細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及其解決(參考版)
2025-06-10 21:41本頁面
【正文】 溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。 (4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。 (3)請勿將血清置于37℃太久。 45. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生? 我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作: (1)解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如20℃至37℃)，非常容易產(chǎn)生沉淀物。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。 若非必須，可以不需要做熱處理這一步。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清。 42. 為什么要熱滅活血清? 加熱可以滅活補體系統(tǒng)。 若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。 41. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理? 血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的原因之一。 40. 如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損? 將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。若存放于4℃時，請勿超過一個月。 ？ 大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能。 一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。血清蛋白會結(jié)合和滅活一些抗生素。傳代。去除培養(yǎng)基。（培養(yǎng)基中的FBS終止了胰酶的活性。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動。 3. 加入2ml 1x胰酶EDTA（恰好覆蓋細(xì)胞表面）。C 1. 去除培養(yǎng)基。C 25176。下表列出了50mM TrisHC 溶液在4℃，25℃，37℃時，不同PH值。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。 ？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么？ 二價離子的確抑制胰蛋白酶活性?；罴?xì)胞排斥臺盼蘭，因而染成藍(lán)色細(xì)胞是死細(xì)胞。 ？ 用無血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200～2000個/毫升，％的臺盼蘭溶液。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是哺乳類細(xì)胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。 ？ 酚紅在培養(yǎng)基中用作PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L谷氨酰胺供利用。L谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。脫掉氨基后，L谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。C 太久。培養(yǎng)溫度使用錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后， 加以洗滌細(xì)胞和離心。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心
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