【正文】 細(xì)胞系 細(xì)胞類型 種 組 織 培養(yǎng)基 293 成纖維細(xì)胞 人 胚胎腎 MEM, 10% 熱滅活馬血清 IMR90 成纖維細(xì)胞 人 肺 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA W138 成纖維細(xì)胞 人 胚胎肺,3月妊娠 MEM, 10% 胎牛血清 A549 上皮細(xì)胞 人 肺癌 F12K, 10%胎牛血清 A431 上皮型 人 表皮細(xì)胞癌 DMEM, 10% 胎牛血清 BHL100 上皮細(xì)胞 人 乳房 McCoy’5A, 10% 胎牛血清 BeWo 上皮滋養(yǎng)層 人 絨毛癌 F12K, 15%胎牛血清 Caco2 上皮細(xì)胞 人 結(jié)腸腺癌 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA Chang 上皮細(xì)胞 人 肝臟 BME, 10% 小牛血清 HCT15 上皮細(xì)胞 人 結(jié)腸直腸腺癌 RPMI1640, 10% 胎牛血清 HeLa 上皮細(xì)胞 人 子宮頸癌 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA(in suspension, SMEM) HEpG2 上皮細(xì)胞 人 肝細(xì)胞癌 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA HEp2 上皮細(xì)胞 人 喉癌 MEM, 10% 胎牛血清。如小鼠細(xì)胞株多選 RPMI1640 。 (2) 其它實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試，許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。 細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)用選擇 編輯本段回目錄選擇培養(yǎng)基沒有一定的標(biāo)準(zhǔn)，有幾點(diǎn)建議可供參考： (1 ）建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首選的培養(yǎng)基。大腦皮質(zhì)的培養(yǎng)要求在不換液的情形下維持一個(gè)月以上。例如培養(yǎng)膠質(zhì)細(xì)胞時(shí)，要經(jīng)常換液以使其增殖達(dá)到最大。細(xì)胞在低溫時(shí)可有較長時(shí)間的忍耐限度，但當(dāng)溫度升至39℃時(shí)，幾小時(shí)內(nèi)即死亡。當(dāng)培養(yǎng)物必須要長期保持在孵箱中時(shí)，應(yīng)采用較少培養(yǎng)基的瓶、皿，且將蓋子蓋緊以避免蒸發(fā)，或采用相應(yīng)的按比例供空氣的孵箱。 高濕度可避免培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的蒸發(fā)，保持孵箱中的濕度通常是在箱底部放上一大盆水，這水應(yīng)該經(jīng)常換，乘水容器應(yīng)經(jīng)常消毒以防霉菌生長。對于某些細(xì)胞的生長，包括神經(jīng)原，應(yīng)使氧含量處在一個(gè)較低的水平。 六、培養(yǎng)的保持 培養(yǎng)物是應(yīng)該保持在孵箱中的。阿糖胞苷在很低的濃度下，也會(huì)對某些種類的神經(jīng)元有毒性，可以造成特定神經(jīng)原的死亡。另外，阿糖胞苷也常被使用，其使用濃度為5～50μM。有兩種抗有絲分裂劑常用于神經(jīng)元的培養(yǎng)：Fluorodexyuridine，是胸苷合成酶抑制劑，一般使用濃度為～10μM。在CNS神經(jīng)元的培養(yǎng)中抗有絲分裂劑常常在星形細(xì)胞形成單層后加入，此時(shí)，星形細(xì)胞由于接觸抑制而終止了DNA的合成（即細(xì)胞停止增殖），它們不會(huì)因抗有絲分裂劑的加入而死亡。但是，某些細(xì)胞在它的細(xì)胞周期的某些時(shí)相時(shí)對抗有絲分裂劑是不敏感的。這樣的試劑常常用于神經(jīng)元的培養(yǎng)，以消除或減少非神經(jīng)元群體。 五、抗有絲分裂劑 某些DNA合成抑制劑對分裂細(xì)胞有毒，但對沒有DNA合成的細(xì)胞僅有輕微影響。其次，盡管認(rèn)為抗生素對細(xì)胞代謝的影響可忽略，但最好避免使用它們，以免細(xì)胞生長環(huán)境的不穩(wěn)定。以上這些試劑對霉菌與酵母菌的污染均無效。在一些實(shí)驗(yàn)室里，它們常規(guī)加入所有的培養(yǎng)基中。 四、抗生素 在細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的抗生素是青霉素（常用濃度是25~100ui/ml）與鏈霉素（25~100μg/ml）。這一結(jié)果的普遍性尚待進(jìn)一步的證實(shí)，但敲除單一的營養(yǎng)因子基因之后，沒有表現(xiàn)出對CNS大多類群的神經(jīng)元的存活產(chǎn)生太大影響，這一觀察與上述的事實(shí)是一致的。因此，大多數(shù)影響運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元及視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞的營養(yǎng)因子僅僅只能支持神經(jīng)元的亞群，而神經(jīng)元的最佳存活要求諸多因子的結(jié)合。例如，至少發(fā)現(xiàn)了15種不同的分子可在離體條件下增加神經(jīng)元的存活。 現(xiàn)有的證據(jù)已表明，CNS神經(jīng)元的營養(yǎng)需求比PNS的更復(fù)雜。大鼠背根神經(jīng)節(jié)含有好幾種細(xì)胞群體，其中小細(xì)胞群、包括nocioceptive cell，對NGF有反應(yīng)，但其他神經(jīng)元，例如大細(xì)胞群中的proprioception 卻對不同的神經(jīng)營養(yǎng)因子有反應(yīng)。不過，這些模型也有局限性。相應(yīng)的，低濃度的營養(yǎng)因子可能用來檢查表現(xiàn)型，例如對自由基或氨基酸的毒性刺激劑量的反應(yīng)。盡管在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)習(xí)慣了營養(yǎng)因子的最大效應(yīng)使用量，其他營養(yǎng)因子的協(xié)同效應(yīng)在亞優(yōu)劑量下更容易觀察到。在離體與活體營養(yǎng)需求之間的差別或許可以用在不同環(huán)境中NGF含量和分布的不同來解釋，培養(yǎng)中的NGF彌散在整個(gè)環(huán)境中，而在活體內(nèi)，大部分區(qū)域的含量是有限的。然而，交感神經(jīng)元也對來自膠質(zhì)細(xì)胞的神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）有反應(yīng)，還有NTLIF與CNTF也對其有作用。例如，大鼠交感神經(jīng)元僅需NGF即能存活，在其生存期間，這些神經(jīng)元可在嚴(yán)格局限條件下生長好幾個(gè)月（即在無血清培養(yǎng)基中、或缺乏膠質(zhì)細(xì)胞、或在化學(xué)限定基質(zhì)上）。不過，只有少數(shù)對這種蛋白質(zhì)有反應(yīng)的細(xì)胞類型的細(xì)胞才能生長。 滿足神經(jīng)元營養(yǎng)需求的第二條途徑是向培養(yǎng)基中加入生長因子。因?yàn)榕囵B(yǎng)基的條件在細(xì)胞的較低密度時(shí)變的不夠有效。但是，這種對營養(yǎng)（生長）因子自身倚賴性亦有弊端，因?yàn)橥ǔＴ诨旌霞?xì)胞群體中細(xì)胞很難有同比例增殖，某些細(xì)胞會(huì)因生長條件的貧乏而受限制。如果細(xì)胞混合物能在高密度時(shí)生長，所需的生長因子便會(huì)積累到可觀的數(shù)值，尤其當(dāng)培養(yǎng)基很少變化時(shí)。 生長因子絕大多數(shù)哺乳類胚胎神經(jīng)元有嚴(yán)格的營養(yǎng)要求，若不能提供適宜的生長因子或合適的因子組分，將會(huì)使絕大多數(shù)神經(jīng)元在體外培養(yǎng)的數(shù)天中死亡。上述這些影響在高密度培養(yǎng)時(shí)變小，特別是神經(jīng)元與膠質(zhì)共培養(yǎng)時(shí)，它們可以吸收和代謝神經(jīng)元毒性物質(zhì)如谷氨酸 應(yīng)該注意，盡管無血清培養(yǎng)基是有化學(xué)限定性的，但在培養(yǎng)過程中它仍有變動(dòng)，培養(yǎng)起始時(shí)可能有些物質(zhì)缺乏，而后細(xì)胞的產(chǎn)物可能積累，從而使培養(yǎng)基的成分改變。因而，無血清培養(yǎng)基的配方常含有抗氧化劑的試劑。過氧化物酶以及超氧化物歧化酶可阻止培養(yǎng)基中過氧化物和超氧化物的累積，有報(bào)道講可以促進(jìn)低密度培養(yǎng)細(xì)胞的存活。 血清中含有的組分，例如血清蛋白，可作為代謝毒物清除劑使用并能聚集于培養(yǎng)基中。更為重要的是，它們可用來檢測生長因子以及其他促進(jìn)神經(jīng)元存活或生長的因子，或者用來檢測那些可保護(hù)神經(jīng)元免遭環(huán)境毒物損傷的制劑。 未料到的是上述配方構(gòu)成的培養(yǎng)基可以支持神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系快速增殖，隨后又發(fā)展了能支持原代培養(yǎng)的各種神經(jīng)元生長的培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基在許多實(shí)驗(yàn)室里已取代了有血清培養(yǎng)。胰島素和胰島素樣生長因子對于大多數(shù)類型細(xì)胞的存活和生長有重要作用，硒是谷胱甘肽產(chǎn)生的合作因子，可能有助于過氧化物和超氧化物的水解，有報(bào)道說還能防止細(xì)胞的光照損傷。其工作基礎(chǔ)是用合適的激素、營養(yǎng)物和促貼壁的物質(zhì)的組合置換培養(yǎng)基中的成分，最后找到了適合大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)的試劑配方，該配方稱為N2，專門用于神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)，最早是用在B104大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的培養(yǎng)。大多數(shù)試劑商提供樣品，所滿意的批號即可選用，這樣可以一次得到足夠一年用量的血清，血清在使用前通常在56℃加熱30分鐘，這一過程稱為滅活。用大鼠進(jìn)行神經(jīng)元培養(yǎng)的某些研究者喜歡使用同型血清；人類的胎盤血清，亦曾用于神經(jīng)組織的器官類型的培養(yǎng)，也用在一些特殊培養(yǎng)種類中。而馬血清常常用來作有絲分裂后的神經(jīng)元培養(yǎng)。特殊用途的血清來源須用經(jīng)驗(yàn)確定，廣泛應(yīng)用的血清種類有馬血清與胎牛血清。 RT )二、血清 細(xì)胞在單純的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中不能存活，在特殊類型的細(xì)胞培養(yǎng)中必須提供某些痕量營養(yǎng)物質(zhì)及生長因子才能使細(xì)胞得以生長并維持生長狀態(tài)。用于免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)、透析或其他。 RT Hanks’ Solution ① 05905100g ( for 1L) Nissui 不含碳酸氫鈉。 RT Dulbecco’s PBS㈠ 05913100g ( for 1L) Nissui 能高壓滅菌（121℃，15分鐘）或膜過濾滅菌。由于是無血清配方，減少了牛血清各批次間成分不同而對試驗(yàn)的干擾。 RT SFM101 Liquid 06654500ml Nissui 即用型培養(yǎng)基，無須添加其他物質(zhì)。 RT RPMI 1640 Liquid 06652500ml Nissui 含L谷氨酸、碳酸氫鈉。 RT Eagle’s MEM Liquid 06650500ml Nissui 含卡那霉素、L谷氨酸、碳酸氫鈉。UC Medium 202是培養(yǎng)CHO細(xì)胞的低濃度血清培養(yǎng)基，用于細(xì)胞增殖和生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)物。低蛋白含量，使得后期對細(xì)胞產(chǎn)物如單克隆抗體和生物活性物質(zhì)的收集和純化更加便利。 RT SFM101 05963基礎(chǔ)培養(yǎng)基 1 / 補(bǔ)充物A 110ml(凍干) / 補(bǔ)充物B 15ml ( for 1L) Nissui SFM101是一種無血培養(yǎng)基，對細(xì)胞培養(yǎng)和幫助小鼠雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)抗體作用顯著。能高壓滅菌（121℃，15分鐘）。 RT RPMI 1640 Medium ② 0689100g 。 0682500g ( for 1L) Nissui 不含碳酸氫鈉。該培養(yǎng)基不能增殖細(xì)胞，但能用于病毒學(xué)研究中的細(xì)胞培養(yǎng)，并且可用于生產(chǎn)脊髓灰質(zhì)炎疫苗。 RT Medium 199 0683100g 。 RT Ham’s F12 Medium 05910100g ( for 1L) Nissui 不含碳酸氫鈉。能高壓滅菌（121℃，15分鐘）。 RT Eagle’s MEM Amino Acids and Vitamins Medium 0590420g ( for 1L) Nissui 該培養(yǎng)基用作25倍濃縮液，加熱至37℃并溶解，可用于少數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)、在半固態(tài)瓊脂上形成細(xì)胞群落或斑塊。用于懸浮培養(yǎng)。能高壓滅菌（121℃，15分鐘）。能高壓滅菌（121℃，15分鐘）。特別有助于HeLa、L和其他細(xì)胞系的生長。 00680500g ( for 1L) Nissui 含有卡那霉素，不含L谷氨酸、碳酸氫鈉。 該培養(yǎng)基廣泛用于病毒研究、原生細(xì)胞、單細(xì)胞培養(yǎng)。能高壓滅菌（121℃，15分鐘）。該培養(yǎng)基廣泛用于病毒研究、原生細(xì)胞、單細(xì)胞培養(yǎng)。 0316500g ( for 1L) Nissui 不含碳酸氫鈉。 RT αMEM ② 05922101g ( for 1L) Nissui 不含核（糖核）苷、脫氧核（糖核）苷、碳酸氫鈉。05921102g ( for 1L) Nissui 含核（糖核）苷、脫氧核（糖核）苷，不含碳酸氫鈉。MEM 細(xì)胞培養(yǎng) 原代傳遞用組織(細(xì)胞)培養(yǎng)產(chǎn)品 αMEM ① (日水培養(yǎng)基 NISSUI這一培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)是明顯的，特別是在保持較高CO2有困難時(shí)，例如在長時(shí)間的顯微操作及生理學(xué)研究中。顯然，溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細(xì)胞生長是重要的。 原則上，HEPES作為緩沖劑可用來代替碳酸氫鹽，以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制。MEM與F12均要用5%的CO2來平衡，DMEM含更高濃度的NaCO3，要用10%的C