【正文】 包括了來自不同生長因子家族的代表。這一結(jié)果的普遍性尚待進(jìn)一步的證實(shí)，但敲除單一的營養(yǎng)因子基因之后，沒有表現(xiàn)出對(duì)CNS大多類群的神經(jīng)元的存活產(chǎn)生太大影響，這一觀察與上述的事實(shí)是一致的。現(xiàn)已知少突膠質(zhì)細(xì)胞的長期存活也需要眾多營養(yǎng)因子的相互作用。 四、抗生素 在細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的抗生素是青霉素（常用濃度是25~100ui/ml）與鏈霉素（25~100μg/ml）。這兩種抗生素?；旌鲜褂谩Ｔ谝恍?shí)驗(yàn)室里，它們常規(guī)加入所有的培養(yǎng)基中。慶大霉素（10~100μg/ml）通常有廣譜抗菌效應(yīng)，并具有溶液穩(wěn)定性，故也被一些實(shí)驗(yàn)室使用，特別是當(dāng)有低水平的污染存在時(shí)更是這樣。以上這些試劑對(duì)霉菌與酵母菌的污染均無效。 盡管很多實(shí)驗(yàn)室在細(xì)胞系的培養(yǎng)基中常規(guī)加入抗生素作繼代培養(yǎng)，但仍建議不要在原代培養(yǎng)中加入抗生素，其理由之一是獲得的細(xì)胞是無菌的，原代培養(yǎng)時(shí)的細(xì)菌污染很少發(fā)生。其次，盡管認(rèn)為抗生素對(duì)細(xì)胞代謝的影響可忽略，但最好避免使用它們，以免細(xì)胞生長環(huán)境的不穩(wěn)定。最重要的是要意識(shí)到培養(yǎng)中主要污染物的類型，它們通常暗示了問題的來源。 五、抗有絲分裂劑 某些DNA合成抑制劑對(duì)分裂細(xì)胞有毒，但對(duì)沒有DNA合成的細(xì)胞僅有輕微影響。由于神經(jīng)元通常缺乏DNA合成能力，因此對(duì)抗有絲分裂劑沒有多大反應(yīng)。這樣的試劑常常用于神經(jīng)元的培養(yǎng)，以消除或減少非神經(jīng)元群體。若要?dú)⑺浪械姆巧窠?jīng)元細(xì)胞，可以先加入血清或生長因子來保證有高比例的非神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行DNA合成，此時(shí)再加入抗有絲分裂劑。但是，某些細(xì)胞在它的細(xì)胞周期的某些時(shí)相時(shí)對(duì)抗有絲分裂劑是不敏感的。不過，可以重復(fù)的將抗有絲分裂劑使用于增殖的細(xì)胞群體。在CNS神經(jīng)元的培養(yǎng)中抗有絲分裂劑常常在星形細(xì)胞形成單層后加入，此時(shí)，星形細(xì)胞由于接觸抑制而終止了DNA的合成（即細(xì)胞停止增殖），它們不會(huì)因抗有絲分裂劑的加入而死亡。原代培養(yǎng)中用這種方法阻止成纖維細(xì)胞的過度增殖是十分必要的。有兩種抗有絲分裂劑常用于神經(jīng)元的培養(yǎng)：Fluorodexyuridine，是胸苷合成酶抑制劑，一般使用濃度為～10μM。尿苷（10μM）也常使用，可阻止不分裂細(xì)胞的RNA合成。另外，阿糖胞苷也常被使用，其使用濃度為5～50μM。使用任何一種抗有絲分裂劑，都必須考慮它的神經(jīng)原毒性，應(yīng)該確定最低效應(yīng)的使用濃度。阿糖胞苷在很低的濃度下，也會(huì)對(duì)某些種類的神經(jīng)元有毒性，可以造成特定神經(jīng)原的死亡。其他的抗有絲分裂劑尚未表現(xiàn)出這種毒性。 六、培養(yǎng)的保持 培養(yǎng)物是應(yīng)該保持在孵箱中的。孵箱可以自動(dòng)將O2與CO2混合很快達(dá)到培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)要求，空氣中的氧濃度比血液和腦脊液中要高得多。對(duì)于某些細(xì)胞的生長，包括神經(jīng)原，應(yīng)使氧含量處在一個(gè)較低的水平?？梢杂梅跸溥_(dá)到這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，但這樣的孵箱并未廣泛使用。 高濕度可避免培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的蒸發(fā)，保持孵箱中的濕度通常是在箱底部放上一大盆水，這水應(yīng)該經(jīng)常換，乘水容器應(yīng)經(jīng)常消毒以防霉菌生長。若孵箱曾被霉菌孢子嚴(yán)重污染過，那么要想完全去除污染則會(huì)非常困難。當(dāng)培養(yǎng)物必須要長期保持在孵箱中時(shí)，應(yīng)采用較少培養(yǎng)基的瓶、皿，且將蓋子蓋緊以避免蒸發(fā)，或采用相應(yīng)的按比例供空氣的孵箱。 溫度的精確調(diào)節(jié)應(yīng)定期檢查，孵箱溫度常設(shè)置為37℃或較低溫度。細(xì)胞在低溫時(shí)可有較長時(shí)間的忍耐限度，但當(dāng)溫度升至39℃時(shí)，幾小時(shí)內(nèi)即死亡。 維持培養(yǎng)物的最佳方案常常改變。例如培養(yǎng)膠質(zhì)細(xì)胞時(shí)，要經(jīng)常換液以使其增殖達(dá)到最大。而在培養(yǎng)某些神經(jīng)原時(shí)，則要求盡可能少的換液，神經(jīng)原在兩次換液之間的條件下長的最好。大腦皮質(zhì)的培養(yǎng)要求在不換液的情形下維持一個(gè)月以上。另一方面，象海馬神經(jīng)原那樣的細(xì)胞，倚賴于條件培養(yǎng)基，若換液太頻繁細(xì)胞就會(huì)衰退，此時(shí)，可采用1/3或1/2換液的方式。 細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)用選擇 編輯本段回目錄選擇培養(yǎng)基沒有一定的標(biāo)準(zhǔn)，有幾點(diǎn)建議可供參考： (1 ）建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首選的培養(yǎng)基?？梢圆殚唴⒖嘉墨I(xiàn)，或在購買細(xì)胞株時(shí)咨詢。 (2) 其它實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試，許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。 (3) 根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來選擇培養(yǎng)基。如小鼠細(xì)胞株多選 RPMI1640 。 (4) 用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞，觀察其生長狀態(tài)，可以用生長曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。 細(xì)胞系 細(xì)胞類型 種 組 織 培養(yǎng)基 293 成纖維細(xì)胞 人 胚胎腎 MEM, 10% 熱滅活馬血清 IMR90 成纖維細(xì)胞 人 肺 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA W138 成纖維細(xì)胞 人 胚胎肺,3月妊娠 MEM, 10% 胎牛血清 A549 上皮細(xì)胞 人 肺癌 F12K, 10%胎牛血清 A431 上皮型 人 表皮細(xì)胞癌 DMEM, 10% 胎牛血清 BHL100 上皮細(xì)胞 人 乳房 McCoy’5A, 10% 胎牛血清 BeWo 上皮滋養(yǎng)層 人 絨毛癌 F12K, 15%胎牛血清 Caco2 上皮細(xì)胞 人 結(jié)腸腺癌 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA Chang 上皮細(xì)胞 人 肝臟 BME, 10% 小牛血清 HCT15 上皮細(xì)胞 人 結(jié)腸直腸腺癌 RPMI1640, 10% 胎牛血清 HeLa 上皮細(xì)胞 人 子宮頸癌 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA(in suspension, SMEM) HEpG2 上皮細(xì)胞 人 肝細(xì)胞癌 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA HEp2 上皮細(xì)胞 人 喉癌 MEM, 10% 胎牛血清。或RPMI1640, 10% 胎牛血清 HT1080 上皮細(xì)胞 人 纖維肉瘤 MEM, 10% HI 胎牛血清 和 NEAA HT29 上皮細(xì)胞 人 結(jié)腸腺癌 McCoy’5A, 10% 胎牛血清 JEG2 上皮細(xì)胞 人 絨毛膜癌 MEM, 10% 胎牛血清 MCF7 上皮細(xì)胞 人 乳腺癌 MEM, 10% 胎牛血清 NEAA, 10ug/ml 胰島素 KB 上皮細(xì)胞 人 口腔癌 MEM, 10% 胎牛血清和NEAA Saos2 上皮細(xì)胞 人 骨肉瘤 McCoy’5A, 15% 胎牛血清 WI38 上皮細(xì)胞 人 胚胎肺 BME, 10% 胎牛血清 WISH 上皮細(xì)胞 人 羊膜 BME, 10% 胎牛血清 WS1 人 胚胎皮膚 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA HUVEC 內(nèi)皮細(xì)胞 人 臍帶 F12K, 10% 胎牛血清 和 肝素鹽 100 ug/ml EB3 淋巴樣 人 Burkitt淋巴瘤 RPMI1640, 10% 胎牛血清 Raji 淋巴樣 人 Burkitt淋巴瘤 RPMI1640, 10% 胎牛血清 IM9 成淋巴細(xì)胞 人 骨髓瘤病人骨髓 RPMI1640, 10% 胎牛血清 Daudi 成淋巴細(xì)胞 人 淋巴瘤病人血液 RPMI1640, 10% 胎牛血清 H9 成淋巴細(xì)胞 人 T細(xì)胞淋巴瘤 RPMI1640, 20% 胎牛血清 HL60 成淋巴細(xì)胞 人 早幼粒細(xì)胞白血病 RPMI1640, 20% 胎牛血清 Jurkat 成淋巴細(xì)胞 人 T細(xì)胞白血病 RPMI1640, 10% 胎牛血清 K562 成淋巴細(xì)胞 人 骨髓性的白血病 RPMI1640, 10% 胎牛血清 U937 淋巴樣 人 組織細(xì)胞淋巴瘤 RPMI1640, 10% 胎牛血清 KG1 骨髓白細(xì)胞 人 紅白血病病人骨髓 IMDM, 20% 胎牛血清 McCoy 成纖維細(xì)胞 小鼠 未知 MEM, 10% 胎牛血清 BALB/3T3 成纖維細(xì)胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% 胎牛血清 3T6 成纖維細(xì)胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% 胎牛血清 A9 成纖維細(xì)胞 小鼠 結(jié)締組織 DMEM+10% 胎牛血清+6硫鳥嘌呤（30μg/ml）+2,6二氨基嘌呤（30μg/ml） AtT20 上皮細(xì)胞 小鼠 垂體腫瘤 F10, 15% % 胎牛血清 Clone M3 上皮細(xì)胞 小鼠 黑素瘤 F10, 15% % 胎牛血清 I10 上皮細(xì)胞 小鼠 睪丸癌 F10, 15% % 胎牛血清 Y1 上皮細(xì)胞 小鼠 腎上腺瘤 F10, 15% % 胎牛血清 WEHI3b 類巨噬細(xì)胞 小鼠 骨髓單核細(xì)胞白血病 DMEM, 10% 胎牛血清 ESD3 胚胎型 小鼠 多能胚胎干細(xì)胞 DMEM+ 15% 胎牛血清+100μmol/L 2巰基丙醇 F9 胚胎型至內(nèi)胚層 小鼠 睪丸畸胎癌 DMEM, 15% 胎牛血清 BHK21 成纖維細(xì)胞 倉鼠 腎 GMEM, 10% 胎牛血清 或MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA HaK 上皮細(xì)胞 倉鼠 腎 BME, 10% 小牛血清 CHOK1 上皮細(xì)胞 倉鼠 卵巢 F12, 10%胎牛血清 AR42J . 大鼠 胰腺腫瘤 Ham’sF12K, 20%胎牛血清 BRL3A . 大鼠 肝 Coon’sF12K, 5%胎牛血清 Clone 9 上皮細(xì)胞 大鼠 肝臟 F12K, 10%胎牛血清 H4ⅡEC3 上皮樣 大鼠 肝癌 F12K, 10%胎牛血清` GH1 上皮細(xì)胞 大鼠 垂體腫瘤 F10, 15% % 胎牛血清 GH3 上皮細(xì)胞 大鼠 垂體腫瘤 F10, 15% % 胎牛血清 IEC6 上皮樣 大鼠 正常小腸 DMEM, 5% 胎牛血清,L2 上皮細(xì)胞 大鼠 肺 F12K, 10%胎牛血清 XC 上皮細(xì)胞 大鼠 肉瘤 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA LLCWRC 256 上皮細(xì)胞 大鼠 癌 199培養(yǎng)基, 5% 馬血清 Jensen 成纖維細(xì)胞 大鼠 肉瘤 McCoy’s 5A, 5% 胎牛血清 Rat2(TK) 成纖維細(xì)胞樣 大鼠 Rat2(TK)克隆衍生 DMEM, 5% 胎牛血清,30μg/ml BrdU PC12 NGF誘導(dǎo)的神經(jīng)表型細(xì)胞 大鼠 腎上腺嗜鉻細(xì)胞 RPMI1640, 10% 胎牛血清 L6 大鼠 大鼠 骨骼肌成肌細(xì)胞 DMEM, 10% 胎牛血清 D17 上皮細(xì)胞 狗 骨肉瘤 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA BT 成纖維細(xì)胞 牛 鼻甲骨細(xì)胞 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA MARC145 猴 猴腎 MEM或DMEM, 10%小牛血清 CV1 成纖維細(xì)胞 猴 非洲綠猴腎 MEM, 10% 胎牛血清 COS1 成纖維細(xì)胞 猴 腎 MEM, 10% 胎牛血清 COS3 成纖維細(xì)胞 猴 腎 MEM, 10% 胎牛血清 COS7 成纖維細(xì)胞 猴 非洲綠猴腎 MEM, 10% 胎牛血清 Vero 成纖維細(xì)胞 猴 非洲綠猴腎 199培養(yǎng)基，5% 胎牛血清 B958 成淋樣 絨猴 EB病毒感染的白血病細(xì)胞 RPMI1640, 10% 胎牛血清 CRFK 上皮細(xì)胞 貓 腎 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEA