細胞培養(yǎng)實驗指導(dǎo)大全-資料下載頁
2025-08-05 16:30本頁面
【正文】 皿的 底面。 制備細胞爬片 Wenzhou Medical College 倒置顯微鏡下觀察，當(dāng)細胞增殖到合適的 密度后取出培養(yǎng)皿中止培養(yǎng)（一般為 35 天）。 傾去培養(yǎng)液，加 PBS（ PH ～ ）洗 滌細胞爬片 2 次，每次 1 min。 加 10%中性甲醛（或 20℃ 預(yù)冷的丙酮） 固定 10～ 15min。 吸除固定液，加 PBS 再洗滌細胞爬片 2 次，每次 1 min。 制備細胞爬片 Wenzhou Medical College 置于室溫下干燥 1小時，如暫不染色，先放在 20 冰箱中保存。 取出蓋玻片時注意蓋玻片的正反面（有細胞的為正面）。 細胞爬片的免疫化學(xué)染色法 Wenzhou Medical College 在細胞爬片上加 % Triton X100 水溶液處理 15min。（若是要檢測的抗原表達于胞漿，此步可考慮省略） 吸除 % Triton X100，加3%H2O2 孵育 10min。 吸除 3%H2O2，加 2%牛血清白蛋白封閉 30～ 60min。 PBS 洗 5min。 細胞爬片的免疫化學(xué)染色法 Wenzhou Medical College 吸除 PBS，分別滴加相應(yīng)的一抗（用含 1%牛血清白蛋白的 PBS 液稀釋到合適滴度），置于 37℃ 孵育 1h，或置于 4℃ 冰箱中過夜。陰性對照片此步用PBS 替代一抗。 吸去一抗， PBS 漂洗 3 次，每次5min。滴加山羊抗鼠的 IgG 抗體 HRP多聚體， 37℃ 孵育 30min。 細胞爬片的免疫化學(xué)染色法 Wenzhou Medical College PBS 漂洗 3 次，每次 5min。新鮮配制 DAB 顯色液，滴加后作用 3～5min，置于顯微鏡下觀察染色結(jié)果。 雙蒸水漂洗后，滴加蘇木精染液，染色 10min。 雙蒸水漂洗后，滴加 %HCl70%Ethanol，作用 1min 以分色。 細胞爬片的免疫化學(xué)染色法 Wenzhou Medical College 雙蒸水漂洗后，滴加 1%NaHCO3 作用 3～ 5min 以藍化細胞核。 雙蒸水漂洗 1min，然后將細胞爬片經(jīng) 70%、 80%、 95%、 100%、 100%乙醇 各 1～ 2min 梯度脫水。 1入二甲苯透明 2 次，每次 5min。 1室溫下晾干，用中性樹膠封片。 1顯微鏡下觀察染色結(jié)果，并拍照。 Wenzhou Medical College 歡迎大家來中心！ 謝 謝！
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