pcr常見問題、原因分析及其對(duì)策(參考版)
2025-07-20 16:30本頁面
【正文】 ? 增強(qiáng)劑濃度要適當(dāng) 謝謝 ！ 本公司產(chǎn)品江蘇地區(qū)特約代理 南京天為生物科技有限公司 聯(lián)系電話： 02586073713 84705301 84701501 24小時(shí)服務(wù)熱線： 13057585177 聯(lián)系人：王彤 免費(fèi)技術(shù)支持： 800 810 2177 。 策略之四 ? 使用 PCR增強(qiáng)劑 ? 甲酰胺 ， DMSO， 甘油 ， 甜菜堿等都可充當(dāng) PCR的增強(qiáng)劑 。 ? 遞減 PCR對(duì)于那些不了解引物和目的模板同源性程度的方法更為有用 ， 如 AFLP、 DNA指紋分析等 。 循環(huán)設(shè)在比估算的 Tm高大約 5℃ 的退火溫度下開始 ，然后每個(gè)循環(huán)降低 12℃ ,直到退火溫度低于 Tm 5℃ 。 RACE） 的特異性 。 PCR技術(shù)簡介 PCR常見問題、原因分析及其解決方案 提高 PCR反應(yīng)特異性的策略 提高 反應(yīng)特異性的策略? 巢式 PCR（ NestPCR） 四種策略 ? 遞減 PCR（ TouchDown PCR） ? 熱啟動(dòng) PCR（ HotStart PCR） ? 使用 PCR增強(qiáng)劑 策略之一 ? 巢式 PCR（ NestPCR） P1 P2 P3 P4 ? 巢式 PCR的使用降低了擴(kuò)增多個(gè)靶位點(diǎn)的可能性，因?yàn)橥嗵滓锒蓟パa(bǔ)的靶序列很少。 所用離心管及加樣槍頭等均應(yīng)一次性使用 。 PCR常見問題之二 1. 引物特異性差 2. 模板或引物濃度過高 3. 酶量過多 4. Mg2+濃度偏高 5. 退火溫度偏低 6. 循環(huán)次數(shù)過多 原因 對(duì) 策 1. 重新設(shè)計(jì)引物或者使用巢式 PCR 2. 適當(dāng)降低模板或引物濃度 3. 適當(dāng)減少酶量 4. 降低鎂離子濃度 5. 適當(dāng)提高退火溫度或使用二階段溫度法 6. 減少循環(huán)次數(shù) ? 非特異性擴(kuò)增 PCR常見問題之三 ? 拖尾 ? 現(xiàn)象： 產(chǎn)物在凝膠上呈 Smear狀態(tài) 。 Taq ? TaKaRa： ExTaqTM HotStart Version 蠟封 Promega： TaqBeadTM HotStart
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