細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)-資料下載頁
2024-08-24 20:38本頁面
【正文】 ?細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)常見的污染，即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入抗生素也可能因?yàn)椴僮髟蛞鹞廴?。最常見的有革蘭氏陽性菌。此污染培養(yǎng)液會(huì)發(fā)生混濁， PH值會(huì)發(fā)生改變。細(xì)胞胞內(nèi)顆粒較多，嚴(yán)重的細(xì)胞脫落死亡。 ?真菌污染 ?真菌污染也是細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染，此污染可以看見到培養(yǎng)液中漂浮著 白色或淺黃色的小點(diǎn)，有的散在生長，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁 ，顯微鏡下可看見絲狀，管狀或樹枝狀的菌絲排列縱橫交錯(cuò)在細(xì)胞之間或培養(yǎng)液中，有的呈鏈狀排列。真菌污染后細(xì)胞生長變慢，但最后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。 ?支原體污染 ?支原體是介于細(xì)菌與病毒之間能獨(dú)立生活的最小微生物，最小直徑為 ， 一般過濾除菌可以除掉，光鏡下很難看見它的結(jié)構(gòu) 。支原體污染開始不容易發(fā)現(xiàn)，能在偏堿條件下生存，對青霉素有抗性，多吸附于細(xì)胞表面或散在細(xì)胞之間。電鏡下可見其有三呈結(jié)構(gòu)。細(xì)胞受到支原體污染后，部分敏感細(xì)胞可見細(xì)胞生長增值變慢，部分貼壁細(xì)胞變圓，從培養(yǎng)瓶脫落，但多數(shù)細(xì)胞污染后無明顯變化。 病毒污染 采用組織細(xì)胞培養(yǎng)法生產(chǎn)疫苗，如果沒有除掉潛在病毒組織培養(yǎng)物，就會(huì)產(chǎn)生病毒污染 非同種細(xì)胞污染 細(xì)胞培養(yǎng)操作中各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yán)格分開或操作不當(dāng)，往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染 污染判斷 污染的鑒別，細(xì)菌 .真菌污染的檢測 肉眼觀察 細(xì)菌、真菌污染常在傳代，換液，加樣等開放性操作后發(fā)生，而且增生很快，若有污染在 48小時(shí)內(nèi)可以明顯觀察到，如培養(yǎng)液混濁，略加振蕩有很多漂浮物漂起。 鏡下觀察 倒置顯微鏡下的高倍鏡下可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒漂浮，即為細(xì)菌污染。若細(xì)胞之間有絲狀，管狀，樹枝狀或卵形的物質(zhì)常為真菌污染。 污染的清除和預(yù)防 培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，可以棄掉。若污染細(xì)胞價(jià)值達(dá)，難重新得到，可以采取以下方法清除 （ 1）使用高濃度抗生素 抗生素對殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)使用效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥好。 預(yù)防用藥一般用雙抗青霉素100U/ml加鏈霉素 100Ug/ml，污染后用藥量為常用量的 10倍，用高濃度抗生素液反復(fù)清洗細(xì)胞，后用高濃度培養(yǎng)液培養(yǎng) 2448小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液 。 （ 2） 加溫 將污染的細(xì)胞放在 41度培養(yǎng) 18小時(shí)可以殺死支原體，但對細(xì)胞有不良影響 污染的預(yù)防 ，培養(yǎng)液用前要仔細(xì)檢查是否有沉淀。操作室要定期清潔消毒滅菌。 ，稍微不注意就有可能帶來污染 （ 1）操作者要細(xì)心穩(wěn)重，操作技術(shù)要熟練。進(jìn)細(xì)胞室要用75%噴手消毒，進(jìn)入后關(guān)好門， 盡量少走動(dòng) 。 （ 2）操作者 動(dòng)作要輕 ，必須在操作臺(tái)內(nèi)點(diǎn)上酒精燈換液或操作時(shí)要注意對培養(yǎng)液瓶，細(xì)胞瓶的瓶口轉(zhuǎn)動(dòng)火焰上燒，搶頭，吸管不要碰到不潔物。 （ 3）操作盡量 不要說話 ，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。 （ 4）操作過程要經(jīng)常更換吸管或搶頭， 切勿一根吸管操作到底。 一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手或其他污染品應(yīng)棄去。 （ 5）實(shí)驗(yàn)完畢及時(shí)收拾，保持實(shí)驗(yàn)室清潔整潔，最后用酒精噴臺(tái)面并擦拭。 （ 6） 防止細(xì)胞交叉污染 在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分，做好做上標(biāo)記便于辨別。并按順序操作，避免一起進(jìn)行時(shí)易發(fā)生混亂。 （ 7）在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)，注射器和吸管不要觸及培養(yǎng)瓶瓶口，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞 細(xì)心、用心、專心、信心 是培養(yǎng)細(xì)胞成功的關(guān)鍵
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