑒定需提供質(zhì)譜和在線或離線放射性檢測儀關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)。應(yīng)根據(jù)放射性代謝產(chǎn)物譜研究獲得的各代謝產(chǎn)物的血漿暴露量百分比和在排泄物中占給藥百分率選擇需要鑒定的代謝產(chǎn)物，并使用HPLC在線或離線放射性檢測儀幫助鑒定工作中對代謝產(chǎn)物的監(jiān)測。為防止原形藥及代謝產(chǎn)物降解，尿液和膽汁收集過程中容器置放于干冰內(nèi)。血液樣本的收集時(shí)間點(diǎn)可根據(jù)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)決定，排泄物一般采樣7~10天（對于長半衰期的藥物，應(yīng)適當(dāng)延長采樣時(shí)間），或采樣至排出的放射性量超過給藥量的90%或連續(xù)2天的排出放射性量小于放射性給藥劑量的1%。為減少實(shí)驗(yàn)誤差，常采用稱重法確定實(shí)際給藥量。Ci/kg）。放射性化合物藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)與非標(biāo)記藥物藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)相似，如劑量、給藥途徑、受試動(dòng)物等等。3H標(biāo)記相對簡單并比14C標(biāo)記化合物比活性高，尤其適合小劑量給藥化合物或早期生物轉(zhuǎn)化研究；同樣，氚標(biāo)記化合物時(shí)也應(yīng)選擇代謝穩(wěn)定的位點(diǎn)作為標(biāo)記位點(diǎn)，不推薦非定位的氚水交換標(biāo)記方式。標(biāo)記碳14化合物時(shí)應(yīng)選擇代謝穩(wěn)定的位點(diǎn)。小分子化學(xué)藥物ADME研究中常用的低能量放射性同位素為碳14（14C）和氚（3H）。 7) 獲得組織分布數(shù)據(jù)。 5) 進(jìn)行肝細(xì)胞、肝微粒體等體外藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)可獲得全面的人和動(dòng)物（如小鼠、大鼠、兔、犬、猴等）體外代謝產(chǎn)物譜、顯示種屬差異、幫助毒理研究動(dòng)物種屬的選擇。 3) 確定血液和排泄物中的代謝產(chǎn)物譜，結(jié)合色譜與質(zhì)譜技術(shù)可利于代謝產(chǎn)物鑒定。低能量放射性同位素標(biāo)記技術(shù)可用于多方面ADME試驗(yàn)中，如: 1) 進(jìn)行原形藥和代謝產(chǎn)物總體和分別的藥動(dòng)學(xué)研究，確定總體的系統(tǒng)暴露和生物利用度等。盡管液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)已大量應(yīng)用于這些試驗(yàn)，但放射性同位素標(biāo)記技術(shù)仍被廣泛使用。因此，在新藥研發(fā)不同階段必須進(jìn)行各種體內(nèi)、體外藥代試驗(yàn)以闡明候選藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）等性質(zhì)。（4）其他相關(guān)信息縮略語列表、參考文獻(xiàn)列表、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程列表。注明缺失樣品的原因，重復(fù)測試的結(jié)果。用于計(jì)算結(jié)果的回歸方程，分析樣品時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線列表，各分析批質(zhì)控樣品測定結(jié)果綜合列表并計(jì)算批內(nèi)和批間精密度、準(zhǔn)確度，各分析批包括的未知樣品，濃度計(jì)算結(jié)果。信息應(yīng)包括日期、時(shí)間、樣品所處條件，以及任何偏離試驗(yàn)計(jì)劃的情況。（3）在日常樣品分析中的基本資料所用樣品（受試物、代謝產(chǎn)物、內(nèi)標(biāo)物）的純度和來源。根據(jù)具體情況提供代表性的色譜圖或質(zhì)譜圖并加以說明。（1）綜合信息項(xiàng)目編號、分析方法編號、分析方法類型、分析方法驗(yàn)證簡化的理由，以及相應(yīng)的項(xiàng)目計(jì)劃編號、標(biāo)題等。生物分析方法建立中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)和QC樣品測試結(jié)果應(yīng)全部記錄并妥善保存，必要時(shí)接受檢查。在分析報(bào)告中，應(yīng)提供成功完成這些試驗(yàn)工作的相關(guān)資料。對于濃度低于定量下限的樣品，在進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)分析時(shí)，在達(dá)到Cmax以前取樣的樣品應(yīng)以零值計(jì)算，在達(dá)到Cmax以后取樣的樣品應(yīng)以無法定量（Not detectable, ND）計(jì)算，以減小零值對AUC計(jì)算的影響。15%之內(nèi)，則可共用一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，否則采用與待測組織樣品相同的空白組織建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。同一天內(nèi)進(jìn)行不同組織樣品測試時(shí)，用代表性組織作為基質(zhì)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，但質(zhì)控樣品應(yīng)采用目標(biāo)空白組織制備。質(zhì)控樣品測定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于15%，最多允許1/3質(zhì)控樣品的結(jié)果超限，但不能在同一濃度中出現(xiàn)。每個(gè)分析批應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，隨行測定高、中、低3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品，每個(gè)濃度至少雙樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測試順序中。每個(gè)未知樣品一般測定一次，必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)測。應(yīng)在生物樣品分析方法驗(yàn)證完成之后開始測試未知樣品。（10）組織分布樣品組織分布樣品由于每種組織樣本數(shù)目少，所以其分析方法只需驗(yàn)證選擇性、日內(nèi)精密度和準(zhǔn)確度等。（9） 微生物學(xué)分析上述分析方法驗(yàn)證的很多參數(shù)和原則也適用于微生物學(xué)分析，但在方法驗(yàn)證中應(yīng)考慮到它們的一些特殊之處。方法驗(yàn)證期間應(yīng)通過檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線定量上限濃度后測定空白樣品來確定其殘留，通常殘留應(yīng)不大于定量下限的20%。稀釋的可靠性應(yīng)該覆蓋試驗(yàn)樣品所用的稀釋倍數(shù)。準(zhǔn)確度和精密度應(yīng)在177。（7） 稀釋可靠性 樣品稀釋不應(yīng)影響準(zhǔn)確度和精密度。還應(yīng)注意儲備液的穩(wěn)定性以及樣品處理后的溶液中分析物的穩(wěn)定性。應(yīng)由至少5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品測試結(jié)果證明。準(zhǔn)確度一般應(yīng)在85%～115%范圍內(nèi)，在定量下限附近應(yīng)在80%～120%范圍內(nèi)。每一濃度每批至少測定5個(gè)樣品，為獲得批間精密度，應(yīng)至少3個(gè)分析批合格。（3）精密度與準(zhǔn)確度要求選擇3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。用至少5個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，應(yīng)使用與待測樣品相同的生物基質(zhì)，定量范圍要能覆蓋全部待測濃度，不允許將定量范圍外推求算未知樣品的濃度。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量范圍根據(jù)所測定物質(zhì)的濃度與響應(yīng)的相關(guān)性，用回歸分析方法（如用加權(quán)最小二乘法）獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。對于色譜法至少要考察6個(gè)不同個(gè)體空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品（注明樣品來